化妆品微生物指标检验课件讲义

化妆品微生物检验化妆品微生物检验1化妆品因含有水分，油脂，蛋白质，多元醇等，为微生物的生长创造了良好的条件，造成产品变质。为了抑制微生物的繁殖和消费者使用过程中的产品污染，往往在化妆品中加入防腐剂，但不能过量。因此，化妆品一方面为微生物的生长繁殖提供了良好的环境；另一方面由于防腐剂的应用又可抑制微生物的生长。化妆品因含有水分，油脂，蛋白质，多元醇等，为微生物的生长创造2化妆品卫生标准化妆品卫生标准3微生物检验方法GB/T7918.1-1987化妆品微生物标准检验方法总则菌落总数（化妆品卫生规范-2007年）

GB/T7918.2-1987化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定

粪大肠菌群：GB/T7918.3-1987化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌群铜绿假单胞菌（化妆品卫生规范-2007年）

GB/T7918.4-1987化妆品微生物标准检验方法绿脓杆菌金黄色葡萄球菌GB/T7918.5-1987化妆品微生物标准检验方法金黄色葡萄球菌霉菌和酵母菌：（化妆品卫生规范-2007年）微生物检验方法GB/T7918.1-1987化妆品微生物4总则微生物检验的基本要求微生物检验样品的采集、保存及制备适用范围总则适用范围5总则1、具有代表性

随机抽取相应数量的包装单位。应从批的整体中各部位抽取，如从四角+中间；分上、中、下层；或上、中上、中、中下、下层；梅花点式等。所有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。

样品的采集总则1、具有代表性样品的采集62、抽/采样数量按照抽样批及抽样方案JJF1070－2005定量包装商品净含量计量检验规则2、抽/采样数量JJF1070－2005定量包装商品净含量73、检验量

检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。

3、检验量8样品的制备液体样品膏、霜、乳剂半固体状样品固体样品样品的制备注意事项无菌容器、材料及操作样品的均一性样品的制备液体样品膏、霜、乳剂半固体状样品固体样品样品9样品的检验及保管

及时检验样品应放在室温阴凉干燥处样品先进行微生物检验，再做其他指标须防止微生物的再污染和扩散如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月样品的检验及保管及时检验样品应放在室温阴凉干燥处样品先进行10菌落总数检验菌落总数（Aerobicbacterialcount）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。菌落总数检验菌落总数（Aerobicbacterialc11数据处理混合平板的制备细菌的培养检查结果、观察与计数供试液的制备书写检验记录单数据混合平板的制备细菌的培养检查结果、观察与计数供试液书写检12化妆品中防腐剂抑制细菌的生长.含卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基进行中和。对尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚类等有效，但对卡松类的防腐剂的中和效果有限。化妆品中防腐剂抑制细菌的生长.13卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡松的抑菌效果。因此,检测时不同的防腐剂加入不同的中和剂卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡松的抑菌效果。因此,检测14为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL0.5％的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐15在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方法的有效性。在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测16粪大肠菌群粪大肠菌群（Fecalcoliforms）系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃±0.5℃培养24h～48h能发酵乳糖产酸并产气。该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。粪大肠菌群粪大肠菌群（Fecalcoliforms）系一17产酸：黄色产气：气泡产酸产气书写检验记录单不产酸不产气增菌培养供试液的制备配培养基和稀释液检查结果判断44±0.5℃24~28h分离培养蛋白胨水培养最终结果判断44±0.5℃24±2h靛基质特征菌落36±1℃18~24h双倍胆盐乳糖MEMB琼脂液面玫瑰红色紫黑色★粪大肠菌群检查流程图产酸：黄色产酸产气书写检验不产酸不产气增菌培养供试液的制备配18铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃±1℃条件下能生长。该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeru19最终结果判断增菌培养供试液的制备书写检验记录单分离纯化无菌落或无特征菌落配培养基和稀释液革兰染色、镜检→氧化酶试验绿脓菌素试验生化试验硝酸盐还原试验

42℃生长试验明胶液化试验★铜绿假单胞菌检查流程图SCDLP培养基十六烷三甲基溴化铵琼脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素最终结果判断增菌培养供试液的制备书写检验分离纯化无菌落或无特20十六烷三甲基溴化铵平板SCDLP培养基黄绿色菌膜灰白色湿润氧化酶试验粉红/紫红色十六烷三甲基溴化铵平板SCDLP培养基黄绿色菌膜灰白色湿润氧21绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验N2明胶液化试验明胶培养基（高层）明胶液化绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验N22金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcu23革兰染色、镜检→生化试验:血浆凝固酶试验甘露醇发酵试验最终结果判断增菌培养供试品的处理书写检验记录单分离纯化无菌落或无特征菌落配培养基和稀释液36±1℃36±1℃SCDLP培养基或7.5%NaCl肉汤24±2hBairdParker’s或血琼脂24~48h特征菌落★金黄色葡萄球菌检查流程图革兰染色、镜检→最终结果判断增菌培养供试品的处理书写检验分24BairdParker’s平板灰/黑色甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验血浆凝块液态血浆BairdParker’s平板灰/黑色甘露醇发酵试验血浆凝25霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌数测定（Determinationofmoldsandyeastcount）是指化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌数测定（Determinatio26检验结果正确的保证设备方面：恒温培养设备高压灭菌器超净工作台均质器天平显微镜检验结果正确的保证设备方面：27材料要求：无菌容器及溶液；材料充足；

培养基的制备与质量控制；材料要求：28人员操作方面：无菌操作，避免污染；一定专业技术人员操作方面：29日常维护：设备的计量与保证；超净台及时清洁与杀菌；检验后材料的及时处理；环境卫生。日常维护：30人、机、样、法、环、溯人、机、样、法、环、溯31化妆品微生物检验化妆品微生物检验32化妆品因含有水分，油脂，蛋白质，多元醇等，为微生物的生长创造了良好的条件，造成产品变质。为了抑制微生物的繁殖和消费者使用过程中的产品污染，往往在化妆品中加入防腐剂，但不能过量。因此，化妆品一方面为微生物的生长繁殖提供了良好的环境；另一方面由于防腐剂的应用又可抑制微生物的生长。化妆品因含有水分，油脂，蛋白质，多元醇等，为微生物的生长创造33化妆品卫生标准化妆品卫生标准34微生物检验方法GB/T7918.1-1987化妆品微生物标准检验方法总则菌落总数（化妆品卫生规范-2007年）

GB/T7918.2-1987化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定

粪大肠菌群：GB/T7918.3-1987化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌群铜绿假单胞菌（化妆品卫生规范-2007年）

GB/T7918.4-1987化妆品微生物标准检验方法绿脓杆菌金黄色葡萄球菌GB/T7918.5-1987化妆品微生物标准检验方法金黄色葡萄球菌霉菌和酵母菌：（化妆品卫生规范-2007年）微生物检验方法GB/T7918.1-1987化妆品微生物35总则微生物检验的基本要求微生物检验样品的采集、保存及制备适用范围总则适用范围36总则1、具有代表性

随机抽取相应数量的包装单位。应从批的整体中各部位抽取，如从四角+中间；分上、中、下层；或上、中上、中、中下、下层；梅花点式等。所有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。

样品的采集总则1、具有代表性样品的采集372、抽/采样数量按照抽样批及抽样方案JJF1070－2005定量包装商品净含量计量检验规则2、抽/采样数量JJF1070－2005定量包装商品净含量383、检验量

检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。

3、检验量39样品的制备液体样品膏、霜、乳剂半固体状样品固体样品样品的制备注意事项无菌容器、材料及操作样品的均一性样品的制备液体样品膏、霜、乳剂半固体状样品固体样品样品40样品的检验及保管

及时检验样品应放在室温阴凉干燥处样品先进行微生物检验，再做其他指标须防止微生物的再污染和扩散如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月样品的检验及保管及时检验样品应放在室温阴凉干燥处样品先进行41菌落总数检验菌落总数（Aerobicbacterialcount）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。菌落总数检验菌落总数（Aerobicbacterialc42数据处理混合平板的制备细菌的培养检查结果、观察与计数供试液的制备书写检验记录单数据混合平板的制备细菌的培养检查结果、观察与计数供试液书写检43化妆品中防腐剂抑制细菌的生长.含卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基进行中和。对尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚类等有效，但对卡松类的防腐剂的中和效果有限。化妆品中防腐剂抑制细菌的生长.44卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡松的抑菌效果。因此,检测时不同的防腐剂加入不同的中和剂卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡松的抑菌效果。因此,检测45为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL0.5％的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐46在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方法的有效性。在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测47粪大肠菌群粪大肠菌群（Fecalcoliforms）系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃±0.5℃培养24h～48h能发酵乳糖产酸并产气。该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。粪大肠菌群粪大肠菌群（Fecalcoliforms）系一48产酸：黄色产气：气泡产酸产气书写检验记录单不产酸不产气增菌培养供试液的制备配培养基和稀释液检查结果判断44±0.5℃24~28h分离培养蛋白胨水培养最终结果判断44±0.5℃24±2h靛基质特征菌落36±1℃18~24h双倍胆盐乳糖MEMB琼脂液面玫瑰红色紫黑色★粪大肠菌群检查流程图产酸：黄色产酸产气书写检验不产酸不产气增菌培养供试液的制备配49铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃±1℃条件下能生长。该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeru50最终结果判断增菌培养供试液的制备书写检验记录单分离纯化无菌落或无特征菌落配培养基和稀释液革兰染色、镜检→氧化酶试验绿脓菌素试验生化试验硝酸盐还原试验

42℃生长试验明胶液化试验★铜绿假单胞菌检查流程图SCDLP培养基十六烷三甲基溴化铵琼脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素最终结果判断增菌培养供试液的制备书写检验分离纯化无菌落或无特51十六烷三甲基溴化铵平板SCDLP培养基黄绿色菌膜灰白色湿润氧化酶试验粉红/紫红色十六烷三甲基溴化铵平板SCDLP培养基黄绿色菌膜灰白色湿润氧52绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验N2明胶液化试验明胶培养基（高层）明胶液化绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验N53金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcu54革兰染色、镜检→生化试验:血浆凝固酶试验