结核杆菌特异性细胞免疫反应监测2014.6.5杨峻山科室讲课课件

结核杆菌特异性细胞免疫反应检测A.TBTM（瑅碧）——准确、快速、简便的结核感染检测2结核病疫情感染人数：全球人口的1/3，中国的感染率为44.5%；感染者一生中会有约10%的风险发展成为结核病；年新发病例数：全球每年报告新病例约800-1000万；中国每年报告新病例约150万；死亡人数：全球每年死亡病例约300万；其中中国约13万；中国是全球22个结核病高负担国家之一。3影像学方法：特异性较差，与医师的经验有关，主观性强。培养：结核病诊断金标准，敏感性为30-50%且耗时2-8周；抗酸染色法（俗称涂片）：敏感性为30-40%；血清结核抗体定性检测：敏感性在0-100%，特异性约为47-100%；分子诊断方法（如PCR）：重复性较差，需要痰标本；结核菌素试验（TST）：受卡介苗干扰，特异性差，在肺结核病人中存在10-25%的假阴性。结核病诊断和辅助诊断方法现状5全球现有的三个IGRA产品T.SPOT-TB

细胞IGRA；QuantiFERONTBGold(intube)：简称QFT-IT

全血IGRA；

尚未获得中国SFDA批准进入中国；A.TB：国内第一家

全血IGRA；结核杆菌特异性细胞免疫反应检测2011年7月6日，获中华人民共和国食品药品监督管理局（SFDA）批准上市生产企业：海口维瑅瑷生物研究院注册号：国食药监械（准）字2011第3400801；产品标准编号：YZB/国2442-2011，项目类别：体外三类诊断试剂

原理与技术背景γ-干扰素释放实验（IGRA）

（IGRA，interferon-gammareleaseassay）酶联免疫技术（ELISA）

（ELISA，Enzyme-LinkedImmunoAssay）结核杆菌特异抗原

早期抗原靶6（ESAT-6）

earlysecretedantigenictarget6

培养滤液蛋白10（CFP10）（culturefiltrateprotein10）基本原理1

机体感染结核杆菌后产生的T淋巴细胞在体外受到特异性抗原刺激时会释放γ-干扰素，通过对γ-干扰素的定量分析可判断是否具有结核杆菌的特异性T细胞反应。γ-干扰素释放实验（IGRA）Proteosome蛋白酶体exocytosis-干扰素结核杆菌特异性T细胞抗原呈递细胞脱毒的炭疽毒素致死因子片段LFn，可以起到分子注射器的作用LFnESAT6/LFnCFP10A.TB临床性能指标国内临床数据——1085例样本

●

试验组472例：

菌阳结核菌阴结核

●对照组613例：

健康志愿者非结核其它肺部疾病

疾病类型例数A.TB

阳性阴性艾滋病感染者合并活动性结核88(100%)

0(0%)

糖尿病合并活动性结核1312(92.3%)

1(7.7%)

类风湿合并活动性结核54(80%)

1(20%)

结核性胸膜炎同时服用免疫抑制剂97(77.8%)

2(22.2%)

合计3531(88.6%)

4(11.4%)

A.TB临床诊断数据-2A.TBTM操作过程阴性刺激剂阳性刺激剂A.TB刺激剂样本采集：3ml新鲜全血，肝素钠抗凝37℃16小时内运输常温22-24小时血浆收获标准曲线制备、样品检测450nm读数37℃第一步：样本的刺激第二步：ELISA定量IFN-γNPTNPT0.5小时约3小时样本的刺激和孵育A.TBTM报告单姓名年龄性别ID号科别诊断样本

样本号检测项目测定结果单位计算公式T/P参考范围提示混合淋巴细胞培养+干扰素（P）9.86IU/ml0.24

＜0.6阴性（-）混合淋巴细胞培养+干扰素（T）2.34IU/ml备注：患者样本经结核分枝杆菌RD1区编码的全抗原刺激后，特异性释放的γ-干扰素水平为

2.34IU/ml；非特异释放的γ-干扰素水平为

9.86IU/ml；两者的比值为：

0.24；是否为活动性结核，请结合临床进行判断。N值体现的是机体的本底干扰素水平P值体现的是整体的机体免疫水平是否正常T值体现的是机体内T淋巴细胞对结核杆菌特异性抗原刺激的反应

交叉反应性

以IL-1β，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-α，GM-CSF等9种细胞因子作为干扰物在反应体系中的浓度与-干扰素的浓度相当或为-干扰素浓度的2-4倍时，无明显交叉反应性。

20应用前景公共卫生突发事件结核病集团感染：现阶段一般应用方案为：胸透和结核菌素试验。结核病辅助诊断，尤其对菌