细菌病的一搬诊断程序

第三节细菌的人工培养是指把细菌生长繁殖所需的各种营养物质合理地调配在一起制成的营养基质。一、培养基的概念第一页，共二十二页。二、培养基种类液体培养基、固体培养基和半固体培养基三种。液体培养基：含有各种营养成分的水溶液。

固体培养基：在液体培养基中加入2～3%琼脂即为固体培养基。半固体培养基：加入0.3～0.5%琼脂即为半固体培养基。(一)按其物理性状分为第二页，共二十二页。1、基础培养基

含有培养一般细菌的最基本成分。可供大多数细菌人工培养用。如肉汤培养基、普通琼脂培养基和蛋白胨水等。(二)按其用途分为第三页，共二十二页。2、营养培养基于基础培养基中加入高营养物质如葡萄糖、血液、血清、腹水、生长因子等，以满足营养要求较高的细菌生长需要。有的细菌还需加入特殊物质，如结核杆菌需加入鸡蛋清、马铃薯、甘油等才能良好生长。第四页，共二十二页。3、选择培养基在培养基中加入某些化学物质，而选择性地让欲分离的细菌旺盛生长的培养基，使用后可以达到选择分离的目的。如胆盐和蔷薇色酸可以选择性地抑制G+菌的生长，而不影响Gˉ菌的生长。在培养基中加入二药后可选择性地分离出肠道杆菌。第五页，共二十二页。

利用细菌分解底物及其代谢产物的不同，可在培养基中加入某种物质和指示剂，即制为鉴别培养基，目的是使得混合在一起的多种细菌在同一种培养基上生长时，表现出不同的、肉眼可鉴别的变化，从而达到鉴别细菌的目的。

4、鉴别培养基第六页，共二十二页。5.厌氧培养基厌氧菌不能在有氧环境中生长。将培养基与空气隔绝，或向培养基中加入一些物质，使培养基中的氧气耗尽，则可用于培养厌氧菌。如肝片肉汤培养基，应用时于液体表面加盖液体石蜡以隔绝空气。第七页，共二十二页。区分选择培养基和鉴别培养基选择培养基上的菌类，有2种或两种以上时，只有适应环境（选择培养基的基底）的菌种才能存活。鉴别培养基上的菌类，有两种或两种以上时，在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物（但培养基上的各个菌种均不死亡）。第八页，共二十二页。三、制备培养基的基本程序配料溶化测定及矫正pH过滤分装灭菌无菌检验备用培养基的基本要求1.含有丰富的营养物质，不含任何抑菌物质。2.具有适当的pH值和水分。3.均匀透明，易于观察。4.经过灭菌和无菌检验。第九页，共二十二页。1、细菌在固体培养基上的生长现象：

观察细菌在平板上的菌落特征：菌落：细菌接种在固体培养基上，经过一定时间的培养后，表面可出现肉眼可见的单个细菌集团，称为菌落。四、细菌在培养基上的生长情况形态、大小、边缘、表面构造（湿润度和光滑度）、隆起度、透明度、颜色等，及在血平板上的溶血现象（β溶血、α溶血）。第十页，共二十二页。2、细菌在半固体培养基中的生长现象有鞭毛的细菌，沿穿剌线呈模糊羽毛状生长。无鞭毛的细菌，沿穿剌线呈清晰的线状生长。第十一页，共二十二页。3、细菌在液体培养基中的生长现象观察肉汤培养物的混浊度、管底沉淀、肉汤表面菌膜或菌环，以及有无汽泡等。⑴⑵

⑶⑷第十二页，共二十二页。临床标本预处理增菌接种培养基，分离单个菌落各种鉴定试验涂片染色快速诊断试验生化试验血清学实验涂片染色药敏试验动物试验初步诊断报告最终诊断报告第四节细菌病的一般诊断程序第十三页，共二十二页。一、病料的采集、保存及运送1）尽早采集一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验，尽早获得病原学诊断和抗生素敏感资料，对细菌感染的治疗具有极其重要意义；2）标本采集尽量在用药前进行；3）根据可疑病原菌和实验方法的不同选择合适的采集时期；第十四页，共二十二页。4）注意无菌操作，尽量避免杂菌污染；5）注意采集的方法和部位；6）标本必须新鲜，及时运送；7）标本的保存、处理要严格。第十五页，共二十二页。二、细菌的形态检查1.单染色法2.复染色法革兰氏（G）染色法革兰氏阳性菌（G+菌）－蓝紫色革兰氏阴性菌（G-菌）－红色第十六页，共二十二页。第十七页，共二十二页。细菌的接种培养方法1.倾注平皿接种法2.平板划线分离法3.斜面接种法4.穿刺接种法5.液体培养基接种法三、细菌的分离培养第十八页，共二十二页。必须用纯培养物鉴定——选用单个菌落第十九页，共二十二页。四、细菌的生化试验1.糖分解试验2.维-培试验3.甲基红试验4.枸橼酸盐利用试验5.吲哚试验6.硫化氢试验7.触媒试验8.氧化酶试验9.脲酶试验第二十页，共二十二页。五、动物接种试验

主要是为了证明所分离细菌是否有致病性。六、细菌的血清学试验

主要用于细菌病的诊断和细菌的鉴定。第二十一页，共二十二页。内容梗概第三节细菌的人工培养。是指把细菌生长繁殖所需的各种营养物质合理地调配在一起制成的营养基质。液体培养基、固体培养基和半固体培养基三种。固体培养基：在液体培养基中加入2～3%琼脂即为固体培养基。半固体培养基：加入0.3～0.5%琼脂即为半固体培养基。如肉汤培养基、普通琼脂培养基和蛋白胨水等。糖、血液、血清、腹水、生长因子等，以。入鸡蛋清、马铃薯、甘油等才能良好生长。在培养基中加入某些化学物质，而选择性地让欲分离的细菌旺盛生长的培养基，使用后可以达到选择分离的目的。如胆盐和蔷薇色酸可以选择性地抑制G+菌的生长，而不影响Gˉ菌的生长。将培养基与空气隔绝，或向培养基中加入一些物质，使培养基中的氧气耗尽，则可用于培养厌氧菌。区分选择培养基和鉴别培养基。选择培养基上的菌类，有2种或两种以上时，只有适应环境（选择培养基的基底）的菌种才能存活。鉴别培养基上的菌类，有两种或两种以上时，在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物