CellAVision DM96 自动化数字图像分析系统进行白细胞分类的临床应用课件

CellAVisionDM96自动化数字图像分析系统进行白细胞分类的临床应用对CellAVisionDM96自动化数字图像分析系统（简称DM96）的临床性能进行验证及评价。目的方法1.选取422例外周血样本经自动涂片染色后，采用DM96进行白细胞分类，运用线性回归方法分析仪器结果与人工镜检结果的相关性；2.计算基于自带参考细胞库和扩充的参考细胞库DM96分析软件预分析识别细胞符合率；3.计算检出率，分析采集110、210、310、410个细胞时仪器识别具有重要临床意义细胞的能力；4.统计仪器分类与人工镜检所花费的时间。2.DM96分析软件预分析识别早、中、晚幼粒细胞、原始细胞和变异淋巴细胞的符合率从基于自带参考细胞库的27.56%、37.96%、41.85%、45.12%、29.76%提高到基于扩充参考细胞库的33.23%、56.86%、48.33%、58.08%、31.25%;分析110、210、310、410个细胞中具有重要临床意义细胞检出率分别为87.50%、92.65%、94.85%、97.59%;3.人工镜检花费（2.50±0.41）min/例，而仪器分析花费（1.98±0.20）min/例，人工审查确认预分析结果花费（0.91±0.14）min/例；使用初始参考细胞库和扩充参考细胞库分析所需时间分别为（2.01±0.39）和（2.09±0.54）min/例，而随着系统分析细胞数量增多分析所花费的时间显著延长。结论DM96对白细胞分类的自动化和标准化具有较好的临床应用价值前言1.白细胞分类计数已经发展了100多年，至今仍是实验室常用的具有重要临床价值的检查方法。随着各种新的血液分析计数仪器和方法的不断产生，对于正常或仅有细胞数量异常的样本，血液分析仪已能给临床提供足够可靠的结。但对于有形态异常细胞或者原始幼稚细胞的样本，检测结果需依赖于显微镜检查。所以，显微镜检查仍是目前白细胞分类无可替代的经典方法。DM96的优势1.仪器能通过标准化的工作辅助人工镜检，筛查异常血涂片，甚至经完善后能够替代人工镜检。2.其细胞图像完整保存于数据库，有利于满足后期复查、教学等多方面的需求。二、方法1．样本准备样本统一编号，采用SP-1000i自动化涂片染色仪涂片及染色。整个样本收集和准备的过程应在4h内完成。自动化涂片染色仪采用空气干燥和瑞氏-吉姆萨染色。3．人工镜检人工镜检由2位具备资格的检验人员（工作年限超过15年，中级或以上技术职称），按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）H20-2A规定的方法步骤，分别对同一血涂片在显微镜下分类100个白细胞，共分类200个细胞。4．扩充参考细胞库

经过具备资质的2位检验人员讨论确认的典型形态细胞方可加入参考细胞库。5．性能评价（1）仪器最终结果与人工镜检结果的相关性；（2）基于自带参考细胞库和扩充的参考细胞库的DM96预分析识别细胞的能力；（3）增加分析细胞数量后DM96识别具有临床重要意义细胞的能力；（4）DM96分析所需时间的统计。三、统计学方法

统计分析采用Excel（MicrosoftOffice2010，MicrosoftInc．.Redmond，US）和SPSS（SPSS18．0，SPSSInc．.IBM，Chicago，US）软件。计量资料采用x±s表示。人工结果与仪器结果的相关性采用线性回归分析，预分析识别细胞能力采用符合率（人工同意DM96预分析结果的细胞数/预分析细胞数）.DM96对具有重要临床意义细胞的检出能力采用检出率（人工镜检阳性且DM96结果也为阳性样本数/人工镜检阳性样本数）、漏检率（人工镜检阳性而DM96结果为阴性样本数/人工镜检阳性样本数）等指标。采用双侧检验，P

＜0.05表示差异有统计学意义。二、基于自带和扩充的参考细胞库的DM96预分析识别细胞能力在使用自带参考细胞库对200名健康体检者和222例患者样本进行预分析后，检验人员审查所有细胞数字图片，人工同意预分析结果的比例见表1，总的符合率为88.38%，其中淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和有核红细胞的预分析符合率均在90%以上，中性粒细胞和单核细胞的预分析符合率也较高（＞70%），原始、幼稚阶段粒细胞及变异淋巴细胞的预分析符合率较低（＜50%）。该仪器在本室运行期间，发现采用初始细胞库的预分析结果不能满足我室的工作需要，尤其是对一些具有重要临床意义的细胞。结合我室临床标本的实际情况，我们在使用的最初3～4个月里，不断充实参考细胞库内的参考细胞，目前的每类参考细胞数量由最初的约10个增加到目前的30～80个.表1基于自带参考细胞库DM96预分析识别细胞能力细胞类型DM96分为该类细胞总数人工审查相符合的细胞数符合率（%）中性核粒细胞221691975189.09嗜碱性分叶核粒细胞98795696.86嗜酸性分叶核粒细胞38835190.46淋巴细胞129181228995.13单核细胞1529108570.96早幼粒细胞2837827.56中性中幼粒细胞1375237.96中性晚幼粒细胞31313141.85原始细胞（不区分细胞系）91141145.12变异淋巴细胞842529.76浆细胞501122.00有核红细胞37333990.88总计401423547888.38表2基于扩充的参考细胞库DM96预分析识别细胞能力细胞类型DM96分为该类细胞总数人工审查相符合的细胞数符合率（%）符合率提高（%）早幼粒细胞32210733.235.67中性中幼粒细胞1538756.8618.91中性晚幼粒细胞36017448.336.48原始细胞（不区分细胞系）85449658.0812.96变异淋巴细胞802531.251.49浆细胞943132.9810.98有核红细胞319319100.009.12四、仪器分析花费时间分析人工镜检花费（2.50±0.41）min/例，而仪器分析（从将血涂片装载入仪器开始至预分析完成为止）花费（1.98±0.20）min/例，人工审查确认预分析结果花费（0.91±0.14）min/例，大大节省检验师所花费的时间。使用初始参考细胞库和扩充的参考细胞库分析花费的时间分别为（2.01±0.39）和（2.09±0.54）min/例。而完成分析110、210、310、410个白细胞花费的时间分别为1.98、3.09、4.15、4.68min/例，时间随着分析的细胞数的增加而显著延长。

五、讨论DM96使用标准化分析程序，对于分析的区域和路径都预先做好了设定，降低了分析区域不同造成的误差。同时，DM96预分析后所有细胞图像按照预分析结果排列于屏幕上，因此检验人员可以很快确认或对其中认为分析结果有误的细胞重新分类。1977年美国病理学家协会（CAP）组织进行的白细胞分类研究比较,DM96对淋巴细胞、嗜酸性分叶核细胞的分类能力比人工分类的能力高或相当，其他类型细胞则稍差。将仪器分析的最终结果与检验人员直接在显微镜下的分类结果相比较，两者的回归系数在不同类细胞间差距很大（0.3～0.9），在外周血片中出现频率低的细胞（单核细胞）相关性较差，在中性分叶核粒细胞、嗜碱性分叶核细胞和淋巴细胞中较高。

在DM96临床应用中发现，参考细胞库的容量会影响细胞预分析结果的符合率。在使用扩充的参考细胞库预分析时，具有重要临床意义细胞的分析符合率较使用初始参考细胞库时有明显的提高。由此提示，在实际工作中需要不断完善参考细胞库以提高预分析结果的符合率。在实际工作中，识别样本出现具有临床重要意义的细胞，是各种分类方法可靠性的决定性因素之一,如何提高检出率、降低漏检率的发生是各种方法着力探讨的问题之一。目前DM96在国内应用较少，多数使用过的检验人员认为该仪器拍摄的细胞图像与显微镜下直接观察到的细胞形态有一定差别，如DM96拍摄的单核细胞图像较显微镜直接观察到的细胞颗粒更明显，而胞核折叠感欠显著等，这些差别使得检验人员在初次使用该仪器时判断细胞分类有一定困难。这可能是造成预分析符合率不尽如人意的原因之一。因此，检验人员在熟悉DM96拍摄的细胞图像形态特征后可进一步提高预分析符合率。另外在实践时间上，人工镜检花费时间是使用DM96花费人工时间的近3倍。使用DM96时，在血涂片装载好后仪器即开始自动预分析，此段时间内，检验人员可以离开进行其他工作。待其预分析完毕后，检验人员可以在荧幕上快速对仪器已初步分类的结果进行核对和纠正。对于非急诊的样本，可以集中审查复片结果，从而大大节省了检验人员花费的时间，提高了员工的工作效率。综上所述，DM96作为一种图像分类系统，其分类原理更接近于人工直接镜检的方法。对于外周血中数量和百分比高