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文档简介

提纲为什么要培养细胞培养什么样的细胞如何培养细胞及培养过程的注意事项为什么要培养细胞－生命科学的基本研究方法科学研究需要——细胞是生物体的最小单位工业生产的需要——细胞培养可以获得我们需要的药物、原料等单克隆抗体市场快速增长08年销售达167亿美元已有近20个产品超过150个在临床试验阶段主要是CHO表达的，超过50％培养何种细胞表达我们目的蛋白的细胞——处理过CHO细胞基本概念DNA——染色体——遗传物质基因——DNA片断转录：DNA——RNA翻译：RNA——蛋白质构建表达特定产物的细胞株将特定产物的基因引入细胞中长期稳定表达挑选克隆CHO阳性克隆将外源基因到入细胞内可选的细胞构建的表达载体转染的方法克隆的挑选表达产物的检测常用的表达体系GS表达系统DHFR表达系统表达载体的作用让细胞产生抗性同时表达目的蛋白二氢叶酸还原酶表达系统（DHFR）DHFR是合成dATP和dGTP的关键酶常用DHFR-的CHO细胞不能合成四氢叶酸含胸腺嘧啶核苷、甘氨酸和嘌呤的培养基在氨甲酰喋呤（methotrexate,MTX）存在下，增加外源基因的拷贝数，提高蛋白的表达水平，使外源基因高效表达

为什么要挑选克隆稳定的种子高效的种子经过验证的种子克隆就是从一个细胞增殖形成的细胞群细胞筛选方法－获得单克隆贴壁培养的克隆形成克隆环ClonePixFLCellXpress有限稀释法单克隆形成流式细胞术筛选细胞Re-clonesubclone检测手段dot-blotELISASDSWesternFlowCytometryAnalysisdot-blot上清酶连抗体（1步或2步）显色剂酶联免疫吸附试验（ELISA）夹心法包被抗体加上清酶联抗体显色读数Western基于电泳转膜抗体及酶（同ELISA）染色或发光FlowCytometryAnalysis抗体与细胞结合荧光物质连接抗体激光诱发荧光可检测上清或细胞如何培养细胞无血清、悬浮培养培养细胞的方法含血清培养无血清培养价格便宜品质稳定生物污染少减轻下游纯化负担贴壁变悬浮贴壁悬浮平面立体无血清培养基的分类无血清培养基无蛋白培养基化学成分限定型培养基无血清、无蛋白、化学成分限定型培养基无动物源性成分优化培养——如何优化？细胞株的选择培养条件优化工艺调整为什么要优化？细胞株的选择培养条件优化主要是培养基的优化培养基的成分培养基的使用方法优化考察指标——生长状态优化考察指标生长曲线 表达水平优化效果工艺控制细胞状态的观察工艺参数的设定液体补充的控制发酵模式批次培养补料－批次培养连续灌注培养培养放大方瓶摇瓶小罐大罐

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