滤纸酶（FPA）活性检测试剂盒说明书-微量法UPLC-MS-4229

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页滤纸酶（FPA）活性检测试剂盒说明书UPLC-MS-4229100T/48S

微量法试剂名称规格保存条件试剂一液体35mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体60mL×1瓶2-8℃保存滤纸条25mg×100条常温保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：10mg1mL10mg/mL2-8℃两周。纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖一类酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系。以不溶性纤维素如滤纸为底物测定的纤维素酶称为滤纸酶，研究滤纸酶活力对纤维素酶总体酶活力的研究的有着重要意义。FPA水解滤纸产生还原糖，还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得FPA活性。Filter

ReducingSugarReducingSugar+3,5-DinitrosalicylicAcid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。/96EP管2。一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）(mL)1﹕5~100.11mL4℃，12000rpm10min（104个（mL）500~1000﹕1（5001mL（300w，超声3732000pm离心10（）二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。210mg/mL、0.4、0.30.2mg/mL3、标准品稀释表序号稀释前浓度（mg/mL）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL）稀释后浓度（mg/mL）110100900121160400.831120800.6411001000.551801200.461601400.371401600.2实验中每个标准管需100µL标准溶液。4、取100L10n（5、操作表：(在2mL离心管中操作，其中对照管与测定管用有滤纸的EP管，空白管与标准管无需滤纸)试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管煮沸样本100--样本-100--每支EP--标准溶液--100-蒸馏水100试剂一250250250250混匀，50℃水浴锅中准确反应30min-试剂二4004004004005（0nm为AAAAΔA测定=A-AΔA=A-A空1-2三、FPA活性计算1、标准曲线的绘制：2、根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。3、FPA活性的计算：酶活定义：每mg蛋白每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖为1个酶活力单位。FPA酶活（U/mgprot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）÷T=0.0333x÷Cpr酶活定义：每g样品每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖为1个酶活力单位。（U/g酶活定义：每104个细胞每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖为1个酶活力单位。FPA酶活（U/104cell）=x×V提取÷细胞数量（万个）÷T=0.0333x÷细胞数量（万个）酶活定义：每mL样本每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖为1个酶活力单位。FPA酶活（U/mL）=x×V样÷V样÷T=0.0333xV提取：提取液（蒸馏水）体