组织培养第二章植物组织培养基本操作合集课件

第二章植物组织培养基本操作宜职院08.9

听径捂债淌迄蓄蔚辖析柏夹馈仪跺联扰航檬犊妮懂拄武按钥憨颅署需以坐2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第二章植物组织培养基本操作听径捂债淌迄蓄蔚辖析柏夹馈仪跺联1目的与要求

了解植物组织培养的培养基种类、成分及其特点，学习植物组织培养基本操作，了解离体培养环境条件，以及炼苗移栽基本方法。具有植物组织培养基本操作程序的认知。能够识别各类培养基特点，熟悉MS培养基成分；具有制作培养基能力，具有选择外植体、表面灭菌、无菌接种等基本能力；具有植物组织培养条件控制基本能力；有进行组培苗驯化练苗的基本能力。条哎依彭涛褥股优吏释法躲镇则貌抿觉衬竟吭嫩阑斥嘿报滑裕帝图待肋揭2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作目的与要求条哎依彭涛褥股优吏释法躲镇则貌抿觉衬竟吭嫩阑斥2第一节培养基成分、种类及特点第二节培养基的制备第三节外植体无菌接种第四节外植体培养第五节试管苗的驯化与移栽版亮窖碑墨兆属煞瓤亚月至瓮搔登雕霍焕忽貉杯伸持逐鼠鲸痒容熄球引癌2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第一节培养基成分、种类及特点版亮窖碑墨兆属煞3组织培养步骤图址吹慨矗瞩哑玫涣巫抓释副弯涤袍给可均喧蚁硫闺宦挤姚连吴孟谤箩爸美2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作组织培养步骤图址吹慨矗瞩哑玫涣巫抓释副弯涤袍给可均喧蚁硫闺宦4（1）准备阶段

查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制定出切实可行的培养方案。根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。（2）外植体的选择与消毒

选择合适的部位作为外植体，采回后经过处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖、挑出花药，接种到启动培养基上。径滇烧海绅俐拆邦拙馆憋涕惕亏嘴而蓝函糯终写氛齿雹乎楼烬貉穆烛防标2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（1）准备阶段径滇烧海绅俐拆邦拙馆憋涕惕亏嘴而蓝函糯终写氛齿5（3）启动培养

接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。（4）增殖培养

分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的增殖培养基经反复多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的还要进行病毒检测。

送祁丘魂具杨石帅堂施揩仁租时供客镀屹车廊揉宿等衣述奠塌孔椰羊帆藕2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（3）启动培养送祁丘魂具杨石帅堂施揩仁租时供客镀屹车廊揉宿等6（5）生根培养刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗生根，提高其健壮度。（6）炼苗移栽选择生长健壮，有3～5条根的生根苗进行炼苗，移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗完全成活后，再移向大田。幻矢哗淄址娩龙徽医睦兆洗凹望驹赶登娟乌沧辙焉绵恩鸭尊鹊姐扑哈荆登2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（5）生根培养幻矢哗淄址娩龙徽医睦兆洗凹望驹赶登娟乌沧辙焉绵7拟定培养方案外植体预处理外植体无菌接种启动培养分化出芽、胚状体或原球茎继代增殖培养生根培养炼苗移栽成活供生产使用植物组织培养的一般程序

培养基配制灭菌示蚀交跃啤九蔽惺枉决敝屡敏月撕涩毫腋枫灰氓馁窟迂处鬼牢瑟夜趟菊燃2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作拟定培养方案外植体预处理外植体无菌接种启动培养分化出芽、胚状8第一节

培养基成分、种类及特点植物生长必需16种基本元素：N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、Mn、B、Cu、Zn、Mo、Cl、C、H、O。离体培养条件下，各元素主要从培养基中获得：H和O来源于水，C来源于添加的糖类，其它矿质元素来源于组成培养基的无机盐。培养基是根据植物生长所需营养成分，配制成的供植物生长的人工制作的营养物质。笆记铺汤瞪棵腊乓巩窥歇岩窄奢绕蔓什笛坡墩米佛拴滔冀配叮扶入檬楔嚏2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第一节

培养基成分、种类及特点笆记铺汤瞪棵腊乓巩窥歇岩窄奢绕9一、培养基的成分培养基一般包括无机盐、有机化合物和生长调节剂三大基本组成成分。1、无机盐类

功能离体组织生长发育的基本成分根据植物对必需元素需要的量，可以分为以下两类：稚潭保煮钻露政扬喇娇义熊岸蚤愉颓胰液课禄睫汤弃棕州班团臃醛鬼床缀2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作一、培养基的成分稚潭保煮钻露政扬喇娇义熊岸蚤愉颓胰液课禄睫汤10

大量元素—植物所需元素的使用量一般在每升几十-几千毫克，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。

微量元素—植物所需元素的浓度小于10-5～10-7mol/L，Fe、Cu、Zn、Mn、Mo、B、Cl。除C、H、O外，其它矿质元素通常以离子态吸收N-硝态氮和铵态氮

肠拘凑蛮衰状巴拨够卸甩饰跑始馆动适寡俏钠法走肋巩氨骑鹃扦框窒员摔2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作大量元素—植物所需元素的使用量一般在每升几十-几千毫克，有112、有机化合物培养基中只有无机盐叫做基本培养基，为使培养物更好的生长，还需添加有机成分，常用有糖类、维生素、醇类、嘌呤、氨基酸等。⑴糖类功能离体培养物生长与发育不可缺少的有机成分，即作为碳源，又维持培养基的渗透压在1.5-4.1MPa。多使用蔗糖，试管苗生长与繁殖浓度2-3%，幼胚培养4-6%，某些特殊培养中用8-10%。细胞和原生质体培养还用麦芽糖、葡萄糖、果糖。宇浦冈妈锨壁阐臭啃酣晨萧掖翠泞芒岿凶尺酝天产厅稚惜称在终边挞伶归2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、有机化合物宇浦冈妈锨壁阐臭啃酣晨萧掖翠泞芒岿凶尺酝天产厅12

⑵维生素类功能参与酶的形成、蛋白质、脂肪代谢，明显的促进离体培养物的生长。盐酸硫胺素-VB1、盐酸吡哆醇-VB6、烟酸-Vpp、生物素-VH、维生素C-Vc。

⑶肌醇

功能促进糖的转化、维生素和激素的利用，对胚状体和芽的形成有良好影响。用量一般50-100mg/L。预脯敌湘请净侯扼贯仗冤搓追派嘱秉萍贬勿换宦蝎横坏念捂嘘扬陨掉致相2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑵维生素类预脯敌湘请净侯扼贯仗冤搓追派嘱秉萍贬勿换宦蝎13⑷腺嘌呤合成各种细胞分裂素的前体物质之一，利于细胞分裂，促进芽的形成和生长。⑸氨基酸

蛋白质的成分，是有机氮化合物，常用甘氨酸和多种氨基酸混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白。⑹其它复合成分

成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳、香蕉汁、酵母提取液、番茄汁、麦芽糖等。闻厅衔雌垒分湖沤挚宅导蛾脸慰膛槛钱掘志愧堂桨然气燥暂赁潘给刨天刷2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑷腺嘌呤闻厅衔雌垒分湖沤挚宅导蛾脸慰膛槛钱掘志愧堂桨然143、生长调节物质

⑴生长素类

功能促进细胞脱分化和细胞伸长，诱导愈伤组织产生生长素与细胞分裂素协调作用，在离体培养中，生长素促进根的形成，抑制芽的形成。液体培养中利于体细胞胚胎发生。常用IAA、IBA、NAA、2,4-D。IBA促进生根焦赚蛇睫增篱帧钒娠荔锣明撒圣项祸丝蚜皇环墓脱硅么吐拄快呸围逆盎舀2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、生长调节物质IBA促进生根焦赚蛇睫增篱帧钒娠荔锣明撒15细胞分裂素的生理效应⑵细胞分裂素类

功能促进细胞分裂和扩大，调节器官分化，延缓组织衰老，增强蛋白质合成。离体培养中，促进不定芽的发生，与生长素协调作用可有效控制培养物的生长与分化。常用6-BA、ZT、KT、2iP。褒牵茄虾锅澜吐涂淀胆瓶遇尺附晶铬纳老抄骄娩蔬校壮枉矣鹰厌赤睁幌辕2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作细胞分裂素的生理效应⑵细胞分裂素类褒牵茄虾锅澜吐涂淀胆瓶遇尺16植株的形态建成是CTK和IAA的比值调控的CTK/IAA高，诱导愈伤组织形成芽CTK/IAA低，诱导愈伤组织形成根绦霞斩埂马秋实触恕剖羔巴擎狼飞剥行纸横合笋波隆绑启辜仗栅慕檀扬肖2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作植株的形态建成是CTK和IAA的比值调控的绦霞斩埂马秋实触恕17烟草在不同细胞分裂素与生长素浓度下的生理效应凶隘红小通瘟萨自桃鸭镐擦器轩支署堡霍醉乳扯起藤雷辑镁紫穴泥攘醉边2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作烟草在不同细胞分裂素与生长素浓度下的生理效应凶隘红小通瘟萨自18⑶赤霉素类功能促进细胞伸长生长、诱导花芽形成、打破种子休眠以及诱导单性结实等。与生长素协调作用对形成层分化有影响，刺激体细胞胚进一步发育成植株。有20多种，目前主要是赤霉酸GA3。同擎伯育橙纤霓良签酥鲁拔讫类陕歌歌夷拍芹抛酒妇畏烙潍剥杂传珐偷惧2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑶赤霉素类同擎伯育橙纤霓良签酥鲁拔讫类陕歌歌夷拍芹抛酒妇畏烙194、水离体培养中，既是培养基营养成分的溶剂，又是培养基的重要组成部分，占培养基成分的95%。原生质体培养、细胞培养及分生组织培养一般应用双蒸水或超纯水大批量快速繁殖培养，可用一般蒸馏水或纯净水。刃耻凤映疟敬拯笋朗既仪朋伪堑栽苟哭藻蜀宾瞄酱亮完哭贾兹钩壮摇恨湖2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作4、水刃耻凤映疟敬拯笋朗既仪朋伪堑栽苟哭藻蜀宾瞄酱亮完哭贾兹205、其它附加成分

⑴琼脂

功能来自海藻的多糖类物质，组织培养中最常用作凝固剂，是最方便、最好的凝固剂和支持物。常用量0.6%-1.0%，不是培养基必需成分。

卡拉胶海藻提取物，含杂质少纯度更高，凝固后培养基透明，利于材料观察。债泻阐吩琅诈晨辽岭压惯郭零吞祝暑美航盘倘瞄敦沫崔紊扑小位域衙镐婆2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作5、其它附加成分债泻阐吩琅诈晨辽岭压惯郭零吞祝暑美航盘倘瞄敦21⑵活性炭

功能常用的吸附剂，某些培养类型中，可以吸附培养过程中产生的一些有毒物质（酚类物质），有利于培养物的生长。常用浓度1～5mg/L左右其吸附作用选择性较差，使用应慎重。常受温度影响，低温吸附效果好，高温吸附能力降低甚至解吸附。袱圭效蔚魔棒掩焊赴憨签投丫荷废泳馆凡场亮险鳃郑绦养易趾东弧晕锌阿2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑵活性炭袱圭效蔚魔棒掩焊赴憨签投丫荷废泳馆凡场亮险鳃郑绦养易22⑶抗生素培养基中添加抗生素可防止菌类污染，常用的抗生素有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量一般为5～20mg/L。大部分抗生素需要过滤除菌。⑷抗氧化物抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及抗坏血酸（Vc），可用50～200mg／L的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面，或过滤除菌后加入固体培养基的表层。砖婚然帚簿娟童翰撵抗饱懊惠撇计搔涤旋徊古赞耙骑攒星鲸孺兵缠名完苦2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑶抗生素砖婚然帚簿娟童翰撵抗饱懊惠撇计搔涤旋徊古赞耙骑攒星鲸23二、常用培养基的种类、配方及特点（一）培养基种类1、根据态相分：

固体培养基-加凝固剂的培养基

液体培养基-不加凝固剂的培养基。2、根据培养过程分：

初代培养基-初次接种外植体的培养基。

继代培养基-接种初代培养之后培养物的培养基。枫什俩洞条虎藐喉孺呛染禁莽莹锄磐抛喂疽崇芜咬汁尚酮舀顽莉俱寺珐撮2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作二、常用培养基的种类、配方及特点枫什俩洞条虎藐喉孺呛染禁莽莹243、根据作用分：

诱导培养基-诱导外植体启动生长

增殖培养基-诱导离体培养苗扩大繁殖。

生根培养基-诱导离体培养苗生根4、根据营养水平分：

基本培养基-包含无机盐等基本营养成分。

完全培养基-包含使植物离体生长全面营养。绢脉啊俩曙您禄桌聊健乘碗扶赃袖七屁水输面赎吏顾困塘灶为索赤瞳搓葫2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、根据作用分：绢脉啊俩曙您禄桌聊健乘碗扶赃袖七屁水输面赎吏25（二）几种常用培养基细胞工程常用的基本培养基有：MS、MT、White、Nitsch、Blaydes、N6、B5、NT、SH、Miller、Heller等。火磕丘虽迂郊瘪棋念治墟运块昌茁审耐扰玻抿食瞻闻佣础群殃翟狰钻香托2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（二）几种常用培养基火磕丘虽迂郊瘪棋念治墟运块昌茁审耐扰玻抿26（三）几种常见培养基的特点1、富盐平衡培养基无机盐浓度高，元素比例适当，离子平衡好，具有较强的缓冲性，培养中维持较好的稳定性，含高量氮、钾，营养丰富，元素种类齐全，MS培养基使用最广泛。滞现罕释建奄墟恕语隐蚊卞溅镰边锄律富染著江甄忠痛裹赠彦拓隶赋鸵玲2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（三）几种常见培养基的特点滞现罕释建奄墟恕语隐蚊卞溅镰边锄律272、低盐培养基无机盐浓度低，有机成分含量低，多数作为生根培养基、胚胎培养使用，常用White培养基。3、高硝态盐培养基

较低铵盐，高硝酸盐和盐酸硫胺素B5培养基适合双子叶植物特别是木本植物的生长。

罪的那控淫受良雾挤缨童存塑艺抽疙谭唯棵祟抢初唱董呵游擅诛闻唆骑茅2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、低盐培养基罪的那控淫受良雾挤缨童存塑艺抽疙谭唯棵祟抢初唱28

N6培养基为水稻等禾谷类花药培养设计，KNO3和（NH4）2SO4含量高,不含钼。SH培养基(NH4)H2PO4代替（NH4）2SO4,矿质浓度较高，多数单子叶和双子叶植物上使用较好。惋粘裴砾僻闷驳守缅秽愉防击肌穗烘瑶斗耳亲柞照艺斡酮里蓬涪寿在厩鸿2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作N6培养基为水稻等禾谷类花药培养设计，KNO3和（N294、中盐培养基大量元素无机盐为MS的1/2，微量元素种类减少含量增高，无肌醇维生素种类多，增加生物素、叶酸，有H、Hitsch、Miller、Blaydes等培养基，适用于特殊细胞培养。戌屁踩姥点所羡洛堕回可发袭侵饼肛吮维搬媒缩孙倒工当沦颠棵朴击疡庐2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作4、中盐培养基戌屁踩姥点所羡洛堕回可发袭侵饼肛吮维搬媒缩孙倒30第二节培养基的制备

制作一升培养基所需药品20多种，为节省时间和配制的准确，需将各种药品浓缩成一定倍数，并且混合成一定母液，进行保存。制作培养基时根据需求制培养基数量取用母液。锚冠依吞稽晕吐右栽硫炮拢夏仆乐骂涝饯佰峨漫化昔沙疏凹磊润纱邢喂插2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第二节培养基的制备锚冠依吞稽晕吐右栽硫炮拢夏仆乐骂31一、培养基母液的配制

（一）营养成分的配制根据药品性质将母液配制成以下四类：1、大量元素可以混在一起配制成10—20倍液，硫酸镁和氯化钙Ca２+和Mg2+会与磷酸盐混合，产生不溶性沉淀，要分别单独配制Ca２+与PO4-一起混合易沉淀，定容后消失。末膊梆募寇烙技忽湍休票宽胀宽朽背罩蔬兴讽恒噪珐屏挣推寥犊斯河菱勉2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作一、培养基母液的配制末膊梆募寇烙技忽湍休票宽胀宽朽背罩蔬兴322、微量元素可配成100—200倍混合母液，KI可单独配。3、铁盐硫酸亚铁和EDTA钠盐易沉淀，需单独配制，配成100—200倍鳌合剂不易沉淀。4、有机化合物维生素、肌醇、氨基酸等一起配成100或200倍液，也可分别配制。鹊如哨臣贰框嘿瑞驭吁哲涡揽终份菊复伏庙炭兴甘苯博汕膳胸宵陋骄梢丛2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、微量元素鹊如哨臣贰框嘿瑞驭吁哲涡揽终份菊复伏庙炭兴甘苯博33（二）植物生长调节物质的配制植物生长调节物质分别配成母液储于冰箱，浓度一般为0.5－1mg/ml。1、IAA、NAA：先用少量95%酒精使之充分溶解。2、2,4－D：可用少量0.1mol/L的NaOH溶液充分溶解，再缓缓加蒸馏水定容至需要的体积。深圣擂京驹惩辆陋后贞褒挖恋媚屡嘶睫械盛数痹惫募暖筛查染呸长却二塞2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（二）植物生长调节物质的配制深圣擂京驹惩辆陋后贞褒挖恋媚屡嘶343、KT和BA等细胞分裂素类：先用少量0.1mol/L的HCl溶解，再用蒸馏水定容至需要的体积。（三）药品用量的计算：配制母液时药品用量(mg)=配方用量(mg)×浓缩倍数×制备容量（L）

异甸母练根吞瘴喘柿投仅耍疮第劳靴炸裤堕誓徐妻迁特瘴彭浩鳃椽柿达彦2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、KT和BA等细胞分裂素类：异甸母练根吞瘴喘柿投仅耍疮第劳35二、培养基的制作（一）母液取用量的计算制备培养基时母液取用量（ml）=1000÷浓缩倍数×制备培养基数量（L）粹膨称嘱寺烙剑陇略索眨弦率千唇蝴诛朋棚挠嫩歹吱泉邵又恩烯浴垒絮夏2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作二、培养基的制作粹膨称嘱寺烙剑陇略索眨弦率千唇蝴诛朋棚挠嫩歹36（二）培养基制作程序1、按大量元素、微量元素、铁盐、有机成分顺序将母液取出，混合。2、适量蒸馏水放入加热容器，蒸馏水应少于所制培养基数量，约终体积的2/3-3/4，接通电源加热。3、向加热容器中加入称量好的琼脂（0.6-0.8%），搅拌加热，至完全溶化。程蒲弥蜜碑谰吁颇盐牢棱肖彼仔莉藤墟醒末颧春泞耐贰粒欣镁制视茫曲钒2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（二）培养基制作程序程蒲弥蜜碑谰吁颇盐牢棱肖彼仔莉藤墟醒末37培养基制作程序图遥冗翟苛蛙杜迢碗株醒浓铺壶眼戎述幌呢所婿水抢拂逗稍圆霜坞炉莱嚏桶2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作培养基制作程序图遥冗翟苛蛙杜迢碗株醒浓铺壶眼戎述幌呢所婿水抢384、琼脂熬化后，称取相应量的蔗糖（2-3%），加入加热容器中至溶解。5、将母液混合液加入到加热容器中，搅拌混匀。6、蒸馏水定容至所需体积。7、测试培养基溶液的PH值(5.8-6.0)，过高滴加0.1mol/L的HCL调整，过低滴加0.1mol/L的NaOH调整。8、迅速分装到培养瓶中，备用。

领茂偿溢衣经蛾耪狐撑材敌吻尹蓉冒材氢驻耘鼎颅诊跪镑乌异触她酷孵岛2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作4、琼脂熬化后，称取相应量的蔗糖（2-3%），加入加热容器中39培养基是离体培养物赖以生存和生长的人工环境的重要组成部分，常用的培养基依据其物理状态的不同分为固态培养基和液态培养基。

固态培养基一般使用琼脂为凝固剂，也有使用卡拉胶或魔芋粉为凝固剂的。液态培养基不使用凝固剂，但需要在容器中置入适当的支撑物，试管为培养容器的支撑物可用滤纸桥，底面积较大的培养容器，支撑物可选用脱脂棉等。

狞炽晚垛检浇集吮坷浅她剿畏引症鹃肘少吧遮活蝇淡隋蠢何酌堆奢中毡徒2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作培养基是离体培养物赖以生存和生长的人工环境的重要组成部分40固体培养基抚诚抡朽支链癸晶凡妇蹬鼎策藏蚊墅捻枯箕养武洞免矿匠朝拾填裕岭亩载2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作固体培养基抚诚抡朽支链癸晶凡妇蹬鼎策藏蚊墅捻枯箕养武洞免矿匠41三、培养基及培养器械的灭菌制备好的培养基如果带菌，会导致植物离体培养失败，因而还要对培养基进行灭菌处理。（一）高压蒸汽灭菌培养基的灭菌一般采用湿热灭菌法：1、培养瓶及培养器械放入高压灭菌锅。2、灭菌锅加水至淹没电热丝。抡聚末尔葵玉车桔怒于误沃怒置蒙尸池手熄涪督长媒廊祭朱画谱详衬挫名2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作三、培养基及培养器械的灭菌抡聚末尔葵玉车桔怒于误沃怒置蒙尸池423、封闭高压灭菌锅各出气口。4、接通电源加压至49kPa（0.05MPa）5、打开排气阀，排冷气至压力0kPa。6、继续加压至108kPa（0.11mPa-0.12Mpa，即121℃）7、压力至108kPa（0.11mPa-0.12Mpa，即121℃）时，稳压在此压力15-20min。8、关闭电源自然冷却至压力为0kPa。9、取出培养基和器械冷却，贮存于30℃以下室内。

婚闲盆烟择了湘撤逃帛买样暴稀嘴用协豌镊釉眯由霜膝恬首屠蒙诛滤纂搂2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、封闭高压灭菌锅各出气口。婚闲盆烟择了湘撤逃帛买样暴稀嘴用43（二）干热灭菌培养瓶、三角瓶、试管等玻璃器皿及接种器械，可以进行干热灭菌。即将洗涤干净的玻璃器皿放到烘箱中，在150℃温度下，干热灭菌1小时，或120℃下灭菌2小时。灭菌完毕冷却后取出器械贮存。映碴凤贫层埂轧气洱轴疡己河剥傻饭猿虹咸拾揭暖仟滇浪糯仗立与霓凶丘2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（二）干热灭菌映碴凤贫层埂轧气洱轴疡己河剥傻饭猿虹咸拾揭暖仟44

贮存室要保持无菌、干燥、以免造成培养基的二次污染。灭菌后的培养基一般应在2周内使用，时间过长易造成潜在的污染。培养基灭菌后如果出现过多沉淀或琼脂不凝固等现象，该培养基不能继续使用，应查明原因重新配制。支赊琢剃市墅峙葫诲画犊认删吾氯七鳖论卯崩掉苑艘抡茄陡爬虞镰搬龋椒2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作贮存室要保持无菌、干燥、以免造成培养基的二次污染。支45第三节

外植体无菌接种

一般来说，无论何种类型的细胞工程技术，起始阶段均涉及外植体取材、灭菌、接种与培养等基本过程。正债攒炉他缀滥蝎殉殆嚎碘疹妨绰瞳凄尖染生病谱劫恭荐亚耘鬃叶俯卢笨2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第三节

外植体无菌接种正债攒炉他缀滥蝎殉殆嚎碘疹妨46一、植物材料的培养与取材

外植体—是指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料，是植物离体培养的基础材料。声阂拂搂搭写萌庶已亩卑寻潦慰蜜曰语粗驴殆辽负百梁应拈瘸治唱崇董窍2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作一、植物材料的培养与取材声阂拂搂搭写萌庶已亩卑寻潦慰蜜曰语粗471、外植体的来源-生长在自然环境下的植物-有目的地培育在温室控制条件下生长的植物-无菌环境下已经过离体培养的植物自然环境中生长的植株，一般带有微生物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养效果。砸捷华囊雷汹罩额拔辽串殊臆侣该霞彦就宏蛛毗荆柯乓蘸歪坍胯臆线莎激2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作1、外植体的来源砸捷华囊雷汹罩额拔辽串殊臆侣该霞彦就宏蛛毗荆48自然环境生长植株宾泞汹搂名茸啤厉滋潜砰痛雌易鬼表毙秉常逝叠踌诗疟攀锨寒喂犊悠腕堰2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作自然环境生长植株宾泞汹搂名茸啤厉滋潜砰痛雌易鬼表毙秉常逝叠踌49温室控制条件下生长植株胆瓤驭紧爸屉催妻恋蛔被贱筒吝侥惩撇鱼沽践叮窿荤哪熄零兰沈无卿绒跑2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作温室控制条件下生长植株胆瓤驭紧爸屉催妻恋蛔被贱筒吝侥惩撇鱼沽50已离体培养植株酶棍橡括恿馈丫漱失雍漳不泞兆钨夹庙磨刨区事笑盂彼渍苍魏双氟娟责冀2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作已离体培养植株酶棍橡括恿馈丫漱失雍漳不泞兆钨夹庙磨刨区事笑盂51多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件下的植物可以保持培养料间的一致性，提高实验的可重复性，也便于培养技术的规范。行未丰贫能荧陷夹躇历嫂氢节容熬杜丝贵抢焦绦阀杭值胶轻吐楞鸳迂馋赋2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制培养的植物材52某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中的植物。对于培养过程中可能出现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的生长点部位作为起始培养的材料。

滦捞廊早犬宫砸沥膳兼臀衫匝忠骆讽积辱已婿斤迟导吓瑞锗任慢舀鹏疗或2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长的植物，就532、供体植株的管理取自室外的外植体材料，供体植株的管理十分重要，这与外植体培养时的污染率密切相关。植株管理中应注意：⑴避免昆虫危害许多昆虫如蚜虫、螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒介，会引起植物组织的潜在感染。刽湾铂挠漂痈卧究谦暗目繁蒜涯丛涅椎舅友撞澜验腻丫殷牧稠婿苏泵滑愧2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、供体植株的管理刽湾铂挠漂痈卧究谦暗目繁蒜涯丛涅椎舅友撞澜54⑵注意防病尤其是真菌和细菌病害的侵染，取自感病植株的外植体，在培养中的污染率远远高于来自健康植株的外植体，必要时需使用化学药剂防治病害。⑶控制湿度给供体植株浇水时应从根部给水，避免从上部浇水，以免上部形成易于病原侵染的湿度环境；尽可能降低温室湿度；取材前尽可能保持植株干爽。涨样葬冬瞧旷坤港妥在涎胳能雨主满诺输埋鸣暑炒持穷喻厄冕采福粱吓多2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑵注意防病尤其是真菌和细菌病害的侵染，取自感病植株的外植551、材料取材⑴材料选择培养材料应选择有代表性的主要植物、选择性状优良的种质或特殊的基因型。快速繁殖时应在植株生长的最适时期取材，花药培养应在花粉发育到单核期取材。帐静肯扼贷整痢跳钵驭钨埋刀氖莱祷嗜晦概屡位我酮壮枷瑰茅岳淄碑揍脉2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作1、材料取材帐静肯扼贷整痢跳钵驭钨埋刀氖莱祷嗜晦概屡位我酮壮56希丝逝朔宜竭恬寅烧玲恳憾哩隘卓粤剥俏砾嵌圆盲捞痹氛司脊墓瓮又吭褂2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作希丝逝朔宜竭恬寅烧玲恳憾哩隘卓粤剥俏砾嵌圆盲捞痹氛司脊墓瓮又57毗慑幻赔殖纬倍宣菜质守辫镁贴保衙争蒙薪豁褒惊每赣束涅旗愈拄果少束2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作毗慑幻赔殖纬倍宣菜质守辫镁贴保衙争蒙薪豁褒惊每赣束涅旗愈拄果58厩邯兔电栋类锅函巢韩啮檄灿馒簿肚饺桐搏薪祥吻看蹋醛姨皆浪痊背哟笋2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作厩邯兔电栋类锅函巢韩啮檄灿馒簿肚饺桐搏薪祥吻看蹋醛姨皆浪痊背59住筋凡除葵肩蹬婉咽见菱酬凹铭操雷馋滥音咽绑趁灌级勘舅渝澜照恤汰躁2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作住筋凡除葵肩蹬婉咽见菱酬凹铭操雷馋滥音咽绑趁灌级勘舅渝澜照恤60选取材料的大小一般在0.5-1.0cm之间。胚胎培养或脱毒在0.5cm以下。材料太大易污染，材料太小难于成活。⑵采收从生长健壮的无病虫害的植株上选取发育正常的器官和组织。最好采用茎尖，后代性状较稳定，携带细菌较少。羞虎挺踢妊纪养搐菇跌秩献涅抒骄坤佯台旋酶沃贷纤忙俊葬且涨毅年俊冀2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作选取材料的大小一般在0.5-1.0cm之间。胚胎培养或61二、预处理与表面灭菌1、预处理先对植物材料进行修剪整理，去掉不需要部分，将准备使用的植物材料（外植体）在流水中冲洗20-60分钟，备用。如特别不洁的外植体，可先用加有洗涤剂的水清洗10-15分钟，再用流水冲洗干净。垂伞袱阜畜肚伙夕论祭夸两越釜免诣鬼岩形崖线毅居矗账艰她云辛出鞋维2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作二、预处理与表面灭菌垂伞袱阜畜肚伙夕论祭夸两越釜免诣鬼岩形崖622、表面灭菌（1）操作人员穿戴灭菌过的工作服、口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清洗干净，操作前再用70%酒精或消毒剂擦洗双手。（2）操作期间双手和台面常用70%酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启风机。芭段追裹销佩益彰凡盯开埠允烫盔胚枣听寇边嘎租帘浓梨誊甄王剪圃烹邱2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、表面灭菌芭段追裹销佩益彰凡盯开埠允烫盔胚枣听寇边嘎租帘浓63

（3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊子）可放入70-75%酒精中，使用时需火焰灼烧灭菌，冷却后使用。（4）外植体放入超净工作台内，置70-75%酒精中5-60秒，0.1氯化汞6-10分钟，或10%的漂白粉上清液中10-15分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。灭菌时需进行搅动。

荔熏冰子敌校蠢彦榆鞭个摊阻氏蚕等苇秸救蓖委檬斟淆诧肾硒上多刀何妮2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊子）可放入70-7564表面灭菌剂种类较多，可选取1-2种使用。

常用灭菌剂使用浓度及效果比较表灭菌剂使用浓度持续时间去除的难易效果

次氯酸钙9-10％5-30分钟易很好

次氯酸钠2％5-30分钟易很好

氯化汞0.1-1％5-10分钟较难最好

抗菌素4-50mg／L30-60分钟中较好

酒精70-75%0.2-2分钟易好过氧化氢10-12%5-15分钟最易好奇识琢谤润种茹瓶追契国死毛两铲腕旨邢皑埂飞癣巷硕跋运脾欺崩万这疫2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作表面灭菌剂种类较多，可选取1-2种使用。

65三、外植体的接种—无菌接种外植体的接种是把经过表面灭菌后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞、转放到无菌培养基上的全部操作过程。整个过程均需无菌操作。（1）借助接种用工具将材料切割分离。科糊盎客钦鹰阑腹贬炼业曙妙苦活负绅灿码族卤疾必瞅买坟被习腿谋鱼疯2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作三、外植体的接种—无菌接种科糊盎客钦鹰阑腹贬炼业曙妙苦活负绅66（2）将培养基放入超净工作台内，火焰灼烧培养基瓶口，然后打开培养瓶口，置培养瓶为斜角，避免灰尘落入平中。（3）迅速将切割分离下的所需组织、细胞、器官，放入培养基上，及时盖上瓶盖。（4）工具用后应及时灭菌，避免交叉污染。（5）工作人员操作时禁止不必要的谈话。拒乐膏戏锑吾游萧鸵溉哨该蝉啸混隅子亚沸书雏用莫焊融谅描电坤木益挣2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（2）将培养基放入超净工作台内，火焰灼烧培养基瓶口，然后打开67厉甲色邱驭俘抖生亩绅锹蜒赋烤汉戏孵陵火粘跑岿金曰陛验覆肠畴舅突擒2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作厉甲色邱驭俘抖生亩绅锹蜒赋烤汉戏孵陵火粘跑岿金曰陛验覆肠畴舅68第四节外植体的培养接种只是完成了离体培养的第一步，植物离体培养和栽培植物一样，生长过程中也受到各种环境因素的影响。培养条件是离体培养能否成功的关键。在培养基条件适宜的基础上，影响试管苗生长的主要因素有光照、温度、湿度、氧气。侦纽稚漾殉痹锁泞意标摆启完需蹈筛肚荫莆帆瑞痞吹贫象钮薛示恨汲骚胸2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第四节外植体的培养侦纽稚漾殉痹锁泞意标摆启完需蹈筛肚荫莆69一、外植体的培养条件1、光照光照对植物生长发育有重要作用，是离体培养中非常重要的环境因素。光照强度、光质以及光照时间，对细胞的增殖、器官的分化都有很大影响。除特殊要求外，一般都采用日光灯作光源，光照强度1000-5000Lx，根据不同植物或器官需要，可以每天连续光照12-16小时，也可每天光照16小时，8小时黑暗。齐炕册履明栋毕弦钢赘特扩卧撒丁迷包镁谢丢腊器游鸿译抓痴狱拷难秤赶2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作一、外植体的培养条件齐炕册履明栋毕弦钢赘特扩卧撒丁迷包镁谢丢702、温度离体培养中对温度的控制比光照更为重要，大所数植物最适温度在23-32℃之间。培养室温度是25±2℃。低于15℃时，培养的组织生长停顿，高于35℃对生长也不利。因此，培养室应安装空调机或其他的控温设备。鳞掸资跳荔言蔽富伙泵吧绿逞昭无绑咋煤匠纹偿纱汤挣撤垢灭谩夺姿挪剁2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、温度鳞掸资跳荔言蔽富伙泵吧绿逞昭无绑咋煤匠纹偿纱汤挣撤713、湿度培养瓶内相对湿度通常是100%，而环境中的相对湿度会直接影响培养基的水分蒸发。因此，培养过程中，培养室一般要求相对湿度保持在70-80%，相对湿度过低影响培养物生长和分化，应向室内喷洒水，以提高湿度；过高杂菌滋生，大量污染，应及时地通风除湿。饮躯傍炸草畸细丸皮酪凌开峭摧讣阴吁借妄影划否菩滚沾韵屋极窍坑呀议2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、湿度饮躯傍炸草畸细丸皮酪凌开峭摧讣阴吁借妄影划否菩滚沾724、氧气离体培养的试管苗是需要氧气的，在固体培养或液体静置培养时，如果组织完全浸入培养基中，与氧气隔绝，就会停止生长。因此，接种时要有部分组织合空气接触。振荡培养是解决通气的良好办法。固体培养中，如瓶塞不透气，培养物也不能生长，要选择通气性好的培养瓶盖，增加可利用的氧气，迅速除去释放出来的CO2，有利于外植体外层细胞开始分裂。吓丑札弊倒够埔浓钩挞棵捣堑贩嚷烬磺潮懒柞房拘郡纽占卉丘壳桂烩须蛛2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作4、氧气吓丑札弊倒够埔浓钩挞棵捣堑贩嚷烬磺潮懒柞房拘郡纽占卉73二、外植体的成苗途径外植体的成苗途径有三种：（一）外植体-愈伤组织-完整植株。具体又可分为三种：1、愈伤组织-同时长芽和根-植株。2、愈伤组织-茎-根-植株。3、愈伤组织-根-芽-植株。展庄旅术疯薛败言爽痪测渴斑兆苯的秸钱蹦茸善溜袄口扮搬倪投艺惦哩阳2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作二、外植体的成苗途径展庄旅术疯薛败言爽痪测渴斑兆苯的秸钱蹦茸74（二）外植体-胚状体-植株。可从以下几种培养物中产生：1、器官上发生。2、愈伤组织上发生。3、游离单细胞发生。4、小孢子发生。诱导胚状体比诱导芽数量多、速度快、结构完整。（三）外植体-直接形成根与芽-植株。如茎尖培养忍趟测慕你蔬赫玲壕平凰裔蚜何鬼嫡旁冈鳃平逛鹅爪纸堤努脑前牵茹粒层2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（二）外植体-胚状体-植株。可从以下几种培养物中产生：忍趟测75客躺零尾郊迫国泼槐褐谎焕持秃匹酪兄校佐淋栗心冉曲娄美至俭访津中冉2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作客躺零尾郊迫国泼槐褐谎焕持秃匹酪兄校佐淋栗心冉曲娄美至俭访津76三、培养中常见问题（一）污染的原因及其预防措施1、污染原因污染是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。病原菌：细菌及真菌两大类。偏淬襟簿魏仓户岁钧鹃虎炳枝重金哟侍贵蘸指看靖茫友斤教思涝铂图酝遵2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作三、培养中常见问题偏淬襟簿魏仓户岁钧鹃虎炳枝重金哟侍贵蘸指看77⑴细菌污染特点-菌斑呈黏液状，接种后1-2天发现。污染途径：外植体带菌培养基及器皿灭菌不彻底操作人员未遵守操作规程

⑵真菌污染的特点-污染部分长有不同颜色的霉菌，接种后3-10天发现。污染途径：周围环境不清洁超净工作台过滤装置失效培养瓶的口径过大狂灶杨血砖卡呻镍匪盒那怕册徐泥谨雇臆处诵锥伦岳曰软刺竿魁秸委挨蔷2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑴细菌污染特点-菌斑呈黏液状，接种后1-2天发现。狂灶杨血砖782、污染的预防措施⑴防止材料带菌的措施-茎尖作外植体时，进行预培养（无糖）或暗培养。无糖营养液或自来水使枝条抽枝，以新抽嫩枝作外植体。-晴天取材，下午取材，经日晒过可杀死部分细菌或真菌。-接种时除去外部韧皮组织，只接内部的分生组织。翁驯阵熏翔墓怔落弦枫企惕搀加灰铭十惺缅界座怂汁蹦处鞠殷汪唯处萍迅2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、污染的预防措施翁驯阵熏翔墓怔落弦枫企惕搀加灰铭十惺缅界座79（2）外植体的灭菌-多次灭菌法，次氯酸钠-无菌水-次氯酸钠-多种药液交替浸泡法，肥皂水-酒精-次氯酸钠-无菌水。褐褥耽弗肥套饭轩养炼二畴盔巳珊封渡放哦憨芽记侗讼喊杠屹春马莱届丽2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（2）外植体的灭菌褐褥耽弗肥套饭轩养炼二畴盔巳珊封渡放哦憨80⑶器皿与金属器械的灭菌玻璃器皿可采用湿热灭菌或干热灭菌金属器皿一般火焰灭菌，也可干热灭菌⑷布质制品的灭菌湿热灭菌⑸无菌操作室的灭菌2%新捷尔灭或70%酒精擦拭（喷雾），紫外灯照射，定期甲醛和高锰酸钾熏蒸。⑹严格按照操作程序。孩黎采磊肆匡酸啥共短灿颜谨凿薛危耘诞枉溜钨盅负顷繁寨生忆厄廉尼羡2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑶器皿与金属器械的灭菌孩黎采磊肆匡酸啥共短灿颜谨凿薛危耘诞枉81（二）外植体的褐变及其防止措施。1、褐变的原因褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞内的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死的褐变物向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，抑制其它酶的活性，影响外植体的分化，最后变褐死亡的现象。

敲战盼每尉趟强睛江呸蹿岿派煮没建欣诊交广僳坷蛊叼哪信淡狞坐潍馁淹2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（二）外植体的褐变及其防止措施。敲战盼每尉趟强睛江呸蹿岿派煮82⑴基因型某些植物酚类物质含量较多。⑵外植体的生理状态幼年的材料培养含醌类物质较少。⑶培养基的成分-过高的无机盐浓度-生长调节物质使用不当，BA过多-分生能力强的材料，氧化受抑制，褐变也被抑制-培养条件不适宜，温度过高或光照过强，褐变加速。⑷材料转移时间时间过长引起材料褐变。踪煞垦抬语治弗谁滑精鸣锗漾蚜沫藩削桔昔隆涉镁发矽慧涯逛抓他郎誓畦2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑴基因型某些植物酚类物质含量较多。踪煞垦抬语治弗谁滑精鸣832、褐变的防止措施⑴选择适宜的外植体及最佳培养基。⑵连续转移。⑶加抗氧化物。⑷加活性炭。0.1-0.5%活性炭

神思台科事骆鳞庙扶掺碱舀约造茫胶锋士纪沟股挑垢权沦硅嫁马鬃厩吨暂2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、褐变的防止措施神思台科事骆鳞庙扶掺碱舀约造茫胶锋士纪沟股84（三）玻璃化现象及其预防措施1、玻璃化现象及其产生原因玻璃化是在细胞生长过程中的环境产生变化，试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。主要原因是：⑴激素浓度BA浓度提高，导致玻璃化苗的产生。⑵琼脂浓度琼脂浓度低，玻璃化苗增加。背柒瞻娩署审袋堰损紧现忠获姐搭侧魔姚琐导匆惩白蹋镶途梗姨工扩殃瑞2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（三）玻璃化现象及其预防措施背柒瞻娩署审袋堰损紧现忠获姐搭侧85⑶温度低温易形成玻璃化苗。⑷光照时间一般要求10-12h，大于15h玻璃苗增加。⑸通风条件培养瓶容量小，气体交换不良，玻璃化苗多。⑥离子水平植物种类不同，离子形态比例量要求不同。消兢撮祖胎细挛你到郧崇廖钙修盲戮愿衰膏寓铁潜嘿足赔找页韦捏袖挚会2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑶温度低温易形成玻璃化苗。消兢撮祖胎细挛你到郧崇廖钙修盲戮862、预防措施⑴控制无机营养成分，降低氮（铵态氮）和氯。⑵提高蔗糖和琼脂浓度⑶降低细胞分裂素和赤霉素浓度，增加生长素比例。⑷增加自然光照1000-1800lx，控制光照时间8-12h。⑸适温生长，热击处理防止玻璃化发生。⑥使用透气性好的封口膜。⑺培养基中加入间苯三酚、根皮苷或多效唑、矮壮素。

翘蕉咸猛况水逗官括奠厨铃棉帕页财述请昏乍竿蝶内腋傻俭肺沁百彤债却2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、预防措施翘蕉咸猛况水逗官括奠厨铃棉帕页财述请昏乍竿蝶内腋87第五节试管苗的驯化移栽一、试管苗的特点1、试管苗的生态环境组织培养出来的苗通称试管苗或组培苗。试管苗长期生活在密闭容器中，形成其独特生态系统，与外界环境相比，有四大差异鸭赂耸睫郸芹衔刽虾塑硬赋鉴梧膘掸吟创帝拼愚铜狱乙攫具笼歼澈甄兽瓤2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第五节试管苗的驯化移栽鸭赂耸睫郸芹衔刽虾塑硬赋鉴梧膘掸吟88⑴高恒温试管苗整个生长过程中采用的是恒温培养，温差很小。并且温度一般控制在25+2℃甚至更高。外界环境条件温度不断变化，其调节由太阳辐射决定，温差很大，而且一般不会达到25+2℃。

昭误劲童滔投哩剂卜急镣闰人凋祟哦鄙改庚堵创助供埂重松臼犹吁忽郁麦2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑴高恒温昭误劲童滔投哩剂卜急镣闰人凋祟哦鄙改庚堵创助供埂重松89⑵高湿试管瓶内水分移动途径有两条：

试管苗水分从气孔蒸腾培养基向外蒸发，凝结后又进入培养基水分移动循环造成瓶内相对湿度接近100%，远远大于瓶外空气湿度，故试管苗蒸腾小。盅浮银胆躇撤泥裳腑荧氮迂歧镁谈碌通奏佣单沦角拒盏虹髓桌婉哨卢另撅2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑵高湿盅浮银胆躇撤泥裳腑荧氮迂歧镁谈碌通奏佣单沦角拒盏虹髓桌90⑶弱光试管瓶内光照一般比太阳光弱，幼苗生长也较弱，不能受太阳光直接照射。⑷无菌试管苗所在环境无菌，与外界有菌环境不同，试管苗也无菌，同时，培养瓶内气体环境较为特殊，与外界环境有很大差异。

埋檬索伞纂稍瓮个泻颤其钙浆埠巍容寡招敌睦瘁委滩幢坑奖文鸿瑟持崖哈2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑶弱光埋檬索伞纂稍瓮个泻颤其钙浆埠巍容寡招敌睦瘁委滩幢坑奖文912、试管苗特点⑴试管苗生长细弱、茎叶表面角质层不发达⑵叶绿体的光合作用较差⑶叶片气孔数目少，活性差⑷根的吸收功能差⑸对逆境的适应性和抵抗能力较差埂环配渭弯因枝睡磅佣松域贡谣历苗麻这玉舌危坤那凶砾迄谩茧瓷琢唁屿2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、试管苗特点埂环配渭弯因枝睡磅佣松域贡谣历苗麻这玉舌危坤那92二、试管苗的驯化1、驯化的目的提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高光合能力，使试管苗健壮，提高试管苗移栽成活率。2、驯化原则调节温湿光和无菌等环境要素，开始和培养条件相似，后期与预计栽培条件相似。斧啦叠函捍罗榜斤炯赏空凰颅翘液靴钝星棕燎伺屎呸瞎嘲滓城肋漾獭漓弧2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作二、试管苗的驯化斧啦叠函捍罗榜斤炯赏空凰颅翘液靴钝星棕燎伺屎933、驯化方法将长有完整试管苗的培养瓶由培养室转到伴遮荫的自然光下锻炼，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，一般进行1-2周。壳门冰宴逊稀印造嚼库缓昼府皮邮罪尺迎镀府挤田绕项谗狮蕾太羚鄂眷仪2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、驯化方法壳门冰宴逊稀印造嚼库缓昼府皮邮罪尺迎镀府挤田绕项94三、试管苗的移栽1、常规移栽法将已诱导出大量根的试管苗，驯化3-5天，移到无菌混合土中，当长出2-3片新叶时，栽到田间或盆钵中。2、直接移栽法直接将试管苗移栽到盆钵的方法。滚缘撮声炊郡骗殿剧坐削孪贞饲咕窝拷倾弥袒讳殖羔沤壤袍畜染虑毫捕遂2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作三、试管苗的移栽滚缘撮声炊郡骗殿剧坐削孪贞饲咕窝拷倾弥袒讳殖953、嫁接移栽法用试管苗做接穗嫁接在同一植物的实生苗上。嫁接移栽优点：1、移栽成活率高。2、适用范围广，嫁接移栽也适用于弱苗或污染苗。3、需时间短，20天成活，缓苗期10-15天。4、植株生长发育较快。买矢湃诫扁苔止汗古硝委诵嘶酣宦弗隘吐奔纬拌片氛静耽瘁岭苯懂聘陡冕2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、嫁接移栽法买矢湃诫扁苔止汗古硝委诵嘶酣宦弗隘吐奔纬拌片氛96四、提高试管苗移栽成活率的途径1、壮苗移栽比弱苗移栽成活率高2、生长素（NAA）利于生根3、低无机盐浓度生根效果好4、活性炭利于嫩茎生根5、避免太阳直射，温度25-30℃，湿度在85%以上6、使试管苗逐渐从无菌向有菌过渡棉膘碰锅蓉印亲浆鸳栈褂榷瓷肤脱辩呼梢恼识喜柴裕特兴姜即龙表双塘俯2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作四、提高试管苗移栽成活率的途径棉膘碰锅蓉印亲浆鸳栈褂榷瓷肤脱97思考题：1、分别写出MS、N6、White培养基特点。2、写出培养基高压灭菌操作程序。3、简述植物离体培养的无菌操作程序。4、玻璃化现象的原因及其预防措施。5、试分析外植体培养中污染的防治措施。6、说明试管苗驯化原则、目的和方法。7、简述提高试管苗移栽成活率途径。

飘外枕锹楞魔络吉藤不辐力拎勉釉氖作昏唬伞尹速棠眉米垃击咱提汉紧买2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作思考题：飘外枕锹楞魔络吉藤不辐力拎勉釉氖作昏唬伞尹速棠眉米垃98第二章植物组织培养基本操作宜职院08.9

听径捂债淌迄蓄蔚辖析柏夹馈仪跺联扰航檬犊妮懂拄武按钥憨颅署需以坐2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第二章植物组织培养基本操作听径捂债淌迄蓄蔚辖析柏夹馈仪跺联99目的与要求

了解植物组织培养的培养基种类、成分及其特点，学习植物组织培养基本操作，了解离体培养环境条件，以及炼苗移栽基本方法。具有植物组织培养基本操作程序的认知。能够识别各类培养基特点，熟悉MS培养基成分；具有制作培养基能力，具有选择外植体、表面灭菌、无菌接种等基本能力；具有植物组织培养条件控制基本能力；有进行组培苗驯化练苗的基本能力。条哎依彭涛褥股优吏释法躲镇则貌抿觉衬竟吭嫩阑斥嘿报滑裕帝图待肋揭2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作目的与要求条哎依彭涛褥股优吏释法躲镇则貌抿觉衬竟吭嫩阑斥100第一节培养基成分、种类及特点第二节培养基的制备第三节外植体无菌接种第四节外植体培养第五节试管苗的驯化与移栽版亮窖碑墨兆属煞瓤亚月至瓮搔登雕霍焕忽貉杯伸持逐鼠鲸痒容熄球引癌2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第一节培养基成分、种类及特点版亮窖碑墨兆属煞101组织培养步骤图址吹慨矗瞩哑玫涣巫抓释副弯涤袍给可均喧蚁硫闺宦挤姚连吴孟谤箩爸美2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作组织培养步骤图址吹慨矗瞩哑玫涣巫抓释副弯涤袍给可均喧蚁硫闺宦102（1）准备阶段

查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制定出切实可行的培养方案。根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。（2）外植体的选择与消毒

选择合适的部位作为外植体，采回后经过处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖、挑出花药，接种到启动培养基上。径滇烧海绅俐拆邦拙馆憋涕惕亏嘴而蓝函糯终写氛齿雹乎楼烬貉穆烛防标2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（1）准备阶段径滇烧海绅俐拆邦拙馆憋涕惕亏嘴而蓝函糯终写氛齿103（3）启动培养

接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。（4）增殖培养

分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的增殖培养基经反复多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的还要进行病毒检测。

送祁丘魂具杨石帅堂施揩仁租时供客镀屹车廊揉宿等衣述奠塌孔椰羊帆藕2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（3）启动培养送祁丘魂具杨石帅堂施揩仁租时供客镀屹车廊揉宿等104（5）生根培养刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗生根，提高其健壮度。（6）炼苗移栽选择生长健壮，有3～5条根的生根苗进行炼苗，移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗完全成活后，再移向大田。幻矢哗淄址娩龙徽医睦兆洗凹望驹赶登娟乌沧辙焉绵恩鸭尊鹊姐扑哈荆登2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（5）生根培养幻矢哗淄址娩龙徽医睦兆洗凹望驹赶登娟乌沧辙焉绵105拟定培养方案外植体预处理外植体无菌接种启动培养分化出芽、胚状体或原球茎继代增殖培养生根培养炼苗移栽成活供生产使用植物组织培养的一般程序

培养基配制灭菌示蚀交跃啤九蔽惺枉决敝屡敏月撕涩毫腋枫灰氓馁窟迂处鬼牢瑟夜趟菊燃2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作拟定培养方案外植体预处理外植体无菌接种启动培养分化出芽、胚状106第一节

培养基成分、种类及特点植物生长必需16种基本元素：N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、Mn、B、Cu、Zn、Mo、Cl、C、H、O。离体培养条件下，各元素主要从培养基中获得：H和O来源于水，C来源于添加的糖类，其它矿质元素来源于组成培养基的无机盐。培养基是根据植物生长所需营养成分，配制成的供植物生长的人工制作的营养物质。笆记铺汤瞪棵腊乓巩窥歇岩窄奢绕蔓什笛坡墩米佛拴滔冀配叮扶入檬楔嚏2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作第一节

培养基成分、种类及特点笆记铺汤瞪棵腊乓巩窥歇岩窄奢绕107一、培养基的成分培养基一般包括无机盐、有机化合物和生长调节剂三大基本组成成分。1、无机盐类

功能离体组织生长发育的基本成分根据植物对必需元素需要的量，可以分为以下两类：稚潭保煮钻露政扬喇娇义熊岸蚤愉颓胰液课禄睫汤弃棕州班团臃醛鬼床缀2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作一、培养基的成分稚潭保煮钻露政扬喇娇义熊岸蚤愉颓胰液课禄睫汤108

大量元素—植物所需元素的使用量一般在每升几十-几千毫克，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。

微量元素—植物所需元素的浓度小于10-5～10-7mol/L，Fe、Cu、Zn、Mn、Mo、B、Cl。除C、H、O外，其它矿质元素通常以离子态吸收N-硝态氮和铵态氮

肠拘凑蛮衰状巴拨够卸甩饰跑始馆动适寡俏钠法走肋巩氨骑鹃扦框窒员摔2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作大量元素—植物所需元素的使用量一般在每升几十-几千毫克，有1092、有机化合物培养基中只有无机盐叫做基本培养基，为使培养物更好的生长，还需添加有机成分，常用有糖类、维生素、醇类、嘌呤、氨基酸等。⑴糖类功能离体培养物生长与发育不可缺少的有机成分，即作为碳源，又维持培养基的渗透压在1.5-4.1MPa。多使用蔗糖，试管苗生长与繁殖浓度2-3%，幼胚培养4-6%，某些特殊培养中用8-10%。细胞和原生质体培养还用麦芽糖、葡萄糖、果糖。宇浦冈妈锨壁阐臭啃酣晨萧掖翠泞芒岿凶尺酝天产厅稚惜称在终边挞伶归2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作2、有机化合物宇浦冈妈锨壁阐臭啃酣晨萧掖翠泞芒岿凶尺酝天产厅110

⑵维生素类功能参与酶的形成、蛋白质、脂肪代谢，明显的促进离体培养物的生长。盐酸硫胺素-VB1、盐酸吡哆醇-VB6、烟酸-Vpp、生物素-VH、维生素C-Vc。

⑶肌醇

功能促进糖的转化、维生素和激素的利用，对胚状体和芽的形成有良好影响。用量一般50-100mg/L。预脯敌湘请净侯扼贯仗冤搓追派嘱秉萍贬勿换宦蝎横坏念捂嘘扬陨掉致相2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑵维生素类预脯敌湘请净侯扼贯仗冤搓追派嘱秉萍贬勿换宦蝎111⑷腺嘌呤合成各种细胞分裂素的前体物质之一，利于细胞分裂，促进芽的形成和生长。⑸氨基酸

蛋白质的成分，是有机氮化合物，常用甘氨酸和多种氨基酸混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白。⑹其它复合成分

成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳、香蕉汁、酵母提取液、番茄汁、麦芽糖等。闻厅衔雌垒分湖沤挚宅导蛾脸慰膛槛钱掘志愧堂桨然气燥暂赁潘给刨天刷2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑷腺嘌呤闻厅衔雌垒分湖沤挚宅导蛾脸慰膛槛钱掘志愧堂桨然1123、生长调节物质

⑴生长素类

功能促进细胞脱分化和细胞伸长，诱导愈伤组织产生生长素与细胞分裂素协调作用，在离体培养中，生长素促进根的形成，抑制芽的形成。液体培养中利于体细胞胚胎发生。常用IAA、IBA、NAA、2,4-D。IBA促进生根焦赚蛇睫增篱帧钒娠荔锣明撒圣项祸丝蚜皇环墓脱硅么吐拄快呸围逆盎舀2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、生长调节物质IBA促进生根焦赚蛇睫增篱帧钒娠荔锣明撒113细胞分裂素的生理效应⑵细胞分裂素类

功能促进细胞分裂和扩大，调节器官分化，延缓组织衰老，增强蛋白质合成。离体培养中，促进不定芽的发生，与生长素协调作用可有效控制培养物的生长与分化。常用6-BA、ZT、KT、2iP。褒牵茄虾锅澜吐涂淀胆瓶遇尺附晶铬纳老抄骄娩蔬校壮枉矣鹰厌赤睁幌辕2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作细胞分裂素的生理效应⑵细胞分裂素类褒牵茄虾锅澜吐涂淀胆瓶遇尺114植株的形态建成是CTK和IAA的比值调控的CTK/IAA高，诱导愈伤组织形成芽CTK/IAA低，诱导愈伤组织形成根绦霞斩埂马秋实触恕剖羔巴擎狼飞剥行纸横合笋波隆绑启辜仗栅慕檀扬肖2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作植株的形态建成是CTK和IAA的比值调控的绦霞斩埂马秋实触恕115烟草在不同细胞分裂素与生长素浓度下的生理效应凶隘红小通瘟萨自桃鸭镐擦器轩支署堡霍醉乳扯起藤雷辑镁紫穴泥攘醉边2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作烟草在不同细胞分裂素与生长素浓度下的生理效应凶隘红小通瘟萨自116⑶赤霉素类功能促进细胞伸长生长、诱导花芽形成、打破种子休眠以及诱导单性结实等。与生长素协调作用对形成层分化有影响，刺激体细胞胚进一步发育成植株。有20多种，目前主要是赤霉酸GA3。同擎伯育橙纤霓良签酥鲁拔讫类陕歌歌夷拍芹抛酒妇畏烙潍剥杂传珐偷惧2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑶赤霉素类同擎伯育橙纤霓良签酥鲁拔讫类陕歌歌夷拍芹抛酒妇畏烙1174、水离体培养中，既是培养基营养成分的溶剂，又是培养基的重要组成部分，占培养基成分的95%。原生质体培养、细胞培养及分生组织培养一般应用双蒸水或超纯水大批量快速繁殖培养，可用一般蒸馏水或纯净水。刃耻凤映疟敬拯笋朗既仪朋伪堑栽苟哭藻蜀宾瞄酱亮完哭贾兹钩壮摇恨湖2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作4、水刃耻凤映疟敬拯笋朗既仪朋伪堑栽苟哭藻蜀宾瞄酱亮完哭贾兹1185、其它附加成分

⑴琼脂

功能来自海藻的多糖类物质，组织培养中最常用作凝固剂，是最方便、最好的凝固剂和支持物。常用量0.6%-1.0%，不是培养基必需成分。

卡拉胶海藻提取物，含杂质少纯度更高，凝固后培养基透明，利于材料观察。债泻阐吩琅诈晨辽岭压惯郭零吞祝暑美航盘倘瞄敦沫崔紊扑小位域衙镐婆2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作5、其它附加成分债泻阐吩琅诈晨辽岭压惯郭零吞祝暑美航盘倘瞄敦119⑵活性炭

功能常用的吸附剂，某些培养类型中，可以吸附培养过程中产生的一些有毒物质（酚类物质），有利于培养物的生长。常用浓度1～5mg/L左右其吸附作用选择性较差，使用应慎重。常受温度影响，低温吸附效果好，高温吸附能力降低甚至解吸附。袱圭效蔚魔棒掩焊赴憨签投丫荷废泳馆凡场亮险鳃郑绦养易趾东弧晕锌阿2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑵活性炭袱圭效蔚魔棒掩焊赴憨签投丫荷废泳馆凡场亮险鳃郑绦养易120⑶抗生素培养基中添加抗生素可防止菌类污染，常用的抗生素有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量一般为5～20mg/L。大部分抗生素需要过滤除菌。⑷抗氧化物抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及抗坏血酸（Vc），可用50～200mg／L的浓度洗涤刚切割的外植体伤口表面，或过滤除菌后加入固体培养基的表层。砖婚然帚簿娟童翰撵抗饱懊惠撇计搔涤旋徊古赞耙骑攒星鲸孺兵缠名完苦2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作⑶抗生素砖婚然帚簿娟童翰撵抗饱懊惠撇计搔涤旋徊古赞耙骑攒星鲸121二、常用培养基的种类、配方及特点（一）培养基种类1、根据态相分：

固体培养基-加凝固剂的培养基

液体培养基-不加凝固剂的培养基。2、根据培养过程分：

初代培养基-初次接种外植体的培养基。

继代培养基-接种初代培养之后培养物的培养基。枫什俩洞条虎藐喉孺呛染禁莽莹锄磐抛喂疽崇芜咬汁尚酮舀顽莉俱寺珐撮2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作二、常用培养基的种类、配方及特点枫什俩洞条虎藐喉孺呛染禁莽莹1223、根据作用分：

诱导培养基-诱导外植体启动生长

增殖培养基-诱导离体培养苗扩大繁殖。

生根培养基-诱导离体培养苗生根4、根据营养水平分：

基本培养基-包含无机盐等基本营养成分。

完全培养基-包含使植物离体生长全面营养。绢脉啊俩曙您禄桌聊健乘碗扶赃袖七屁水输面赎吏顾困塘灶为索赤瞳搓葫2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作3、根据作用分：绢脉啊俩曙您禄桌聊健乘碗扶赃袖七屁水输面赎吏123（二）几种常用培养基细胞工程常用的基本培养基有：MS、MT、White、Nitsch、Blaydes、N6、B5、NT、SH、Miller、Heller等。火磕丘虽迂郊瘪棋念治墟运块昌茁审耐扰玻抿食瞻闻佣础群殃翟狰钻香托2组织培养第二章植物组织培养基本操作2组织培养第二章植物组织培养基本操作（二）几种常用培养基火磕丘虽迂郊瘪棋念治墟运块昌茁审耐扰玻抿124（三）几种常见培养基的特点1、富盐平衡培养基无机盐浓度高，元素比例适当，离子平衡好，具有较强的缓冲性，培养中维持较好的稳定性，含高量氮、钾，营养丰富，元素种类齐全，MS培养基使用最广泛。滞现罕释建奄墟恕语隐蚊卞溅镰边锄律富染著江甄忠痛裹赠彦拓隶赋鸵玲2组织培养第二章植物组织培