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文档简介

微生物学两大经典染色：革兰氏染色法抗酸染色法革兰染色法革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家汉斯·克里斯蒂安·革兰（Hans

ChristainGran）创立的。实验目的和要求1.掌握革兰氏染色方法的操作步骤及注意事项。2.了解革兰氏染色的临床意义。（一）基本步骤：

1、初染：草酸胺结晶紫染色2、媒染：碘液媒染3、脱色：乙醇脱色4、复染：石炭酸复红复染一、实验原理细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫—碘的复合物，增强染料与细菌的结合力。（二）原理：当用脱色剂处理时，G+菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫—碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。G-菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为G+菌；细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色（红色）的细菌为G-菌。G-G+三、操作步骤四、注意事项五、革兰染色的临床意义1.对细菌的鉴别有重要意义2.指导临床选择用药3.研究细菌与致病性的关系思考题：

当你对一株未知菌进行革兰染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？

抗酸染色法【原理】结核杆菌对苯胺染料不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，再经美兰复染，结核杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。【材料】①结核病人的咳痰液：采取清晨第一口粘痰，或浓缩集落菌法处理过的痰标本。②石炭酸复红染色液，3%盐酸酒精，碱性美蓝染液③生理盐水④载物玻片，滤纸片、接种环、玻片夹、酒精灯、蜡笔等2．染色（1）在已固定好的涂片上放置滤纸片（滤纸的作用是滤去染液中的沉渣，使标本清晰），滴加石炭酸变红染色液于滤纸片上（应滴满滤纸片）。（2）将加有染液的涂片加温，在火焰上保持一定的高度，直到出现蒸汽（不得沸腾）如此反复2—3次（约5分钟）。在加温过程中防止将染液烘干（应及时添加染液）。（3）去掉滤纸片，使涂片冷却，水洗。（4）用3%盐酸酒精脱色，直到流下的脱色剂无色为止，水洗。（5）用碱性美蓝染液复染30秒，水洗、干燥、镜检。【结果观察】1.结核杆菌染成红色，细长，直的或为微弯曲，有的可表现出分枝特征，偶而有着色不匀，成颗粒状者。亦可以见到有纵行条索状排列。标本的其余部分及非抗酸性细菌染成蓝色。必须逐一观察各个视野，直待全部涂片找不到结核杆菌时，才可报告阴性。3.结核杆菌易发生变异，在陈旧培养基或临床治疗后标本材料中，结核杆

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