2022年医学专题-大肠菌群检验重点

大肠菌群检测(jiǎncè)第一页，共二十四页。检

验

程

序

检样25g(mL)样品(yàngpǐn)+225mL稀释液，均质10倍系列(xìliè)稀释选择适宜3个连续稀释度的样品(yàngpǐn)匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤管不产气产气煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告结果36℃±1℃48h±2h36℃±1℃48h±2h检样初发酵复发酵报告第二页，共二十四页。检样固体(gùtǐ)样品：在电子天平上称取25g+225mL0.85%灭菌生理盐水液体样品：直接取用固体样品存放罐第三页，共二十四页。固体样品(yàngpǐn)称量用镊子取酒精棉擦手，点燃(diǎnrán)酒精灯；打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮”键，当显示屏上的数字显示为“0”时，可开始称量。去皮键第四页，共二十四页。初发酵取（带上试管架）：单料管9支装有0.85%灭菌生理盐水(shēnglǐyánshuǐ)的生理盐水(shēnglǐyánshuǐ)灌1个装有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管3支第五页，共二十四页。操作步骤1.用酒精(jiǔjīng)棉消毒操作台第六页，共二十四页。操作步骤2.用酒精(jiǔjīng)棉消毒双手第七页，共二十四页。操作步骤3.点燃(diǎnrán)酒精灯第八页，共二十四页。操作步骤4.为装有培养基的试管(shìguǎn)编号第九页，共二十四页。为试管(shìguǎn)编号编号原则：固体样品：1、0.1、0.01（表示(biǎoshì)加入的固体样品为1g、0.1g、0.01g）液体样品：10、1、0.1（表示加入的液体样品为10mL、1mL、0.1mL）双料单料1110.10.10.10.010.010.011010101110.10.10.1第十页，共二十四页。用量筒(liángtǒng)量取225mL0.85%灭菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内）固体样品(yàngpǐn)称量后处理第十一页，共二十四页。液体样品液体(yètǐ)样品：直接吸取1mL样液至单料管中1110.10.10.11mL1mL1mL注意(zhùyì)：加样液后不能振摇试管。第十二页，共二十四页。液体样品：吸取25mL液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子(gàizi)，混匀；从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。液体样品0.10.10.125mL1mL1mL1mL注意(zhùyì)：加样液后不能振摇试管。第十三页，共二十四页。固体样品：从稀释瓶中吸取1mL样液至装有9mL0.85%灭菌(mièjūn)生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；从该试管中分别吸取1mL样液至最后三支单料管中。0.010.010.011mL1mL1mL1mL注意(zhùyì)：将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。样液加入培养基后不能振摇试管。第十四页，共二十四页。观察初发酵(fājiào)结果取回初发酵结果(jiēguǒ)，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。第十五页，共二十四页。根据对初发酵结果(jiēguǒ)的观察，有几支小倒管中有气泡，则取几支煌绿乳糖胆盐复发酵管。内有小倒管复发酵第十六页，共二十四页。在有气泡的初发酵管后的相应(xiāngyīng)位置放上复发酵管用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对(xiāngduì)应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）第十七页，共二十四页。将接种(jiēzhòng)好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。注意选择设置为36℃±1℃的培养箱。36℃±1℃48h±2h

第十八页，共二十四页。观察复发酵结果，小倒管内有气泡(qìpào)为阳性（+），无气泡(qìpào)为阴性（-）。+--+---+-注：初发酵管产气，复发酵结果(jiēguǒ)可能产气，也可能不产气。第十九页，共二十四页。查MPN表

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11第二十页，共二十四页。检验结果记录检样量初发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数10mL／／／／／／／1g（或mL）+--+--10.1g（或mL）++-+--10.01g（或mL）-+--+-10.001g（或mL）／／／／／／／培养条件温度：时间：温度：时间：检验结果MPN/g=1.1备注标准值：单项检验结论：符合（不符合）检验(jiǎnyàn)人：检验(jiǎnyàn)日期：固体(gùtǐ)样品第二十一页，共二十四页。检验结果记录检样量初发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数10mL+--+--11g（或mL）++-+--10.1g（或mL）-+--+-10.01g（或mL）／／／／／／／0.001g（或mL）／／／／／／／培养条件温度：时间：温度：时间：检验结果MPN/mL=0.11备注标准值：单项检验结论：符合（不符合）检验(jiǎnyàn)人：检验(jiǎnyàn)日期：液体(yètǐ)样品第二十二页，共二十四页。小结本次检验操作共取：双料管3支，单料管6支，装有灭菌生理盐水(shēnglǐyánshuǐ)的锥形瓶1个，装有9mL灭菌生理盐水的试管1支（固体样品），复发酵管若干支（根据初发酵结果）本次检验操作共用：固体样品：10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环液体样品：25mL移液管1支，10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环第二十三页，共二十四页。内容(nèiróng)总结大肠菌群检测。检样。36℃±1℃。装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个。（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有