




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
第四章药物定量分析与分析方法验证节定量分析样品的前处理方法第二节定量分析方法特点(自学)第三节药品分析方法的验证第四节生物样品分析方法的基本要求定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第1页!节定量分析样品的前处理方法一、含卤素有机药物的分析一、概述含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者,而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。结构特点:C—X(一)含卤素有机药物定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第2页!卤素与脂肪链的C原子相连者,卤素与C原子结合不牢固,可直接测定或水解后测定。氮芥氟烷1卤素与脂肪链碳原子相连定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第3页!碘苯酯I诺氟沙星定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第4页!(二)含金属的有机药物含金属有机药物2.有机金属药物:
金属原子直接和碳原子以共价键相连,结合牢固,溶液中一般不能解离成离子状态,需经有机破坏后分析。
金属原子不直接和碳原子相连,以金属的有机酸及酚的盐或配位化合物的形式存在.如酒石酸锑钾、富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠等。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第5页!二不经有机破坏的分析方法直接测定法经还原分解后测定法经水解后测定法定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第6页!(二)经水解后测定法1、碱水解后测定法
适于卤素和碳原子结合不牢固的含卤素有机药物回流回流Volhard法定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第7页!方法指示剂滴定液被滴定物终点变化莫尔法K2Cr2O7AgNO3卤化物砖红色原理佛尔哈德法硫酸铁铵NH4SCN(KSCN)Ag+红色法扬氏法吸附指示剂AgNO3卤化物指示剂变色定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第8页!(三)经还原分解后测定法适用于碘原子与苯环直接相连的含卤素有机药物。NaOHZn+3Na2ZnO2+3H2O+3NaI+2CH3COONaNaI的测定CHPUSP(KIO3滴定法)AgNO3滴定冰HAC,曙红钠指示剂(Fajans法)泛影酸定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第9页!原理将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热,药物分子中有机结构被“消化”成CO2和H2O,有机结合的氮转化为无机氮,与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵,经碱化后释放出氨气,随水蒸气馏出,用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后,再用酸或碱滴定液滴定。常量法——含氮量25~30mg半微量法——含氮量
1.0~2.0mg凯氏定氮法定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第10页!1.高温炽灼法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。(二)干法破坏定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第11页!适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析(3)特点:本法特点是简便、快速、破坏完全,尤其适用于微量样品的分析(2)适用范围:定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第12页!固体样品:无灰滤纸液体样品:纸袋软膏类样品:蜡油纸中包裹后再用无灰滤纸包裹(5)操作方法①样品的准备取样品适量,精密称定后按规定方法包裹,固定于铂丝下端的网内或螺旋处。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第13页!②燃烧前燃烧瓶的准备用洗液洗净后,按各药品项下的规定加入吸收液,小心急速地通入氧气1min,立即用表面皿覆盖瓶口。③样品的燃烧
点燃包有供试品的滤纸尾部,迅速放入燃烧瓶中,按紧瓶塞,加水少量封闭瓶口,俟燃烧完毕(应无黑色碎片),充分振摇,使生成的烟雾完全吸入吸收液中,放置15min,用水少量冲洗瓶塞及铂丝,同法另做空白试验。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第14页!例碘苯酯的含量测定ChP置换碘量法2碘苯酯[O]I2NaIO+NaI1/3NaIO3+2/3NaI5/3NaI自身氧化还原溴醋酸5/3NaIO32NaIO32HIO3+10KI+12H+6I2+…6I2+12Na2S2O312NaI+6Na2S4O6Br2(过量)+HCOOHHBr(过量)+CO2↑
NaOH定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第15页!验证内容准确度精密度专属性检测限定量限线性与范围耐用性定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第16页!
制剂可采用空白辅料中加入原料药对照品法。还应作单独辅料的空白测定。加样回收试验(中药)已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品(或标准品)测定,测定值为M定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第17页!(二)精密度(Precision)
定义:系指在规定的测试条件下,同一个均匀供试品,经多次取样测定所得结果之接近的程度。常用标准差(SD)或相对标准差(RSD)表示。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第18页!同一实验室,不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。2.中间精密度定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第19页!
指有其他成分(杂质、降解物、辅料等)可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性,能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。(三)专属性(specificity)定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第20页!(四)检测限(limitofdetection,LOD)1、定义:系指试样中被测物能被检测出的最低量。无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。它既反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小,也表明样品经处理后空白(本底)值的高低。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第21页!(五)定量限
(limitofquantitation,LOQ)1、定义:指在具有一定准确度和精密度的前提下,样品中被测物能被定量测定的最低浓度或量。常用%、ppm、ppb表示杂质和降解产物定量测定时需确定定量限。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第22页!(六)线性与范围
(linearityandrange)1、定义:线性:在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。线性范围:指达到一定精密度、准确度和线性的条件下,测试方法适用的高低限浓度或量的区间。可用mg/L~mg/L、μg/ml~ug/ml等表示。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第23页!(七)耐用性(robustness)定义:指在测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度。变动因素:溶液稳定性、不同的测试耗用时间、不同的分析温度、不同的测定日期、流动相的组成和pH,商品柱的品牌,柱温等。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第24页!各种含量测定方法对效能指标的要求
1.容量分析法:用原料药精制品(含量>99.5%)或对照品考察方法的精密度,RSD≤0.2%;回收率一般在99.7~100.3%之间。
2.UV法:用适当浓度的精制品进行测定,其RSD一般不大于1%。制剂的测定,回收率一般应在98%~102%之间。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第25页!思考题1、在原料药的分析方法验证中,是否所有指标均需进行验证?2、怎样设计回收率试验?定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第26页!(二)体内药物分析的意义
通过体内药物分析结果可求得药物动力学参数,可了解药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄情况。因此,体内药物分析为药物研究、制剂质量管理、临床用药等提供了数据和信息。另外,在用药过量、误服或服毒等中毒事件中,为解毒急救或判断案情,也需要进行体内药物分析;还有对一些兴奋剂、致幻剂、镇静剂等药物滥用现象也需要进行体内药物进行检测。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第27页!二常用样品的种类、采集和贮存(一)样品及采集1、血样:
血浆(plasma):全血加肝素、枸橼酸盐、草酸盐等抗凝剂后经离心分取,量约为全血的一半。血清(serum):血液室温放置后,自然凝固析出的清液。全血采取:一般是静脉取血、针刺手指、耳垂取血动物实验可直接从动脉或心脏采取定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第28页!2、唾液:
优点:样品易得,取样无痛苦,尤易为儿童接收。缺点:药物浓度变化大采取:漱口15分钟,收集自然流出或经舌在口内搅动流出的唾液。也可采取物理、化学方法刺激使唾液流出。
定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第29页!(二)样品贮存取样后最好立即进行分析,不能立即分析的,则短期内冷藏(4℃),长期冰冻(-20℃)。全血未经分离,不宜直接冷冻保持。尿液是很好的细菌生长液,若需收集24小时或更长时间的样品或不能立即测定的,应置冰箱冷藏或加防腐剂(1%甲苯、过饱和氯仿)保存。
定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第30页!(三)生物样品前处理方法分离、纯化与浓集化学衍生化去除蛋白质缀合物的水解有机破坏定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第31页!2、缀合物的水解尿液中药物多数呈缀合物状态。(1)酸水解:适量盐酸(2)酶水解:常用葡糖酸苷酶或硫酸酯酶或两者混合。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第32页!目的:从大量共存物中分离出所需要的微量组分方法:(1)液-液萃取(LLE):多数药物是亲脂性的,可用有机溶剂萃取出来,而大多数内源性杂质是强极性的,不被萃取出。4、分离、纯化与浓集定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第33页!
(2)液-固萃取(LSE):将生物样品溶液通过填有适宜担体的小柱,使药物保留在担体上,洗去杂质后,用适当的溶剂洗脱下来测定;或杂质保留在担体上,先把药物洗脱下来测定。担体亲水性:硅藻土疏水性:活性炭、聚苯乙烯或C18化学键合硅胶常用微型柱:BoundElut、Sep-pak定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第34页!(3)被测组分的浓集浓集方法:1、末次提取时,加入溶剂尽可能少2、挥去溶剂:(1)通入气流(氮气)吹干(2)减压法:适于易随气流挥发或遇热不稳定药物定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第35页!GC中化学衍生化:RCOOH、ROH、RSH、RNH2CH3I、CH3N2等RCOOCH3、ROCH3、RSCH3、RNHCH3例:烷基化极性降低,挥发性增加烷基化(碘庚烷、叠氮甲烷)酰化(乙酸酐、丙酸酐)硅烷化(三甲基氯硅烷TMCS等)。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第36页!四、定量分析方法的验证(一)特异性
所测的物质是原型药物或特定的活性代谢物,内源性物质和相应的其他代谢物及其他药物不影响样品的测定。空白血浆空白血浆+标准物质受试血浆定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第37页!(三)精密度与准确度(四)定量下限(五)稳定性(六)提取回收率(七)质控样品(八)质量控制(九)测定结果定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第38页!碘番酸泛影酸
卤素与芳环相连的药物,卤素与碳原子结合牢固,不能直接进行测定,需经处理后才能测定。2卤素与芳环碳原子相连定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第39页!磺溴酞钠定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第40页!富马酸亚铁硫柳汞卡巴胂定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第41页!(一)直接测定法Fe2++Ce4+Fe3++Ce3+如:葡萄糖酸锑钠的含量测定碘量法Sb5+I-Sb3++I2Na2S2O3滴定适用于金属原子不直接与碳原子相连的或C—M键结合不牢固的有机金属药物。(包括配位滴定、氧化还原滴定)如:富马酸亚铁的含量测定ChP(2005)铈量法邻二氮菲做指示剂,微过量的硫酸铈将红色亚铁配合物氧化成浅蓝色高价铁。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第42页!银量法根据终点指示方法可分为:1莫尔法(Mohr法,铬酸钾指示剂法)2佛尔哈德法(Volhard法,硫酸铁铵指示剂法)3法扬氏法(Fajans法,吸附指示剂法)定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第43页!例:十一烯酸锌的测定2、酸水解后测定法十一烯酸锌稀盐酸十一烯酸氧化锌EDTA-Na滴定定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第44页!三经有机破坏的分析方法(一)湿法破坏主要适用于含氮有机药物、生物制品分析中N、P等测定的前处理H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-K2SO4HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂——凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结构的药物结构定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第45页!凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)CuSO4(加快消解速度)硫酸碱液硼酸(吸收液)甲基红-溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第46页!氧瓶燃烧法:将有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所产生的待测物质吸收于适当的吸收液中,然后根据待测物质的性质,采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定。2氧瓶燃烧后测定法(Oxygenflaskbustionmethod)(1)原理定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第47页!(4)装置燃烧瓶:为500、1000或2000ml无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶瓶塞:空心,底部熔封铂丝一根铂丝:下端呈螺旋状或网状。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第48页!定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第49页!(6)吸收液作用:将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等,定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第50页!第三节药品分析方法的验证
目的:证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求,方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。用途:1、药品质量标准起草时,分析方法需经验证。2、药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时,分析方法需经验证。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第51页!一、准确度(Accuracy)1、定义:
指测得结果与真实值接近的程度。通常采用回收率试验来表示。2、方法:回收试验法(原料药):空白+已知量A的对照品(或标准品)测定,测定值为M
定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第52页!UV、HPLC回收率要求在98~102%范围容量分析法回收率要求在99.7~100.3%范围中药分析回收率一般要求在95~105%范围内,有些方法操作步骤繁多时,可要求在90~110%范围内。RSD一般在3%以内。数据要求规定的范围内,至少用9次测定结果评价,如制备三个不同浓度样品各测三次。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第53页!在相同条件下,由同一个分析人员测定所得结果的精密度。在规定的范围内,至少用9次测定结果评价,如制备三个不同浓度样品,各测三次。或把被测物浓度当作100%,至少测6次计算RSD进行评价。1.重复性定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第54页!不同实验室,不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时,应进行重现性试验。3.重现性定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第55页!氧氟沙星乳膏的含量测定图谱乳膏基质样品定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第56页!2、方法:信噪比法(仪器分析方法):HPLC、GC:用已知浓度样品与空白试验对照,记录测得的被测药物信号强度S与噪音(或背景信号)强度N,以能达到S/N=2或S/N=3时的样品最低药浓为LOD;UV或荧光分析:多次空白试验,求得其背景响应的标准差,将三倍空白标准差(即3δ空或3S空)作为检测限的估计目视法(非仪器分析方法):通过已知浓度的样品,目视确定能被可靠地检测出的最低量作为检测限。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第57页!定量限与检测限的差别:定量限要定量测定某一药物在样品介质中的最低浓度,且定量限规定的最低浓度应该符合一定的精密度和准确度的要求。2、方法:非仪器分析方法:与检测限的确定方法相同;仪器分析方法:S/N=10时相应的浓度,作为定量限的估计值。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第58页!2、方法:
线性与范围的确定可用作图法(响应值Y/浓度X)或计算回归方程(Y=a+bX)来研究建立。采用相关系数(r)表示标准曲线的线性度。对照品的LOQ必须包括在线性范围。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第59页!①②③①已有重现性验证,不需验证中间精密度②如一种方法不够专属,可用其他分析方法予以补充③视具体情况予以验证准确度精密度重复性中间精密度专属性检测限定量限线性/范围耐用性鉴别++杂质定量+-+++-+++杂质限度++含量测定+++++--++溶出量测定+++++--++检验项目和验证内容定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第60页!
线性:吸收度A一般在0.3~0.7,浓度点n≥5。用浓度c对A作线性回归处理,得一直线方程,r应大于0.9999(n=5),方程的截距应近于零。3.HPLC法:要求RSD<2%,回收率98%~102%之间。线性范围:浓度点n应为5~7,回归处理浓度c~峰高H或峰面积A或被测物与内标的响应值之比进行回归,建立方程,r应大于0.999,截距应趋于零。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第61页!体内药物分析:是一门研究进入人或动物体内,存在于生物样品(如体液、组织、器官和排泄物等)中的药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学。一概述(一)体内药物分析的概念第四节生物样品分析方法的基本要求定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第62页!(三)体内药物分析的特点1.干扰物质多:生物样品中含有大量的内源性物质,如蛋白质、脂肪等,以及代谢物、结合物等,样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析。2.样品量少、不能重复取样:生物样品多数在特定条件下采集,无法再次取样,且样品量少。3.被测成分浓度低:对分析方法的灵敏度及专属性要求较高。在测定前需浓缩、富集以适应分析方法要求。4.药物浓度监测和药物滥用:要求分析方法简便、快速定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第63页!定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第64页!3、尿液:
尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生物利用度等研究,以及测定代谢物类型等。
优点:采取简便,取样量大,受试者无痛苦。缺点:药物浓度变化也大,需采集一定时间内的尿样。采取:动物应在代谢笼中进行,通过笼下漏斗接收。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第65页!三生物样品的前处理(一)药物在体内的存在形式游离型:原形药物或代谢物缀合物:药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等结合结合物:药物与蛋白质结合(二)样品前处理的目的1、提高测定方法灵敏度、准确度和专属性2、保护测定仪器不受生物样品中类脂和蛋白质等的污染。定量分析方法与验证共74页,您现在浏览的是第66页!1、去除蛋白质加入与水混融的有机溶剂(乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃)加入中性盐(饱和硫酸铵、硫酸钠、枸橼酸盐)加入强酸(三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸)加入金属沉淀剂(CuSO4-N
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 物流行业新规与国际物流师试题试题及答案
- 中医康复理疗师知识体系试题及答案
- 2024年CPSM考前冲刺技巧试题及答案
- 餐饮美学基础 课件 4.2民俗餐饮社会美的认知
- 保健知识培训课件教学
- 高效物流体系的构建要素及试题及答案
- 2025年刮板输送机项目发展计划
- 激素在生长中的作用试题及答案
- 解决难题的2024年国际物流师试题与答案
- 物流创新与国际物流师试题及答案
- 中医护理三基练习题库+答案
- 政治-山东省青岛市2025年高三年级第一次适应性检测(青岛一模)试题和答案
- JT-T-795-2011事故汽车修复技术规范
- (高清版)TDT 1063-2021 国土空间规划城市体检评估规程
- 个人借条电子版模板
- YSJ 007-1990 有色金属选矿厂 试验室、化验室及技术检查站工艺设计标准(试行)(附条文说明)
- 丽声英语百科分级读物第一级Legs课件
- 核电站仪表与控制:第4章-核电厂过程参数监测仪表课件
- 第5章-热系统评估
- 超市会计科目及核算流程
- 中铁公司项目部业务招待费及招待品管理制度
评论
0/150
提交评论