透析液细菌内毒素检查课件

细菌内毒素限量检查讲义——透析用水、透析液讲解董光宴1、试验条件必备2、标准要求3、供试品溶液的制备4、限量检查

湛江博康海洋生物有限公司11/27/20221博康细菌内毒素限量检查讲义11/27/20221博康www.zj一、试验条件必备1、经过培训合格的实验人员；2、实验室条件；3、必备的实验材料。11/27/20222博康一、试验条件必备11/27/20222博康www.zj-hy3必备的实验材料3.1必备材料①鲎试剂盒：具有国家批准文号，并依法检验合格。如：湛江博康海洋生物有限公司，卫药准字（88）SJ-04。11/27/20223博康3必备的实验材料11/27/20223博康www.zj-h试剂名称用途1鲎试剂反应主剂鲎试剂与2内毒素工作品阳性对照3检查用水样本溶解鲎试剂与样本溶解4酸性调节剂调节透析液的PH值【组成成份】每盒试剂组成每盒试剂配套试验耗材：无热原试管5ml×6支；无热原试管2ml×6支；无热原吸嘴0.25ml×15支。11/27/20224博康试剂名称用途1鲎试剂反应主剂鲎试剂与2内毒素工作品②

实验室要求洁净，无尘埃流通，室内温度要求20—25℃为宜。必要时应在超净工作台操作。11/27/20225博康②实验室要求洁净，无尘埃流通，室内温度要求20—25℃为宜③

恒温箱。④

旋涡振荡器。⑤

其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。11/27/20226博康③恒温箱。11/27/20226博康www.zj-hy.c3.2取样

取样器具必须符合2010年版《中国药品检验标准操作规范》310页——细菌内毒素检查法“3实验准备”规定：无外源性内毒素。必要时可以用真空采血管（无添加剂）取样。11/27/20227博康3.2取样11/27/20227博康www.zj-hy.二、复用设备及用水要求《血液透析器复用操作规范》5.1.2水质要求：应定期检测复用用水细菌和内毒素的污染程度。应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检测。内毒素含量不得超过2EU/ml，干预限度为1EU/ml。当达到干预限度时，继续使用水处理系统是可以接受的，但应采取措施，防止系统污染进一步加重。11/27/20228博康二、复用设备及用水要求11/27/20228博康www.zj5复用设备及用水要求5.1.3水质细菌学、内毒素检测时间：最初应每周检测1次，连续2次检测结果符合要求后，细菌学检测应每月1次，内毒素检测应每3个月至少1次。11/27/20229博康5复用设备及用水要求11/27/20229博康www.zj三、供试品溶液的制备

透析用水需进行稀释。一般要求供试品溶液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于透析液，需调节PH值，可使用酸性调节剂调节PH值。11/27/202210博康三、供试品溶液的制备11/27/202210博康www.四限量检查

透析用水、透析液已有内毒素检验标准，可直接进行内毒素检查。11/27/202211博康四限量检查11/27/202211博康www.zj-hy.1、试剂和样品鲎试剂盒（生产单位：湛江博康海洋生物有限公司，灵敏度：0.125EU/ml）细菌内毒素检查用水细菌内毒素工作标准品（10EU）透析用水11/27/202212博康1、试剂和样品11/27/202212博康www.zj-hy2、限值的确定内毒素限值L=1.0EU/ml。11/27/202213博康2、限值的确定11/27/202213博康www.zj-hy3、计算稀释倍数MVD=L/λ=1.0EU/ml/0.125EU/ml=8倍11/27/202214博康3、计算稀释倍数MVD=L/λ4、操作方法

编号名称A样品管B样品阳性对照C阳性对照D阴性对照11/27/202215博康4、操作方法编号名称A样品管B样品阳性对照C阳性对照D阴透析用水8倍稀释液0.2ml图示4.1供试品溶液的制备1.4ml11/27/202216博康透析用水8倍稀释液0.2ml图示4.1供试品溶液的制备4.2阳性对照

检验鲎试剂活性及试验有效性。4.3阴性对照检验试验操作及环境是否对试验有污染。0.25EU/ml11/27/202217博康4.2阳性对照0.25EU/ml11/27/202217博补充：内毒素标准品的正确开启方法

取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程应防止玻璃屑落入瓶内。正确（易折点）错误11/27/202218博康补充：内毒素标准品的正确开启方法取细菌内毒素工作标准品注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。2、只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。11/27/202219博康注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启0.25EU/ml0.2ml0.2ml1.8ml0.6ml图示1EU/ml10EU/ml11/27/202220博康0.25EU/ml0.2ml0.2ml1.8ml0.6ml图4.4供试品阳性对照

目的是为了验证透析用水中有内毒素可以被检测出来。

0.25EU/ml/8倍11/27/202221博康4.4供试品阳性对照0.25EU/ml/8倍11/27/25鲎试剂的准备

取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，放在试管架上，排成4列，每列2支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。

11/27/202222博康5鲎试剂的准备11/27/202222博康www.zj-6加样

其中2支加入0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶液作为阳性对照;2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液作为供试品管;

2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液和0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶液作为供试品阳性对照;

2支加入0.2ml的检查用水作为阴性对照。11/27/202223博康6加样11/27/202223博康www.zj-hy.c

加样结束后，将鲎试剂用医用胶布封口，轻轻振动混匀，连同试管架放入37℃水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60分钟。11/27/202224博康加样结束后，将鲎试剂用医用胶布封口，轻轻振动混匀，连同7结果判断

保温60分钟±2分钟后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。

11/27/202225博康7结果判断11/27/202225博康www.zj-

若溶液A的两个平行管均为阴性，判供试品符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否则判供试品不符合规定。11/27/202226博康若溶液A的两个平行管均为阴性，判供试品符合规定；若溶液供试品供试品阳性对照阳性对照阴性对照--++++--结果是否有效有效结果判断合格8结果记录11/27/202227博康供试品供试品阳性对照阳性对照阴性对照--++++--结果是否湛江博康海洋生物有限公司讲解董光宴通信地址：广东省湛江市麻章区瑞云南路188号邮政编码：524094联系电话60313828262866企业网址：E-11/27/202228博康湛江博康海洋生物有限公司11/27/202228博康www.细菌内毒素限量检查讲义——透析用水、透析液讲解董光宴1、试验条件必备2、标准要求3、供试品溶液的制备4、限量检查

湛江博康海洋生物有限公司11/27/202229博康细菌内毒素限量检查讲义11/27/20221博康www.zj一、试验条件必备1、经过培训合格的实验人员；2、实验室条件；3、必备的实验材料。11/27/202230博康一、试验条件必备11/27/20222博康www.zj-hy3必备的实验材料3.1必备材料①鲎试剂盒：具有国家批准文号，并依法检验合格。如：湛江博康海洋生物有限公司，卫药准字（88）SJ-04。11/27/202231博康3必备的实验材料11/27/20223博康www.zj-h试剂名称用途1鲎试剂反应主剂鲎试剂与2内毒素工作品阳性对照3检查用水样本溶解鲎试剂与样本溶解4酸性调节剂调节透析液的PH值【组成成份】每盒试剂组成每盒试剂配套试验耗材：无热原试管5ml×6支；无热原试管2ml×6支；无热原吸嘴0.25ml×15支。11/27/202232博康试剂名称用途1鲎试剂反应主剂鲎试剂与2内毒素工作品②

实验室要求洁净，无尘埃流通，室内温度要求20—25℃为宜。必要时应在超净工作台操作。11/27/202233博康②实验室要求洁净，无尘埃流通，室内温度要求20—25℃为宜③

恒温箱。④

旋涡振荡器。⑤

其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。11/27/202234博康③恒温箱。11/27/20226博康www.zj-hy.c3.2取样

取样器具必须符合2010年版《中国药品检验标准操作规范》310页——细菌内毒素检查法“3实验准备”规定：无外源性内毒素。必要时可以用真空采血管（无添加剂）取样。11/27/202235博康3.2取样11/27/20227博康www.zj-hy.二、复用设备及用水要求《血液透析器复用操作规范》5.1.2水质要求：应定期检测复用用水细菌和内毒素的污染程度。应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检测。内毒素含量不得超过2EU/ml，干预限度为1EU/ml。当达到干预限度时，继续使用水处理系统是可以接受的，但应采取措施，防止系统污染进一步加重。11/27/202236博康二、复用设备及用水要求11/27/20228博康www.zj5复用设备及用水要求5.1.3水质细菌学、内毒素检测时间：最初应每周检测1次，连续2次检测结果符合要求后，细菌学检测应每月1次，内毒素检测应每3个月至少1次。11/27/202237博康5复用设备及用水要求11/27/20229博康www.zj三、供试品溶液的制备

透析用水需进行稀释。一般要求供试品溶液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于透析液，需调节PH值，可使用酸性调节剂调节PH值。11/27/202238博康三、供试品溶液的制备11/27/202210博康www.四限量检查

透析用水、透析液已有内毒素检验标准，可直接进行内毒素检查。11/27/202239博康四限量检查11/27/202211博康www.zj-hy.1、试剂和样品鲎试剂盒（生产单位：湛江博康海洋生物有限公司，灵敏度：0.125EU/ml）细菌内毒素检查用水细菌内毒素工作标准品（10EU）透析用水11/27/202240博康1、试剂和样品11/27/202212博康www.zj-hy2、限值的确定内毒素限值L=1.0EU/ml。11/27/202241博康2、限值的确定11/27/202213博康www.zj-hy3、计算稀释倍数MVD=L/λ=1.0EU/ml/0.125EU/ml=8倍11/27/202242博康3、计算稀释倍数MVD=L/λ4、操作方法

编号名称A样品管B样品阳性对照C阳性对照D阴性对照11/27/202243博康4、操作方法编号名称A样品管B样品阳性对照C阳性对照D阴透析用水8倍稀释液0.2ml图示4.1供试品溶液的制备1.4ml11/27/202244博康透析用水8倍稀释液0.2ml图示4.1供试品溶液的制备4.2阳性对照

检验鲎试剂活性及试验有效性。4.3阴性对照检验试验操作及环境是否对试验有污染。0.25EU/ml11/27/202245博康4.2阳性对照0.25EU/ml11/27/202217博补充：内毒素标准品的正确开启方法

取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程应防止玻璃屑落入瓶内。正确（易折点）错误11/27/202246博康补充：内毒素标准品的正确开启方法取细菌内毒素工作标准品注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。2、只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。11/27/202247博康注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启0.25EU/ml0.2ml0.2ml1.8ml0.6ml图示1EU/ml10EU/ml11/27/202248博康0.25EU/ml0.2ml0.2ml1.8ml0.6ml图4.4供试品阳性对照

目的是为了验证透析用水中有内毒素可以被检测出来。

0.25EU/ml/8倍11/27/202249博康4.4供试品阳性对照0.25EU/ml/8倍11/27/25鲎试剂的准备

取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，放在试管架上，排成4列，每列2支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。

11/27/202250博康5鲎试剂的准备11/27/202222博康www.zj-6加样

其中2支加入0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶液作为阳性对照;2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液作为供试品管;

2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液和0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶液作为供试品阳性对照;

2支加入0.2ml的检查用水作为阴性对照。11/27/202251博康6加样11/27/202223博康