医学检验技能操作

医学检验技能操作Lastrevisionon21December2020红 细 胞 计 数1、加稀释液 取小试管1支，加红细胞稀释液2ml。2、加血 用清洁干燥微量吸管或一次性微量吸管采集末梢血或抗凝血10ul，擦去管余血，轻轻加至红细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2-3次，立即混匀。3、充池 混匀后用微量吸管或玻璃棒将红细胞悬液充入计数池，室温下平放3-5分钟，待细胞下沉后于显微镜下计数。4、计数 用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞。5、计算红细胞/L=N/200×1012/LN5个中方格内数得的红细胞数。白细胞计数1、加稀释液 用吸管吸取白细胞稀释液于小试管中。2、吸取血液 用微量吸管吸取新鲜全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血，将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管3次。3、混匀 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色。4、充池 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴，充入改Neubauer计数板的计数池中，室温静置2-3分钟，待白细胞完全下沉。5、计数 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数。6、计算 白细胞=4个大方格内白细胞数（N）/20×109/L白细胞分类计数1、将血涂片用瑞氏染液染色，冲洗干净，自然干燥后待用。2、镜下观察 低倍镜下观察白细胞的分布和染色情况。3、观察 选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域，按一定的方向顺序对所见到的每1个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器作好记录，共计数100个细胞。计算 求出各类细胞所占的百分比率。血涂片的制备和瑞氏染色11cm1滴抗凝血。2、推片：左手平执载波片，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展3045厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌、头、尾三部分。3、干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。4、标记：在载玻片的一端用记号笔编号。5、染色：血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片3-51II液，用吸耳球轻轻混匀。6、冲洗：1分钟后，用流水冲去染液，待干。7、观察结果：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体尾交界处的血细胞。ABO血型鉴定（一）正定型法1、5%被检红细胞生理盐水悬液制备抗凝血离心或红细胞自然沉降后取下层红细胞22ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2500r/min315%的红细胞生理盐水悬液。2、标记试管取小试管2支，分别标记抗A、抗B。3、加标准抗血清分别加入抗A、抗B标准血清各1滴于相应标记的试管中。4、加入红细胞悬液分别加入被检者5%11000r/min，1min。5、观察结果先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集、再用低倍镜观察凝集强弱程度，如轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察。6、判断结果（1）凝集结果判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。（二）反定型法1、分离血清2500r/min，离心3min，分离血清。23A、B、O13、加标准红细胞按标记分别加入5%的A、B、O型标准红细胞生理盐水悬液1滴，混匀，立即以1000r/min，离心1min。4、观察结果先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，肉眼观察有无凝集，再用低倍镜观察。5、判断结果6、凝集结果判断标准：同正定型法。网织红细胞计数1、加染液取煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加入新鲜全血2滴，立即混匀，置室温下15-20分钟。2、制备涂片取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。3、观察在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。4、计数在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞数。5、计算网织红细胞分数数=计数的网红细胞数/1000尿蛋白定性检查（加热乙酸法）1、加尿液取大试管1支，各加清晰尿液5ml。2、加热 倾斜试管下端，在酒精灯上加热尿液上1/3段，煮沸即止。3、观察 轻轻直立试管，在黑色背景下观察煮沸部分有无浑浊。4、加酸后再加热 滴加5%的乙酸溶液2-4滴，再煮沸后立即观察结果。，5、判断结果判断阳性程度及蛋白质的含量。革兰染色制玻片用接种环挑取一环生理盐水放在载玻片中央，再挑取一环菌种放入生理盐水中涂片。2-3回，放凉。1min，冲洗，甩干。1min，冲洗，甩干。9530s10s，冲洗，甩干。30s，冲洗，甩干，镜检。抗酸染色初染2-33-5冷却后用水冲洗。脱色3%30秒~1分钟；用水冲洗。复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。药敏实验在“”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量物，以划线方式将细菌涂布到1/21/2，依次划线，直至细菌均匀密布皿。（将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。3724小时后，观察效果。琼脂平板分区划线分离法1环葡萄球菌和大肠埃希菌的混合菌液。琼脂平板倒放于桌面，左手抓握起平板底部，尽量直立使琼脂面靠近酒精灯火焰，以免杂菌污染。右手持沾菌接种环在平板表面上端来回划线，涂成一薄膜(1区，约1/5)30°～45°，用指力轻轻来回滑动密集划