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文档简介

细菌内毒素检查

（凝胶法）

细菌内毒素检查法凝胶法方法分类 浊度法光度法显色基质法重现性好方法特性能定量能控制药物的增强/抑制干扰操作简便。节省时间原理：利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关.细菌内毒素检测之凝胶法实验程序1、试验准备：试剂、仪器及用具2、内毒素限值的确定3、确定最大有效稀释倍数4、凝胶限度试验5、结果判定要求1、以最终产品为检测必要（浓度超过0.5mg/ml）2、检测样品PH应在6~8之间，不符应调整1、试验准备：试剂、仪器及用具

仪器与器具电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、锡箔纸。试剂细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂。2、内毒素限值的确定

L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg·h）表示；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供试品提供者直接提供内毒素限值如1000EU。3、鲎试剂灵敏度复核

按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。

BCAA鲎试剂200ul100ul100ul100ul标准品100ul供试品100ul100ul操作注意事项试验前准备：1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、清洗操作方便。2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管；塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。实验环境：最好在洁净室或洁净工作台内进行，保证环境温度、湿度及通风稳定。实验人员：戴干净手套和口罩。5、恒温器的温度变化应<1℃，鲎试剂与样品混匀后应立即移入水浴槽，严格控制保温时间在60±2min，保温期间不得移动试管架，桌面保持平稳，周围不能有振颤因素。结

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