生化分离工程复习题综述

生化分别工程复习题综述生化分别工程复习题综述1/49生化分别工程复习题综述看法题：1生物分别技术：是指从动植物与微生物的有机体或器官、生物工程产物（发酵液、培养液）及其生物化学产品中提取、分别、纯化适用物质的技术过程。2凝聚：在电解质作用下，破坏细胞菌体和蛋白质等胶体粒子的分别状态，使胶体粒子齐聚的过程。3.在悬浮粒子之间发生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程.4．分配系数：在必然温度、压力下，溶质分子分布在两个互不相溶的溶剂里，达到平衡后，它在两相的浓度为一常数叫分配系数。5．过滤：是在某一支撑物上放过滤介质，注入含固体颗粒的溶液，使液体经过，固体颗粒留下，是固液分其他常用方法之一。6．吸附：是利用吸附剂对液体或气体中某一组分拥有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面的过程.7．离子交换：利用离子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分别组分，依照其电荷差别，依靠库仑力吸附在树脂上，尔后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，达到分其他目的。8．色谱技术：是一组相关分别方法的总称，色谱柱的一般结构含有固定相（多孔介质）和流动相，依照物质在两相间的分配行为不相同（由于亲和力差别），经过多次分配（吸附-解吸-吸附-9利用膜的选择性由于溶液中各组分透过膜的迁移率不相同而实现分其他一种技术。10.超临界流体：超临界流体是状态高出气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。11.萃取：当含有生化物质的溶液与互不相溶的第二相接触时，生化物质倾向于在两相之间进行分配，当条件选择得合适时，所需提取的生化物质就会有选择性地发生转移，集中到一相中，而原来溶液中所混有的其他杂质（如中间代谢产物、杂蛋白等）分配在另一相中，这样就能达到某种程度的提纯和浓缩。12.AqueousTwoPhaseExtraction双水相萃取：双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相容性，当聚合物或无机盐浓度达到必然值时，就会分成不互溶的两相。因使用的溶剂是水，所以称为双水相，活性蛋白或细胞在这种环境中不会失活，但能够不同比率分配于两相。13.(Reversedmicellarextraction)反胶团萃取：表面活性剂在非极性的有机相中高出临界胶团浓度而齐聚形成反胶团在有机相内形成分其他亲水微环境。由1/25于反胶团内存在微水池这一亲水微环境可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子。

所以反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分别纯化,特别是蛋白质类生物大分子。。supercriticalfluidextraction超临界流体萃取：超临界流体拥有近似气体的较强穿透力和近似于液体的较大密度和溶解度，拥有优异的溶剂特点，可作为溶剂进行萃取、分别单体。其最大的优点在于能够在室温条件下进行目标产物分别，而且无溶剂残留。15是指但溶剂透过膜，而溶质留在膜上，所以使膜面浓度增大，并高于主体中浓度。16．微滤：以多孔薄膜为过滤介质，压力差为推动力，利用筛分原理使不溶性粒

子（）得以分其他操作。操作压力。17.超滤：是以压力差为推动力，利用超滤膜不相同孔径对液体中溶质进行分其他物理筛分过程。孔径为2-20nm，截留相对分子量在数千～数百万Dalton膜分别过程称为超滤，它主若是用于从溶剂或小分子溶质中将大分子筛分出来操作压。18.纳滤：利用超滤膜不相同孔径对液体中溶质进行分其他物理筛分过程。纳滤截

留物相对分子量范围约为～1000，能透过无机盐和水～1000Dalton或直径1nm左右的溶质粒子19在外加压力驱动下借助半透膜的选择截留作用溶剂由高浓度溶液透过半膜向低浓度浸透称为反浸透。20在层析过程中，推动固定相上待分其他物质朝着一个方向搬动的液体、气体或租临界体等，都称为流动相。21．NPC：normalphasechromatography，正相色谱，流动相极性小于固定相的分配色谱法称为正相色谱法。在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子搬动的速度快，先从柱中流出来。22．RPC：reversedphasechromatography,反相色谱：流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相色谱法。在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子搬动的速度快而先从柱中流出。：Thin-LayerChromatography薄膜色谱法，利用分布成薄层的介质，在合适的张开剂作用下完成物质的分别。24．吸附色谱法(adsorptionchromatography，AC)是靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差别而分其他方法。25是依照在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不相同物质的分配系数不相同而达到分别目的的一种层析技术。26以各种拥有网状结构的凝胶颗粒为固定相，依照流动相中所含各组分的分子大小不相同而达到物质分别目的的一种色谱技术。27．：ionexchangechromatography离子交换色谱，离子交换色谱中的2/25固定相是一些带电荷的基团，这些带电基团经过静电相互作用与带相反电荷的离子结合，从面完成不相同带电离子的分别。28．HighPerformanceLiquidChromatograpPLC高效液相色谱：是指采用颗粒极细的高效耐压新式固定相，借助高压泵来输送流动相，并配有实时在线检测器，实现色谱分别过程全部自动化的液相色谱法。29.基线：色谱解析中无试样经过检测器时，检测到的信号即为基线。30．保留时间(tR)：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间。31．亲和层析：依照生物高分子物质能与相应专一配基分子可逆结合的原理，采用必然技术，把与目的产物拥有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，则含有目的产物的混杂物（流动相）流经此固定相后，可把目的产物从混杂物中分别出来，这种分别技术称为32．疏水层析：是利用表面偶联弱疏水性基团（疏水性配基）的疏水性吸附剂为化的层析技术。33.pH值,溶质净电荷为零，分子间排斥电位降低，吸引力增大，能相互齐聚起来，积淀析出，此时溶质的溶解度最低。34.分子印迹：分子印迹技术是指制备对某一特定的目标分子(模板分子、印迹分子或烙印分子)具特异选择性的聚合物技术。35.电泳：electrophoresis,EP带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极搬动，称为电泳()称为电泳技术。36.等电聚焦电泳：是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中，当其处在低于其自己等电点的环境中则带正电荷，向负极搬动；若其处在高于其自己等电点的环境中，则带负电向正极搬动。当泳动到其自己特有的等电点时，其净电荷为零，泳动速度下降到零，拥有不相同样电点的物质最后聚焦在各自等电点位置，形成一个个清楚的区带，分辨率极高。37.包涵体外源目的基因在宿主系统中高水平表达时，因各种原因以致基因表达产物的一级结构（即氨基酸序列）诚然正确，而其高级结构是错误的，即：没有3/25生物活性的包涵体。填空1、生物分别工艺要求：高纯度;大规模;经济性;生物相容性2、杂蛋白的去除方法有：盐析法，积淀法，变性法，吸附法。3、常有的固液分别方法有：过滤filtration、离心Centrifugation、膜分离membraneseparation、双水相萃取ATPS、扩大床吸附EBA。4、细胞的机械破碎法又可分为高压匀浆破碎法、高速珠研磨破碎法和超声波破碎法5、双水相萃取中常采用的双聚合物系统为聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)/葡聚糖(dextran，Dx，PEG/Dx)，该双水相的上相富含聚乙二醇(PEG)，下相富含葡聚糖(Dx)。6、阳离子交换树脂依照活性基团分类，可分为（强酸型）7（凝胶色谱法）效液相色谱法）和（亲和色谱法）。8、离子交换分别操作中，常用的洗脱方法有（pH梯度）和（离子强度（盐）9、阴离子交换树脂依照活性基团分类，可分为（强碱型）10（葡聚糖离子交换剂）两大类。11、离子交换树脂由（载体）12pH。13、离心计按速度和离心力可分为：常速离心计、高速（冷冻）离心计、超速离心计等。14、工业离心设备从形式上可分为（管式）15依照其膜特点（孔径）不相同可分为（微滤膜），。16（板式）4/2517、影响吸附的主要要素有液pH。18、影响盐析的要素有（溶质种类）pH值）和（温度）。19、反相高效液相色谱的固定相是（非极性）的，而流动相是（极性）的；常用的固定相有（18）和（。20、超临界流体的特点是与气体有相似的（粘度（扩散系数）21、离子交换树脂的合成方法有（共聚（加聚））和（均聚（缩聚））两大类；22、等电聚焦电泳法分别不相同蛋白质的原理是依照其（等电点（pI23、依照分别机理的不相同，色谱法可分为（吸附色谱）。24、衡量色谱峰宽度的参数三种表示方法有标准偏差()、半峰宽(Y1/2)、峰底宽。25但是无论何种高效液相色谱仪，基本上由高压输液系统、进样系统、分别系统、检测系统、记录系统或色谱工作站等五大部组成。26、气相色谱的选择条件有固定相的选择、载气流速的选择、柱温的选择、进样量与进样时间的影响、色谱柱形、柱内径及柱长的选择27．气相色谱柱主要有填充柱和毛细管柱28、典型的工业过滤设备有（板框压滤机）和（真空转鼓过滤机）。29、常用离心设备可分为（离心沉降）和（离心过滤）两大类；30萃取达到平衡时，溶质在萃取相和萃余相中的（浓度的比值）必然；31、32、离子交换操作一般分为（动向）和（静态）两种；33、蛋白质等生物大分子，在溶液中呈牢固的分别状态，其原因是由于（分子表面电荷）和（水化层）；34、盐析用盐的选择需考虑（盐析作用强）5/25源丰富、经济）等几个方面的要素；35、影响有机溶剂积淀的要素有（温度）pH36.盐析的影响要素有盐离子浓度、生物分子种类、生物分子浓度、pH值、温度。37.影响有机溶剂沉析的要素温度、生物样品的浓度、pH金属离子。38.等电点沉析注意事项有等电点的改变、目的物的牢固性、盐溶作用、pH的调治。39、液－液萃取从机理上解析可分为（物理萃取）和（化学萃取）两类；40、大孔网状吸附剂有（非极性）41、影响离子交换速度的要素有（树脂粒度）。42、分配色谱的基本组成要素有（载体）。43、分子筛色谱也称（凝胶色谱）的主要应用是（脱盐）和（分级分别）44常用的膜可分为三类；45、当超声波在介质中流传时包括：机械效应、空化作用、热效应和化学效应4种效应：46、微波的基本性质平时表现为穿透、反射、吸取三个特点47、按分别原理不相同，电泳可分为区带电泳、自由界面电泳、等速电泳、等电聚焦电泳。48色谱分其他规模可分为解析规模、半制备、制备规模和工业生产规模。49、吸附法的要点是选择吸附剂和张开剂50pH4、溶液的离子强度5、电渗、温度、支持物的影响选择题：．是哪一种色谱的简称（C．离子交换色谱B.气相色谱C.高效液相色谱D.凝胶色谱．针对配基的生物学特异性的蛋白质分别方法是（C6/25A.凝胶过滤B.离子交换层析C.亲和层析D.纸层析．盐析法积淀蛋白质的原理是（B）A.降低蛋白质溶液的介电常数B.中和电荷，破坏水膜C.与蛋白质结合成不溶性蛋白D.调治蛋白质溶液pH到等电点．从组织中提取酶时，最理想的结果是（C）A.蛋白产量最高B.酶活力单位数值很大C.比活力最高最小．合适于亲脂性物质的分其他吸附剂是（B．活性炭B.氧化铝C.硅胶D.磷酸钙．以下哪项酶的特点对利用酶作为亲和层析固定相的解析工具是必需的？（B）A.该酶的活力高B.对底物有高度特异亲合性C.酶能被控制剂控制D.酶拥有多个亚基．用于蛋白质分别过程中的脱盐和更换缓冲液的色谱是（C）．离子交换色谱B.亲和色谱C.凝胶过滤色谱D.反相色谱．合适小量细胞破碎的方法是（B）A高压匀浆法B.超声破碎法C.高速珠磨法D.高压挤压法．盐析法积淀蛋白质的原理是（B）A.降低蛋白质溶液的介电常数B.中和电荷，破坏水膜C.与蛋白质结合成不溶性蛋白D.调治蛋白质溶液pH到等电点．蛋白质分子量的测定可采用（C）方法。．离子交换层析B.亲和层析C.凝胶层析D.聚酰胺层析．基因工程药物分别纯化过程中，细胞收集常采用的方法（C）．盐析B.超声波C.膜过滤D.层析．离子交换剂不适用于提取（D）物质。．抗生素B.氨基酸C.有机酸D.蛋白质．人血清清蛋白的等电点为，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（）A：正极搬动；：负极搬动；：不搬动；：不确定。．蛋白质拥有两性性质主要原因是（B）：蛋白质分子有一个羧基和一个氨基；：蛋白质分子有多个羧基和氨基；：蛋白质分子有苯环和羟基；：以上都对．使蛋白质盐析可加入试剂（D）7/25：氯化钠；：硫酸；：硝酸汞；：硫酸铵．凝胶色谱分其他依照是（B、固定相对各物质的吸附力不相同B、各物质分子大小不相同D．非对称膜的支撑层（C、与分别层资料不相同B、影响膜的分别性能、只起支撑作用D、与分别层孔径相同．以下哪一项为哪一项强酸性阳离子交换树脂的活性交换基团（A）A磺酸基团（-SO3H）B羧基-COOHC酚羟基65OHD氧乙酸基-OCHCOOH．依离子价或水化半径不相同，离子交换树脂对不相同离子亲和能力不相同。树脂对以下离子亲和力排列序次正确的有（A、﹥Ca2+﹥Na+B、Na+﹥Ca2+﹥Fe3+C、Na+﹥Rb+﹥Cs+D、Rb+﹥Cs+﹥Na+5000的物质与5000分子量以下的物质分开采用（D、SephadexG-200B、SephadexG-150C、SephadexG-100D、SephadexG-50．在蛋白质初步提取的过程中，不能够使用的方法（C、双水相萃取B、超临界流体萃取C、有机溶剂萃取D、反胶团萃取．离子交换法是应用离子交换剂作为吸附剂，经过（A）将溶液中带相反电荷的物质吸附在离子交换剂上。、静电作用B、疏水作用C、氢键作用D、范德华力．丝状（团状）真菌合适采用（A）破碎。、珠磨法B、高压匀浆法C、A与B结合D、A与B均不能够．用来提取产物的溶剂称（C、料液B、萃取液C、萃取剂D、萃余液。．阴离子交换剂（C、可交换的为阴、阳离子B、可交换的为蛋白质C、可交换的为阴离子D、可交换的为阳离子．分配层析中的载体（C、对分别有影响B、是固定相C、能吸附溶剂组成固定相D、是流动相．凝胶色谱分其他依照是（B、固定相对各物质的吸附力不相同B、各物质分子大小不相同D8/25．洗脱体积是（C、凝胶颗粒之间空隙的整体积B、溶质进入凝胶内部的体积、与该溶质保留时间相对应的流动相体积D、溶质从柱中流出时所用的流动相体积一般先将其转变为（B、钠型和磺酸型B、钠型和氯型C、铵型和磺酸型D、铵型和氯型．吸附色谱分其他依照是（A、固定相对各物质的吸附力不相同B、各物质分子大小不相同、各物质在流动相和固定相的分配系数不相同D、各物质与专一分子的亲和力不相同．下面哪一种是依照酶分子专一性结合的纯化方法（AA.亲和层析B.凝胶层析C.离子交换层析D.盐析．纯化酶时，酶纯度的主要指标是：（D）A.蛋白质浓度B.酶量C.酶的总活力D.酶的比活力．盐析法纯化酶类是依照（B）进行纯化。A.依照酶分子电荷性质的纯化方法B.调治酶溶解度的方法C.依照酶分子大小、形状不相同的纯化方法D.依照酶分子专一性结合的纯化方法．分子筛层析纯化酶是依照（C）进行纯化。A.依照酶分子电荷性质的纯化方法B.调治酶溶解度的方法C.依照酶分子大小、形状不相同的纯化方法D.依照酶分子专一性结合的纯化方法．颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（A）A.越小B.越大C.不变D.无法确定．工业上常用的过滤介质不包括（D）A.织物介质B.积聚介质C.多孔固体介质D.真空介质．以下物质属于絮凝剂的有（A、明矾B、石灰C、聚丙烯类D、硫酸亚铁．以下哪项不是蛋白质的浓度测定的方法（D、凯氏定氮法B.双缩脲法C.福林-酚法D.核磁共振．供生产生物药物的生物质源不包括（D）A.动物B植物C.微生物D.矿物质．发酵液的预办理方法不包括（C）9/25A.加热B絮凝C.离心D.调pH．其他条件均相同时，优先采用那种固液分别手段（B）A.离心分别B过滤C.沉降D.超滤．那种细胞破碎方法适用工业生产（A）A.高压匀浆B超声波破碎C.浸透压冲击法D.酶解法．高压匀浆法破碎细胞，不适用于（D）A.酵母菌B大肠杆菌C.巨大芽孢杆菌D.青霉．关于萃取以下说法正确的选项是（C）A.酸性物质在酸性条件下萃取B碱性物质在碱性条件下萃取C.两性电解质在等电点时进行提取D.两性电解质偏离等电点时进行提取．液一液萃取常常发生乳化作用，怎样防范（D）A.激烈搅拌B低温C.静止D.加热．在葡聚糖与聚乙二醇形成的双水相系统中，目标蛋白质存在于（A）A.上相B下相C.葡聚糖相D.以上都有可能．当两种高聚物水溶液相互混杂时，两者之间的相互作用不能够能产生（）A.互不相溶，形成两个水相B两种高聚物都分配于一相，另一相几乎全部为溶剂水C.完好互溶，形成均相的高聚物水溶液D.形成积淀．超临界流体萃取中，怎样降低溶质的溶解度达到分其他目的（C）A.降温B高升压力C.升温D.加入夹带剂．盐析操作中，硫酸铵在什么样的情况下不能够使用（B）A.酸性条件B碱性条件C.中性条件D.和溶液酸碱度没关．有机溶剂为什么能够积淀蛋白质（B）A.介电常数大B介电常数小C.中和电荷D.与蛋白质相互反响．蛋白质溶液进行有机溶剂积淀，蛋白质的浓度在（A）范围内合适。％-2％B1％-3％C.2％-4％D.3％-5％．若两性物质结合了很多阳离子，则等电点pH会（A）A.高升B降低C.不变D.以上均有可能．若两性物质结合了很多阴离子，则等电点pH会（B）A.高升B降低C.不变D.以上均有可能．生物活性物质与金属离子形成难溶性的复合物沉析，尔后适用（C）去除金属离子。10/25A.SDSBCTABC.EDTAD.CPC．那一种膜孔径最小（C）A.微滤B超滤C.反浸透D.纳米过滤．超滤技术常被用作（C）A.小分子物质的脱盐和浓缩B小分子物质的分级分别C.小分子物质的纯化D.固液分别．微孔膜过滤不能够用来（D）A.酶活力测定BmRNA的测定及纯化C.蛋白质含量测定D.分分离子与小分子．吸附剂和吸附质之间作用力是经过（A）产生的吸附称为物理吸附。A.范德华力B库伦力C.静电引力D.相互结合．羧酸型离子交换树脂必定在（C）的溶液中才有交换能力A.pH＞5BpH﹤7C.pH＞7D.pH﹤5．分子筛层析指的是（C）A.吸附层析B分配层析C.凝胶过滤D.亲和层析．常用的紫外线波长有两种（B）A.256nm和365nmB254nm和365nmC.254nm和367nmD.256nm和367nm．进行梯度洗脱，若用50g吸附剂，一般每份洗脱液量常为（B）A.20mLB50mLC.90mLD.100mL．离子交换用的层析柱直径和柱长比一般为（B）之间A.1/10-1/20B1/10-1/50C.1/10-1/30D.1/20-1/50．离子交换层析的上样时，上样量一般为柱床体积的（C）为宜。A.2％-5％B1％-2％C.1％-5％D.3％-7％．经过改变pH值从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来，可使用（A）A.阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱B阳离子交换剂一般是pH值从高到低洗脱C.阴离子交换剂一般是pH值从低到高D.以上都不对．那一种凝胶的孔径最小（A）A.SephadexG-25BSephadexG-50C.SephadexG-100D.SephadexG-200．那一种凝胶的吸水量最大（D）A.SephadexG-25BSephadexG-50C.SephadexG-100D.SephadexG-200．葡聚糖凝胶可使用那种溶剂溶胀（C）A.甲醇B乙醇C.缓冲液D.乙酸乙酯11/25．疏水亲和吸附层析平时在（D）的条件下进行A.酸性B碱性C.中D.高浓度盐溶液．当硅胶吸水量在（B）以上时，就失去其吸附作用A.13%B17%C.10%D.15%．气相色谱的载气不能够用（C）A.氢气B氦气C.氧气D.氮气．关于电泳分别中迁移率描述正确的选项是（A）A.带电分子所带净电荷成正比B分子的大小成正比C.缓冲液的黏度成正比D.以上都不对．珠磨机破碎细胞，适用于（D）A.酵母菌B大肠杆菌C.巨大芽孢杆菌D.青霉．为加速过滤收效平时使用（C）A.电解质B高分子聚合物C.惰性助滤剂D.活性助滤剂．不能够用于固液分其他手段为（C）A.离心B过滤C.超滤D.双水相萃取．以下哪个不属于高度纯化：(B)A.层析B.吸附法C.亲和层析D.凝胶层析．物理萃取即溶质依照（B）的原理进行分其他A.吸附B.相似相溶C分子筛D亲和．纳米过滤的滤膜孔径（D）A～10m～mC<2nmD<1nm．人血清清蛋白的等电点为，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（）A：正极搬动；：负极搬动；：不搬动；：不确定。加入1%的单宁于鲜菠萝汁中产生积淀，属于(D)沉析原理。A盐析B有机溶剂沉析C等电点沉析D有机酸沉析．适用于分别糖、苷等的SephadexG的分别原理是（C）、吸附B、分配比C、分子大小D、离子交换E、水溶性大小．以下哪项不属于发酵液的预办理：（D）12/25A.加热B.调pHC.絮凝和凝聚D.层析．以下哪个不属于初步纯化：(C)A.积淀法B.吸附法C.离子交换层析D.萃取法．颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（A）A.越小B.越大C.不变D.无法确定．盐析法积淀蛋白质的原理是（B）A.降低蛋白质溶液的介电常数B.中和电荷，破坏水膜C.与蛋白质结合成不溶性蛋白D.调治蛋白质溶液pH到等电点而以截留分子量作为指标。所谓“分子量截留值”是指阻留率达（B）的最小被截留物质的分子量。A80%以上B90%以上C70%以上D95%以上．在凝胶过滤（分别范围是5000-400000）中，以下哪一种蛋白质最先被洗脱下来（B）．细胞色素（13370）．肌球蛋白（400000）．过氧化氢酶（247500）．血清清蛋白（68500）．肌红蛋白（16900）．“近似物简单吸周边似物”的原则,一般极性吸附剂合适于从何种溶剂中吸附极性物质（B）．极性溶剂B．非极性溶剂C．水D．溶剂．能够除掉发酵液中钙、镁、铁离子的方法是（C）．过滤B．萃取C．离子交换D．蒸馏．从四环素发酵液中去除铁离子,可用（B）．草酸酸化B．加黄血盐C．加硫酸锌D．氨水碱化．当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（C）、增大B、减小C、先增大，后减小D、先减小，后增大．为了进一步检查凝胶柱的质量，平时用一种大分子的有色物质溶液过柱，常有的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（）、观察柱床有无沟流B、观察色带可否平展C、测量流速D、测量层析柱的外水体积．以下细胞破碎的方法中，哪个方法属于非机械破碎法(A)A.化学法B.高压匀浆C.超声波破碎D.高速珠磨．超滤膜截留的颗粒直径为(B)A～10m～mC<2nmD<1nm13/25．超临界流体萃取法适用于提取（B）、极性大的成分B、极性小的成分C、离子型化合物D、能气化的成分E、亲水性成分由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，所以易采用（A）、分别量大分辨率低的方法B、分别量小分辨率低的方法、分别量小分辨率高的方法D、各种方法都试验一下，依照试验结果确定97．蛋白质类物质的分别纯化常常是多步骤的，其先期办理手段多采用以下哪一种的方法。（B）．分辨率高B.负载量大C.操作简略D.价廉．反浸透膜的孔径小于(C)A～μm～μmC<2nmD<1nm．亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱方法称作（C）、阴性洗脱B、激烈洗脱C、竞争洗脱D、非竞争洗脱100-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在必然条件下积淀出来，此方法称为（A）、亲和积淀B、聚合物积淀C、金属离子积淀D、盐析积淀101．在采用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜采用的层析柱是（A）、粗且长的B、粗且短的C、细且长的D、细且短的102.以下三个化合物用硅胶吸附色谱分别，以石油醚-乙酸乙酯（95：5）洗脱，判断三者由先到后流优异谱柱的序次为（OHOOCOCH3abcA:a→→cB:b→→cC:c→b→aD:c→→b103已知某组分峰的峰底宽为20s，保留时间为600s，此色谱柱的理论塔板数为。（）A:14400块B:14000块C:12400块D:1200块14/25三、判断题1.植物细胞产物多分泌到细胞外培养液，动物细胞多为胞内产物。（×）2.经过加入某些反响剂是发酵液进行预办理的方法之一。（√）3.极性溶剂与非极性溶剂互溶。（×）4.溶剂萃取中的乳化现象必然存在。（×）5.临界压力是液化气体所需的压力。（×）6.进料的温度和pH会影响膜的寿命。（√）7.流动相为气体则称为气相色谱。（√）8.生物物质中最常用的干燥方法是减压干燥。（√）9.冷冻干燥适用于高度热敏的生物物质。（√）10.溶剂的极性从小到大为丙醇＞乙醇＞水＞乙酸。（√）11.蛋白质变性，一级、二级、三级结构都被破坏。（×）12.离子交换剂是一种不溶于酸、碱及有机溶剂的固态学分子化合物。（√）13.当某一蛋白质分子的酸性氨基酸残基数目等于其碱性氨基酸残基数目时，此蛋白质的等电点为√）14.高压匀浆法可破碎高度分枝的微生物。（×）15.超声波破碎法的有效能量利用率极低，操作过程产生大量的热，所以操作需在冰水或有外面冷却的容器中进行。（√）16.蛋白质为两性电解质，改变pH可改变其荷电性质，pH﹥pI蛋白质带正电。（×）17.蛋白质为两性电解质，改变pH可改变其荷电性质，pH﹥pI蛋白质带负电。（√）18.离心是基于固体颗粒和周围液体密度存在差别而实现分其他。（√）19.如葡聚糖与聚乙二醇（PEG）按必然比率与水混杂后，溶液先呈浑浊状态，待静置平衡后，逐渐分成互不相溶的两相，上相富含PEG，下相富含葡聚糖。（√）20.超临界流体温度不变条件下，溶解度随密度（或压力）的增加而增加，而在压力不变时，温度增加情况下，溶解度有可能增加或下降。（√）21.盐析是利用不相同物质在高浓度的盐溶液中溶解度的差别，向溶液中加入必然量的中性盐，使原溶解的物质积淀析出的分别技术。（√）22.在低盐浓度时，盐离子能增加生物分子表面电荷，使生物分子水合作用加强，拥有促使溶解的作用。（√）15/2523.向含有生化物质的水溶液中加入必然量亲水性的有机溶剂，能使生化物质积淀析出。（√）24.有机溶剂与水混杂要在低温下进行。（√）25.有机溶剂沉析分辨能力比盐析高。（√）26.若两性物质结合了很多阳离子，则等电点pH）27.等电点积淀在实质操作中应防范溶液pH上升至5）28.纳米过滤膜孔径最小。（×）29.分别纯化极性大的分子（带电离子等）采用反相色谱（或正相柱））30.吸附力较弱的组分，有较低的Rf）31.凝胶柱层析可进行生物大分子分子量的测定。（√）32.在高浓度盐溶液中疏水性相互作用减小。（×）33.色谱分别技术中固定相都是固体。（×）34.色谱分别技术中被检测物质的峰越宽越好。（×）35.制备型对仪器的要求不像解析型HPLC那样苛刻。（√）36.在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS×）37.等电聚焦电泳会形成的一个由阳极到阴极逐渐递减的pH）38.等密度梯度离心中，梯度液的密度要包括全部被分别物质的密度。（√）39.能够用纸色谱的方法来选择、设计液-液萃取分别物质的最正确方案。（√）40.SephadexLH-20的分别原理主若是分子筛和正相分配色谱。（√）41.等密度梯度离心适于分别大小相同密度不相同的物质。（√）42.当气体的温度高出其临界温度，压力高出临界压力此后，物质的齐聚状态就介于气态和液态之间，成为超临界流体。（√）43.盐析反响完好需要一准时间，一般硫酸铵全部加完后，应放置30min以上才可进行固-）44.层析点样时用一根毛细管，吸取样品溶液，在距薄层一端的初步线上点样，样品点直径小于5mm）45.水提醇沉法时依照物质溶解度差别进行分其他方法。（√）46.采用溶剂提取法提取中草药有效成分时，选择溶剂的原则是“相似相溶原则”√）47.凝聚与絮凝作用的原理是相同的，可是积淀的状态不相同。（×）48.冻结-融化法冻结的作用是破坏细胞膜的疏水键结构，增加其亲水性和通透性来破坏细16/25）49.由于pH值可能对蛋白的牢固性有较大的影响，故一般平时采用改变离子强度的梯度洗脱（√）50.盐析作用也能减稀有机溶剂在水中的溶解度，使提取液中的水分含量减少。能够促使生化物质转入有机相从而提高萃取率。（√）51.凝胶层析会使得大分子物质后流出，小分子物质先流出。（×）52.有机溶剂（如胍、乙醇、尿素和异丙醇等）能够削弱疏水分子间的相互作用。能够用于任何规模的细胞破碎。（√）53.细胞破碎技术是生物分别操作中必需的步骤。（×）54.离心操作时，对称放置的离心管要达到体积相同才能进行离心操作。（×）55.分配系数K与溶质的浓度和相体积比没关，它主要取决于相系统的性质、被萃取物质的表面性质和温度。（√）56.氨基酸、蛋白质、多肽、酶、核酸等两性物质可用等电点沉析。（√）57.同时含有酸、碱两种基团的树脂叫两性树脂（√）58.盐析一般可在室温下进行，当办理对温度敏感的蛋白质或酶时，盐析操作要在低温下（如℃-4℃）进行。（√）59.蛋白质类的生物大分子在盐析过程中，最幸好高温下进行，由于温度高会增加其溶解度。（×）五、简答．溶剂萃取过程的机理是什么？答：被萃取组分以一种简单分子的形式在两相间屋里分配。以中型分子存在，不发生化学反响。是中型分子，萃取剂也是中型分子，萃取剂与被萃取物结合成为络合物进入有机相。萃取剂为弱酸性有机酸或酸性鳌合剂。金属离子在水相中以阳离子或能解离为阳离子的络离子的形式存在，金属离子与萃取剂反响生成中性鳌合物。萃取剂与氢离子结合形成阳离子，两者组成离子缔合系统进入有机相；②金属阳离子与中性鳌合剂结合成鳌合阳离子，再与水相中的阴离子组成离子缔合系统而进入有机相。．试述凝胶色谱的原理？答：将混杂原料加在柱上并用流动相洗脱，则无法进入孔隙内部的大分子直接被洗脱下17/25来，小分子由于能够进入孔隙内部而碰到很大的阻滞，最晚被洗脱下来，而中等大小的分子，诚然能够进入孔隙内部但其实不深入，碰到的阻滞作用不强，所以在两者之间被洗脱下来。．在色谱操作过程中为什么要进行平衡？答：离的收效，流速过快，混杂物得不到完好的分别，流速过慢，整体分其他时间要延长，所以在分别前第一要确定留宿。为了保持被分别物质运动的均一性，以及好的吸附和解析收效，所以要保持孔隙内部和外面液体环境的一致，所以进行液体环境的平衡。．在离子交换色谱操作中，怎样选择离子交换树脂？答：交换树脂。2较强的酸性或碱性，选择采用弱酸性或弱碱性树脂。3弱酸或弱碱性树脂不使用H或型。．简述盐析的原理及产生的现象？答：中间性盐加入蛋白质分别系统时可能出现以下两种情况：（）“盐溶”现象—低盐浓度下，蛋白质溶解度增大（）“盐析”现象—高盐浓度下，蛋白质溶解度随之下降，原因以下：（）无机离子与蛋白质表面电荷中和，形成离子对，部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间的排斥力减弱，从而能够相互靠拢；（b）中性盐的亲水性大，使蛋白质脱去水化膜，疏水区裸露，由于疏水区的相互作用以致积淀；6.简述吸附色谱分别技术的原理？简述硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭这四种吸附剂的主要用途和特点？答:利用混杂物中各成分在两相中吸附力(范德华力，包括色散力、引诱力、定向力以及氢键)的差别而实现分别.硅胶可分别各种成分。氧化铝分别碱性或亲脂性成分。活性炭分别水溶性成分。聚酰胺是氢键吸附，合适分别黄酮成分。7.在运用离子交换技术提取蛋白质时，为什么要使用多糖基离子交换剂？答:由于离子交换树脂孔径小,大分子蛋白质难以进入。同时，树脂内部主要为疏水性，对亲水性的蛋白质会产生影响。而多糖基离子交换剂没有上述问题。18/258.区分浸透与反浸透？所以，平时情况下，o其结果是水从纯水一侧透过半透膜向溶液侧浸透，使后者的液位抬高。若是在溶液一侧施加压力1，外界力做功使溶液中水的化学势高升，则纯水经过膜的浸透就会逐渐减小，并最后停止，此时的压力差就是溶液的浸透压。当10时，水将从溶液一侧向纯水一侧搬动，此种浸透称之为反浸透。9.何谓等电点沉析法？答:蛋白质在等电点下的溶解度最低，依照这一性质，再溶液中加入必然比率的有机溶剂，破坏蛋白质表面的水化层和双电层，降低分子间斥力，加强了蛋白质分子间的疏水相互作用，使得蛋白质分子得以齐聚成团积淀下来。10.何谓超临界流体萃取，并简述其分别原理？答：超临界流体萃取是利用超临界流体拥有的近似气体的扩散系数，以及近似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安全、无毒、产品分别简单，但设备投资较大。11.简述凝胶色谱的分别原理？答：凝胶排阻色谱的分别介质（填料）拥有平均的网格结构，其分别原理是拥有不相同分子量的溶质分子，在流经柱床是，由于大分子难以进入凝胶内部，而从凝胶颗粒之间流出，保留时间短；而小分子溶质能够进入凝胶内部，由于凝胶多孔结构的阻滞作用，流经体积变大，保留时间延长。这样，分子量不相同的溶质分子得以分别。12.膜分别过程中，有那些原因会造成膜污染，怎样办理？1）膜污染主要有两种情况：一是附着层被滤饼、有机物凝胶、无机物水垢胶体物质或微生物等吸附于表面；另一种是料液中溶质结晶或积淀造成拥堵。（3分）（）膜污染是能够预防或减少的，措施包括料液预办理、膜性质的改进、操作条件改变等方式。（2分）（）膜污染所引起的通量衰减常常是不能够逆的，只能经过冲洗的办理方式除掉，包括物理方法冲洗和化学药品溶液冲洗等。（2分）13.超临界萃取的原理及SC-CO2萃取的优点？答:原理：溶质在超临界流体中的溶解度，与其密度相关，密度越大，溶解度越大。在临界点周边，微小的压力增加或温度下降，则溶剂的密度大幅度增加，对溶质的溶解度19/25将大幅度增加，有利于溶质的萃取。而在临界点周边，微小的压力下降或温度上升，则溶剂的密度大幅度减少，对溶质的溶解度将大幅减少，有利于溶质的分别和溶剂的回收。优点：无毒无腐化性，不能够燃烧，价格廉价，传质好萃取快，临界温度和临界压力较低合适于热敏生物制品，可获萃取物或萃余物14.何谓免疫亲和层析，简述亲和免疫层析介质的制备过程?答、免疫亲和层析是利用亲和技术和色谱分别集成产生的一种高效色谱分别技术，其分离原理是经过抗原-抗体之间特异性的相互作用，从而实现高效的分别。层析介质的制备过程包括：抗体的制备、抗体提取、载体活化，手臂链的连接、抗体的连接等步骤。15.何谓亲和吸附，有何特点？答：亲和吸附是吸附单元操作的一种，它是利用亲和吸附剂与目标物之间的特其他化学作用实现的高效分别手段。亲和吸附剂的组成包括：惰性载体、手臂链、特异性亲和配基。亲和吸附的特点是高效、简略、适用范围广、分别速度快、条件平易，但载系统备难度大，通用性差，成本较高。16.简述生物分别过程的特点?答:1、产品丰富：产品的多样性以致分别方法的多样性2、绝大多数生物分别方法本源于化学分别3、生物分别一般比化工分别难度大（）成分复杂（）悬液中的目标产物浓度低（）生物活性，条件相对平易（）生物产品要求高质量（）获得高纯度的干燥产品（）卫生17.试比较凝聚和絮凝两过程的异同？答：凝聚与絮凝办理过程就是将化学药剂起初投加到悬浮液中，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分别状态，破坏其牢固性，使其齐聚起来,增大体积以便固液分离。凝聚和絮凝技术常用于菌体微小而且黏度大的发酵液的预办理中。凝聚和絮凝是两种方法，两个看法。凝聚：指在投加的化学物质（铝、铁的盐类）作用下，胶体脱稳并使粒子相互齐聚成１mm大小块状凝聚体的过程。絮凝：指派20/25用絮凝剂（天然的和合成的大分子量聚电解质）将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。其中絮凝剂主要起架桥作用。18.简述有机溶剂沉析的原理？答：在含有溶质的水溶液中加入必然量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其积淀析出。1）降低了溶质的介电常数，使溶质之间的静电引力增加，从而出现齐聚现象，以致积淀。（2）由于有机溶剂的水合作用，降低了自由水的浓度，降低了亲水溶质表面水化层的厚度，降低了亲水性，以致脱水凝聚。19.膜分别技术的种类和定义？答：膜分别过程的实质是物质透过或被截留于膜的过程，近似于筛分过程，依照滤膜孔径大小而达到物质分其他目的，故而能够按分别粒子大小进行分类：（）微滤：以多孔微小薄膜为过滤介质，压力为推动力，使不溶性物质得以分其他操作，孔径分布范围在μm之间；（）超滤：分别介质同上，但孔径更小，为合适于分别酶、蛋白质等生物大分子物质；（）反浸透：是一种以压力差为推动力，从溶液中分别出溶剂的膜分别操作，孔径范围在故而成为反浸透）；（）纳滤：以压力差为推动力，从溶液中分别300~1000小分子量的膜分别过程，孔径分布在平均2nm；（）电渗析：以电位差为推动力，利用离子交换膜的选择透过性，从溶液中脱除或富集电解质的膜分别操作；20.影响液一固分其他要素？）微生物种类的影响一般真菌的菌丝比较粗大，液一固分别简单，含真菌菌体及絮凝蛋白质的发酵液，可采用鼓式真空过滤或板框过滤。关于酵母菌体，离心分其他方法拥有较好的收效。但是细菌或细胞碎片相当微小，液一固分别十分困难，用一般的离心分别或过滤方法收效很差，所以应先用预办理的各种手段来增大粒子，才能获得澄清的滤液。）发酵液的黏度液一固分其他速度平时与黏度成反比。影响发酵液黏度的要素很多：（）菌体种类和浓度不相同，其黏度有很大差别。21/25（）不相同的培养基组分和用量也会影响黏度，如用黄豆饼粉、花生饼粉作氮源，用淀粉作碳源会使黏度增大。发酵液中未用完的培养基很多或发酵后期用油作消沫剂也会使过滤困难。21.影响有机溶剂萃取分其他要素？影响液一液萃取的要素主要有目的物在两相的分配比（分配系数）和有机溶剂的用量等。分配系数K值增大，提取效率也增大，萃取就易于进行完好。当K值较小时，能够合适增加有机溶剂用量来提高萃取率，但有机溶剂用量增加会增加后办理的工作量，因此在实质工作中，常常采用分次加入溶剂，连续多次提取来提高萃取率。22.交换容量及其影响要素？交换容量是指离子交换剂能供应交换离子的量，它反响离子交换剂与溶液中离子进行交换的能力。平时所说的离子交换剂的交换容量是指离子交换剂所能供应交换离子的总量，又称为总交换容量，它只和离子交换剂自己的性质相关。影响交换容量的要素很多，主要能够分为两个方面，一方面是离子交换剂颗粒大小、颗粒内孔隙大小以及所分其他样品组分的大小等影响。另一些影响要素如实验中的离子强度、pH值等主要影响样品中组分和离子交换剂的带电性质。23.疏水柱层析分别原理？亲水性蛋白质（酶）表面均含有必然量的疏水性基团。尽管在水溶液中蛋白质（酶）具有将疏水性基团折叠在分子内部而表面展现极性和荷电基团的趋势，但总会有一些疏水性基团或极性基团的疏水部位裸露在蛋白质（酶）表面。这部分疏水基团可与亲水性固定相表面偶联的短链烷基、苯基等弱疏水基会发生疏水性相互作用，被固定相（疏水性吸附剂）所吸附。24.生物分其他基本源理？主若是依照离心力、分子大小（筛分）、浓度差、压力差、电荷效应、吸附作用、静电作用、亲和作用、疏水作用、溶解度、平衡分别等原理对原料或产物进行分别、纯化。不相同的分别对象需要采用不相同的分别方法才能有效地被分别。25.离心分别技术基本源理？是基于固体颗粒和周围液体密度存在差别，在离心场中使不相同密度的固体颗粒加速沉降的分别过程。不相同密度或不相同大小及形状的物质在重力作用下的沉降速率不相同，在形成密度梯度的液相系统中的平衡地址不相同。离心分别过程就是以离心力加速不相同物质沉降分其他过程。被分别物质之间必定存在或经人为办理产生的密度或沉降速率差别才能以22/25离心方法进行分别。离心分别方法中差速离心法操作最简略，使用最广泛，但其分别纯化分辨率低于密度梯度离心。26.简述生物活性物质分