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文档简介
实验四细菌质粒的接合转移
李晓华程国军一:目的要求了解在自然条件下微生物遗传信息传递的方式;掌握细菌质粒转移的原理和流程。
二:基本原理在质粒转移过程中,供体菌与受体菌细胞通过结合作用紧密接触,质粒从供体细胞向受体转移,同时进行质粒复制,这就是结合转移的过程。按能否自主转移,将天然存在的质粒分为两大类。
1.转移型质粒:多为低拷贝的大质粒,含有完整的转移操纵子基因(tra)和转移起始位点。能在同种或亲缘关系近的菌体细胞间进行转移。例如:
大肠杆菌:F因子、R1、R100、R6K、RP4……天蓝色链霉菌:致育性因子pSCP1、pSCP2……2.非转移型质粒:多为高拷贝的小质粒,如大肠杆菌的ColE1、RSF1010等。由于缺少转移基因(tra),不能自主转移,但由于含有与F质粒类似的bom(或nic)位点或诱动基因mob(mobilization),因而能被带有tra基因的转移性质粒诱动而发生转移。转移子的筛选筛选培养基为:基本培养基+抗生素;
供体和辅助大肠杆菌均营养缺陷型,不能在基本培养基上生长;未转化成功的受体菌不能在有抗生素的平板上生长。四:实验内容
准备将受体、供体、辅助菌分别培养到对数期:供体菌:E.coliDH5α(pTR102)(TcR),LB+Tc20μg/ml,37℃震荡培养1夜;受体菌:Sinorhizobiumfredii(TcS),TY,28℃震荡培养2天;辅助菌:E.coliMM294(pPK2073)(SpeR),LB+Spe50μg/ml37℃震荡培养1夜倒SM平板将基本培养基(SM)溶化,加千分之一的维生素混合液,然后加相应量的四环素(15U/ml),每2人1皿。另准备1瓶基本培养基,不加抗生素,用于对照。将倒好的平板用报纸包好后放入4℃冰箱,备用。(注:四环素在强光下易分解)五:实验报告内容转移频率=SM+Tc平板的单菌落数/纯SM平板的单菌落数
SM+Tc平板
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