中鉴班复方莪术油抗菌作用初步研究

诚信我，所呈交的（设计）是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，（设计）中不包含其他人已经或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或而使用过的材料。我承诺，（设计）中的所有内容均真实、。（设计）作者（签名 ..................................................................Ⅰ-前 材料与仪 材 试验仪器与设 实验方 莪术鉴别与检 莪术油的及优 复方精油抗菌实验方 复方莪术油的质量评 实验结 莪术鉴别和检查结 莪术油的及优化结 抑菌试验结 复方莪术油的质量评价结 实验结 实验...............................................................莪术油的及优 抑菌实 参考文 综 致 复方莪术油抗菌作用的初步研：目的探索提取莪术油的工艺流程并优化莪术油的提取率，以及对莪术油和其他精油复方配比后抗菌作用的初步研究。方法采用水蒸气蒸馏的方法莪术油通过单因素试验分别粒径大小料液比提取温度这三种——圈试验探究莪术油与其他固定比例的精油混合配比后的抗菌作用。结果当粉末301:8110C10%葡萄球菌、曲霉菌的抗菌作用最佳。结论：莪术油；复方精油；工艺流程；抗菌作IPreliminaryStudyonAntibacterialEffectofCompoundCurcumaOil:ObjectiveToexploretheprocessofextractionofzedoaryoilandoptimizetheextractionrateofzedoaryoil,andthepreliminarystudyontheantibacterialactionofzedoaryoilandotheressentialoilcompounds.MethodZedoaryoilwaspreparedby distillation.Thesinglefactortestcontrolledthereactionconditionsfromthreeaspectsofparticlesize,liquidratioandextractiontemperaturetodeterminetheoptimalextractionprocess.Theantimicrobialeffectofzedoaryturmericoilandotherfixedproportionofessentialoilswasstudiedbyfilterpaperdiffusionmethod.ResultWhenthepowderthroughthe30mesh,andsolid-liquidratioof1:8,extractiontemperatureof110°C,guangxirhizomazedoariaeextractionyieldthebest;Compoundzedoaryturmericoilhascertainantibacterialactionandisthebestantibacterialeffecttostaphylococcusaureusandaspergillus,whentheoilcontentis10%.InconclusionTheformulaofthecompoundzedoaryturmericoilextractionofnaturaldrugs,andotheressentialoilcompoundratio,hasobviousantibacterialeffect,andcanreducetheswellingitching,wakeup:god,efficacysignificantly,canbeusedasauniversaloilindailylife.Keywords:Zedoaryturmericoil;Compoundessentialoil;Processflow;Antibacterialactivity[9]；倘若每天给予足够量大的莪术高蛋白粉末，在一周内大鼠率达以把莪术油与其他稀释剂混合成其他剂型或和其他精油复方配伍使用，油、蜂标莪术油等，价格昂贵，货源难求，难以满内庞大的市场需柠檬草8种药材的挥发油与基础油橄榄油按一定的比例和组合方式进行混定性评价和药效评价不同组方对细菌活性的影响及消肿止痒等疗效，材料与仪2.1-阿芙精油旗舰阿芙精油旗舰阿芙精油旗舰金黄色葡萄球 药学微生物大肠 药学微生物 药学微生物 杭州微生物试剂营养肉汤原 杭州微生物试剂试验仪器与设2-2仪 型 生产厂紫外分光光度 佑科仪器仪表摇摆式高速万能 温岭市机械 立式压力蒸汽灭菌 申安医疗器械 HPX-9162MBE 博迅实业 精密科学仪器实验方莪术鉴别与检性状鉴定性鉴荧光鉴别法是根据中药的某些成分在紫外光灯下能产生特定的荧光鉴别来鉴别中药的法。对于鉴别、鉴别环境及设备均无特殊要求，（365n下观察其荧光颜色[105g2mol/L2mol/LL溶液中浸泡适当时间，蘸取适量的莪术水浸液、2mol/LH浸液、2molLL浸液于滤纸上，在紫外光灯（254nm365nm）下观察其荧光颜色。吸光度检10mL24h10mL的量瓶中，补加氯仿至刻度，摇匀，照紫外-242nm莪术油的及优粒径的优30、4070g1000mL3~48（如图3-1装置所时间至挥发油量不再增加，放置0.5h后挥发油量，同时计算提取率。莪术油提取率见公式(3-1)Yv

(公式3-式中 为挥发油提取率 为样品质量，g3-1料液比的将莪术过30目筛取50g粉置于1000mL的圆底烧瓶中分别加6、8、10、12倍水量，如上操作，调节温度保持微沸状态蒸馏足够时间至挥发油量不再增加，放置0.5h后挥发油量，同时计算提取率。将提取的莪加热温度的优油的提取至关重要。将莪术过30目筛，取70g粉置于1000mL的圆底8100℃110℃120℃、130℃0.5h后挥发油量，同时计算提取率，并观察挥发油的颜色。将提取的莪术油复方精油抗菌实验方复方精油的组方成参考市场上几种复方莪术油的配比及献调研初步固定部分精油的配比（1%100%。当复方精油复合后，应用强力搅拌机搅拌以混合均匀，3-1种 科 属 主要有效成 主要作莪 姜 姜黄(Christm.)Rosc

抗菌抗炎、 广藿 唇形

橄 橄榄 橄榄 对皮肤无刺激性，Canariumalbum(Lour.)

Ramusoliue

茶 桃金娘 白千层

Camelliasinensis(L.)O.Ktze.

瘤迷迭 唇形

抗氧化、抗、

菌抗炎、抗血栓尤加 桃金娘 桉油醇、芳香烯

种 科 属 主要有效成 主要作柠檬 禾本 香茅

欧薄 唇形 薄荷 天竺 牻牛儿苗 天竺葵

有驱避作用抗菌实验仪器准（5mm棒、镊子等用牛皮纸后放置于立式压力蒸汽灭菌器中进行湿热高压灭菌（121℃，30min）培养基3-2。3-2名 成 使用方

10.0g3.0g5.0g；5.0g15.0g；PH值

称取本品3.3100mL15min70℃以下装置高

5.0g；pH7.2±0.2

18.0g,1000mL蒸馏水中,分别装于三角瓶或试管,用牛皮注：配置好的培养基应用两层牛皮纸包好，以避免杂菌的污染0.8µm左大肠菌：为革兰氏菌，短杆状且为兼性厌氧菌，直径1µm发烧、、等症状[21-22]。本实验所用到的细菌或真菌的菌种已经采用平板分区划分离培养保存于微生物中制作菌悬液时首先配置好营养肉汤培养基，121℃30min121℃30min。灭菌完毕，取出营养肉汤，待稍冷后，于超净工作台中，点燃灯，用已经高温灭菌的接种环于灯上灼烧2~3s，待冷却后，在相应细菌的培养基中挑取2~3个单个菌落放入营养肉汤中稍振摇瓶口在灯外焰处旋转一圈密塞，37℃24h，即得大肠杆菌菌悬液，金黄色葡萄4℃保存备用。抑菌圈实灭菌完毕后，于超净工作台中，点燃灯（注：接种环必须经过灯高10100µL稀释液置于营养琼脂培养基中5mm4~5片单方精油5µL滴加在滤纸片上，待精油被滤纸充分吸收后，将培养基倒平37℃24h后观察实验结果，并用游标卡尺测量抑菌3次，记录数据。3-3抑菌圈直径≤-7.0~9.+10.0~15.≥3.4方莪术油的质量评外观性35mL离心实体验反5mL20个易被蚊虫叮10人，A组为用药组即被咬后涂抹复方莪术油，B组为空白对照组即被咬后涂抹蒸馏水，并请求他们配合在使用前用工具尺测出被蚊虫叮咬肿了的部分的直径大小以及使用复方莪术油1min、2min、3min实验结莪术鉴别和检查结莪术的性状鉴莪术的定性鉴别结液显蓝紫色荧光，2mol/LNaOH浸出液显浅黄色荧光，2mol/LHCL浸出显4.1.3术紫外检查结123450.45对莪术吸光度的规定，判断广西莪术为合格品。莪术油的及优化结粒径的优化结表4-2度对提取率的影水平（目得油量提取率实验结果如表4-2所示。实验表明10目提取率为1.09%，20目提取率为1.44%，30目提取率为1.83%，40目提取率为1.78%，在实验过程发30目筛。料液比的优化结得油量提取率注：1:61g6倍的水量，1:8、1:10、1:121:8时的提取率为1.78%，1:10时的提取率为1.76%，1:121:10时，随着料液比的增加，挥发油提取率增加的幅度并不明显，故为节约资源，在优化提取的过程中选择加入8倍水量。加热温度的优化结4-4温度得油量提取率4-4100℃1.29%101.83%，120℃1.80%，130℃1.86%；经过多次的调温10℃120℃130℃100℃中优先考虑提取温度为以提取品质良好、化学成分稳定的莪术油。图4-1棕黄色 图4-2墨绿色 图4-3黑褐色抑菌试验结4-5抑菌圈直径茶树 迷迭 尤加 柠檬 -- ---- ---- --4-6抑菌圈直径菌----------实验表明：(1)所有的单方精油对金黄色葡萄球菌菌均起抑菌作用，其显中度敏感作用，而欧薄荷精油和天竺葵精油显低度敏感作用；(2)除了茶4-74-7莪术油含量

金黄色葡萄球 曲霉 抑菌圈平均直径注：其他精油的固定配比参考了市场上几种复方莪术油的成分含量以及文献得4-14-2a为单方莪术精油，b6%，c8%,，d10%，e莪术12%。实验表明：(1)复方莪术油的质量评价结外观性离心实体验反4-9直径大小ABSPSS224-104-10t侧t侧A组上药前A组上药1minA组上药2min

95%置信

A3minAA在A组中，通过对比上药前与上药后3min叮咬部位的直径大小发现P=0.02<0.05，原假设，认为使用复方莪术油前与使用后3min存在显著差1min与上药后3min叮咬部位的直径大小发现原假设，认为使用复方莪术油1min后和3min后存在显著差异；同理比较上药后2min和3min叮咬部位的直径大小发现P=0.003<0.05,认为使用复方莪术2min3min后存在显著差异。实验结经实验证明，提取莪术油的最佳条件为：粒径大小过30目，料液比为1:8，110℃。10%的莪术精油配成的复方莪术油配比为橄榄油(80%)莪术油(10%)藿香油(2%)茶树油(2%)欧薄荷油(2%)迷迭香油(1%)尤加利油(1%)天竺葵油(1%)柠檬草油(1%)所得的对金黄色葡萄球菌和曲霉菌的抑菌效果最佳，且稳定性良好。由有效量的莪术油与其他精油复合搭配使用，具有行气活血、消积止痛、活血化瘀、去腐生肌增强机体免疫的功能,,局部无刺激性,不影响皮肤正常生理功能。3min能有效防止红肿部位的直径大小增大，发挥明显的药效作用，具有消肿止实验莪术油的及优本实验研究发现，不同批次、不同季节的生药莪术，在同样的提取条药材的粒度、浸泡时间、料液比、蒸发量与蒸发速度等都会影响挥发在[24]研究中发现，正交试验提取莪术油最佳的工艺条件为：度后发现，的研究中，其度幅较小，而加水量增幅相对较大，而本实抑菌实在[25]的研究中表明莪术油对大肠埃希菌也有一定的抑制作用，在经对大肠埃希菌也没有预想的实验结果。造成上述的原因可能有二：(1)所接种油对大肠埃希菌有抑菌作用也无法体现出来；(2)在王影[22]的研究中发现大肠埃希菌极易产生耐药性，可通过重复用药或者突变、转移产生。但本故推断此菌种可能经过多代繁衍后发生突变、产生耐药性，使莪术油 参考文国家药典.中民药典(2015年版一部)[M].：中国医药科技,2015:274-275.朱凯.中药广西莪术的化学成分研究[D].沈阳药学展晓日,,孟凡莉,等.莪术油药学研究进展[J].杭州师范大学学报(自然科学版),2011,10(05):454-458.王德立.中药莪术研究进展[J].农业科学,2014,42(11):3240-王琰,王慕邹.中药莪术的质量研究[C]药物分析优秀交流会李瑶,吴建华,.莪术油的研究进展[J].陕西中大学学报,2017,ShinobuGocho,J.Antibact,AntifungAgents.1988,19(7):329-StammatiA,BonsiP,ZuccoF,etal.Toxicityofselectedplantvolatilesinmicrobialandmammalianshort-termassays[J].Food&ChemicalToxicology,1999,37(8):813-823.,,刘明德,等.莪术对免疫性肝纤维化大鼠肝细胞膜功能的影[J].湖南中大学学报,2003,23(1):7-刘葆琴,刘雅伶.百种中药不同溶媒浸出液的荧光鉴别[J].医教研究,曾庆钱,蔡岳文,严振,等.广藿香精油的杀虫作用及其活性成分分析[J].资源与环境学报,2006,15(3):21-成珍.初榨橄榄油中酚醛抗菌、抗氧化和抗炎的研究进展[J].食品科技,吴鹏昌,.茶树油的研究进展[J].中国药业,2009,18(3):61-,时显芸,.迷迭香研究进展[J].农业科学,2010,951-陈彦桦.蓝胶尤加利精油与茉莉花精油对五专登阶运动率恢复之影响[J].实证自然医学,2013,1(1):5-14.佟棽棽.迷迭香和柠檬草的挥发性成分及其抗抑郁、抑菌作用的研究交通大学,刘颖.薄荷有效物质基础研究[D].中大学,.香叶天竺葵精油的植物生物学及其药理研究[D].华东师范大学.金黄色葡萄球菌及其肠毒素研究进展[J].中国卫生检验杂志,,王紫婷,徐瑗聪,等.[J].生物技术通报,2016,32(11):80-王影,李欣南,韩镌竹,等.大肠杆菌耐药性产生与机制研究现状[J].现代畜牧兽医,2016(1):32-37..介绍几种曲霉菌[J].植物杂志,1986(4):1-4+40-曾秋琼,,张征,等.曲霉病诊疗进展[J].皮肤科学通报,,,于萍,等.莪术细粉提取挥发油的工艺研究[J].时珍国医国药,2007,18(6):1437-1438.,郑彩娟,陈光英,等.[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(20):67-植物精油的研究进、了的研究发现挥发油具有抗过敏活性酶抑制活性、抗炎活性、抗突变和抗癌活，抗微生物活性、抗活性、驱虫活性抗氧化活性及中枢神经等诸多药理活性和用途[1]如篙子油丁香T具有抑制作用;[2淋巴循环动静脉循环系统脑脊髓神经组织脏腑及内外腺及心理健康均有医疗功效[3广泛应用于行业比如大家都比较熟精油多有适宜的香味,作为添香剂中的香料[4或有效成分添加应用于日用品和化妆品种，最常见的就是香水、花露水等;也会利用其挥发性强的特点通过鼻腔呼吸道皮肤等进入达到舒缓精神消肿祛痛的功效医学之父希波克拉底曾在古雅典时让民众在街。我国国地大物博、植物药种类繁多，植物药精油资源相当丰富，为植物精油的开发利用提供了有利的条件。、[6]等人对此还创新性地提出了利用中药配伍的原理对具有这一类作用的精油的提取方精油的抑菌研究概。、其能够开发层为杀菌药剂等人研究了植物精油的熏蒸杀。、抑菌实验用于测定抑菌剂在体外抑制微生物生长的效能虽然已的此现在还没有一个的实验操作标准。目前,精油体外抑菌的实验方法大[9]琼脂扩散法就是利用化合物可以在琼脂中扩散,使化合物扩散到的地方滤纸片牛津杯琼脂块植物精油的发展前少工作,今后植物精油的发展不应仅仅局限于传统的、食品、日植物精油的组分、结构和功能日趋化,它必将会在、品、病害成分被认为是安全的,但是也有研究,个别成分具有微量的毒性或刺激性。例如长时间使用某些植物精油或其成分,可能会过敏性皮炎。一些常见的精油成分,如香芹酚和百里香酚,在动物实验中没有副作用,但总莪术药用价值广泛，目前已有不少莪术油剂型用于行业中，如：莪上，一些化合物对的影响存在经时性问题。利用中药配伍原理复配也是也是目前的一个研究热点。本课题顺应人们的消费潮流，本着绿色环保参考文[1]滑艳,邓雁如,汪汉卿.各种挥发油的药理活性及在医学方面的应用[J].天然产物研究与开发,2003,15(