普洱茶及茶粉中茶褐素含量测定的研究

普洱茶及茶粉中茶褐素含量测定的研究胡圆圆，杨云忠，王 萍，李绍仙，李 艳，车 涛（普洱市质量技术监督综合检测中心，云南普洱665000）（茶粉直接溶于水进行80%270nm关键词：普洱茶；茶褐素；含量；测定普洱茶是以地理标志保护范围内的云南大叶种晒青茶为原料，并在地理标志保护范围内采用特定的加工工艺制成，[1][2]。普洱茶汤中独特的口味和色泽越来越受现代人的青睐，它当中的主要成分是“茶褐素”。茶褐素是指茶叶中以儿茶素为主的多酚类化合物氧化聚合而成的大分子水溶性色素，是一类易溶于水，但不溶于乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇及三氯甲烷等有机溶剂的高聚[3]。其化学组成主要由含多苯环的褐色色素、多糖残基、蛋白残基、咖啡碱以及脂类物质组成，主要的功能性基其主要形成途径认为是有多酚氧化形成的茶红素、茶黄素与蛋白质、多糖、咖啡碱及脂类物质在微生物分泌酶的酶促作茶褐素具有减肥、调节血脂、抗动脉粥样硬化和抗氧化等作[4-6]。因此能准确测定普洱茶中茶褐素的含量对推动普洱茶产[7]均得到准确的测定结果。材料与方法样品与试剂普洱茶叶与茶粉由云南天士力帝泊洱生物茶集团有限公（天津市化学试剂三厂析实验室用水规格和试验方法》。仪器与设备（TU-1810SPC，北京普析通用仪器有限责任公司）；（R-215，瑞士）；高速冷冻离（GL-12B，上海安亭科学仪器厂）；(ME614S，Sartorius)（北京市永光明医疗仪器厂）；（台州市黄岩汇丰真空设备。实验方法茶褐素标准品的制备精确选取优质茶样30个，在电子天平上称重，每个茶样称取100g。将称好的茶样进行充分混匀，按料液比为46

110的比例加入沸水，保温浸提两次，每次30min，得茶汤，用滤布过虑茶汤，得到澄清的汤液，对过滤后的茶汤汤浓缩液中加入无水乙醇至乙醇含量为总量的80%，静置6h60条件下烘干，为制作标准曲线做准备。取50g以上得到的（即标准品），1000mL使其全部溶解。对溶解进行分级，使用＞50000Da000Da的茶褐素作为标准品。供试品溶液的制备普洱茶叶溶液的制备。准确称取3.00g茶样，加（蒸馏水mL，摇匀后在沸水浴中浸提10min，（浸提中摇瓶1次），取出摇匀，趁热用滤纸过滤于三角瓶中，冷却至室温。将滤液倒入烧杯，加入无水乙醇至乙醇含量为80%5h（4500r/min10n100L蒸馏水，溶解，吸取溶液1L放入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL。此溶液作为供试品溶液。（约0.5000100mL1mL100mL容100mL（＞50000a。茶褐素标准曲线的绘制准确称取0.025050000Da的标准品，加蒸馏水溶解，定容至250（1L0L、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL8.0mL9.0mL10.0mL1110mL270nm波长下比色（0mL试管作空白），以浓度为横坐标、吸光值为纵坐标绘制标准曲线，求得回归方程：y=9.4893x-0.0038。普洱茶及茶粉样品的测定将供试品溶液，用紫外分光光度计在270nm波长下，用1cm33个平行。普洱茶及茶粉中茶褐素含量的测定按下列公式计算：食品安全导刊2021年10月Copyright博看网.AllRightsReserved.（A0.003×n×100×茶褐素= 9.4893×m×1000

表2 茶粉的重复性试验结果编号称样量/g吸光值A茶褐素含量/）1式中：A为270nm下测定的吸光值；n为稀释倍数；m2为样品质量，g。结果与分析 3线性关系考察 450.0250g50000Da茶褐素标准品，加蒸馏水溶解，定容至250mL。标准品浓度为（c=0.1mg/mL。 6

0.50030.50060.50050.50040.50030.5004

0.1650.1650.1650.1670.1670.166

35.5635.5335.9735.9835.7635.76分别取0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、

表3 普洱（熟茶的重复性试验结果6.0mL、7.0mL、8.0mL、9.0mL10.0mL标准品于11支试管，分别加蒸馏水补至10mL270nm（0mL试管作空白），以浓度为横坐标、吸光值为纵坐标绘制标准曲线，求得回归方程：A=10.0241C+0.0001，见图1。

编号 称样量/g1 3.0052 3.0063 3.0044 3.0055 3.006

吸光值A0.0510.0520.0510.0510.052

茶褐素含量/10.9511.1810.9811.2510.971.2

A=10.0241C+0.0001R2=0.9998

6 3.004

0.051

10.8710.8A 0.60.4

稳定性试验取同一批号的样品，称样量5.005g，按照供试品溶液0h2h4h6h、8h、10h12h270nm处测定起吸光度。当时间放置在6h以上时，吸光值趋于稳定，见表4。表4 稳定性试验结果0.200.00 0.02 0.04 0.06 0.0860.1960.57660.1960.576图1茶褐素的标准曲线80.1960.576精密度实验100.1960.576取同一批号的样品约0.5g，按照供试品溶液的制备方120.1960.576

时间/h00.10 014

普洱茶吸光度A0.1920.1930.194

茶粉吸光度A0.5800.5760.5752.2法操作，按供试品溶液的测定方法，于270nm处连续测定6RSDRSD0.42%，1。表1 精密度试验结果

回收率实验6份，按照供试品溶液制备方法操作，加入茶褐素标品，进行加标回收实验，按供试品溶液270nm编号 茶粉含量1 35.562 35.533 35.54

10.9510.9710.87

结果见下表56。通过表56，茶粉的回收率在96.0%～98.0%（熟茶96.0%～98.0%回收率实验效果好，有利于对样品的测定。表5 茶粉回收率试验结果4 35.76

10.90

535.56535.5610.85编号/g含量/%量/L）果/%回收率635.9710.9210.500535.620.5036.1198.02.3 重复性实验20.500135.580.5036.0798.0

样品中茶褐素 加入 测得结 /%30.500235.570.5036.0596.040.500535.650.5036.1396.050.500335.590.5036.0796.060.500430.500235.570.5036.0596.040.500535.650.5036.1396.050.500335.590.5036.0796.060.500435.600.5036.0998.0.CINAFOODSAFETYCopyright博看网.AllRightsReserved.编号称样量/g样品中茶褐素含量/%加入量编号称样量/g样品中茶褐素含量/%加入量/L）测得结果/%回收率/%[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国:GB/T13.00510.950.5011.4396.02008[S].北京:中国标准出版社,2008.

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王秋平,彭春霞,龚建新,等.普洱茶固态发酵程中酶作用对茶褐素形成的影响 [J].食品与农业科学杂志,2011,91(13):2412-2418.薛志强李亚莉秘鸣等[J].中国保健营养,2012,22(8):2449-2451.杨妍彭春秀刘华戎等外光谱法测定[J].光谱学与光谱分析,2013(7):124-130.参考文献[1]夏骏李勇徐国茂等动物源性食品中赭曲霉毒素其相对不确定度为U

ref

=0.007/0.50.08083。3

A[J].2LALINIRKANTIB.OchratoxinsFood2.5.2

(V2)

Contaminants:ImpactonHumanHealth[J].2010,2(4):高效液相色谱进样针容积相对标准偏差为±1%，取均匀分布，其相对不确定度U =1%/30.00577。ref(v2)结合以上两部分引入的不确定度，由体积量取引入的合

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ref

=Uref

2(V)1

ref

2

)0.081042

化学分合成不确定度

析测量不确定度评定:JJF1135—2005[S].北京:中国计量出版U(x)

=Uref

2(c)

ref

2(R)U

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2U

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2)0.08825

社,2005.测量不F113—2005[595.45%2，赭曲霉毒素