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MTTMTT实验是检测细胞的实验方法，由于细胞与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活实验步骤普通MTT法实验步骤：到96孔板，每孔体积200μl。3-5MTT溶液（5mg/mlPBS配制，pH=7.4)10μl.4h，孔加100μlDMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。药物MTT法实验步骤贴壁细胞：100002、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,上午）加药.5-7个梯度,100μl,3-5个复孔.5个，否则难以反应真实情况MTT联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。悬浮细胞：培养基30μl；②加ActinomycinD（性）10μl用培养液稀释(液100mg/ml，需预μl加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充。每板设对照（加100μl1640）%MTT10minOD570nm（630nm校准）测量各溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜3复孔。注意事项：选择适当得细胞接种浓度和培养时间MTT结晶形成的量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太适用的。对于体积大，增殖快的细胞，比如肿瘤细胞，在96孔板中不能接种太多数目的设置调零孔设置空白孔100μl、10μlMTT、100μl吸光度范围MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。水分保持9632PBS填充,32孔中水分蒸发很快，药物易被浓缩，对实验影响大。同时加入PBS液填充后，可以一定程度上保持中间孔的水分。如果96孔板中加入了具有氧化还原性的药物，比如谷胱甘肽、VitE、VitC，那建议你用PBS将细胞洗洗，否则这些药物会将MTT还原成棕褐色沉淀，这种效果可能是你不需要的。吸收值分析培养过程中换液100μl104～550h以上，如果营48h应该换液一次。避免干 判断污染MTTMTT前可以加DMSO前要把液体吸分钟，然后吸掉上清(如果是悬浮细胞，则此法,悬浮细胞要离心2500rpm×10min.且其做MTT最好用圆

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