基因工程试卷

82006〜2007学年第二学期(A卷)一、名词解释(每题4分，5小题，共20分)1．Blotting：Blottingistheprocessofidentityingspecificbandsofintrerestamongstallthebandsboundtothenitrocellulose.Donewithspecificprobesorantibodies.2．Probe：ProbeisaspecificDNAorRNAfragmentwhichcanbindwiththesampleDNAorRNAfordection.Cosmid：PlasmidshavebeenconstructedwhichcontainafragmentofDNAincludingthecossite.Theseplasmidshavebeentermedcosmidsandcanbeusedasgene-cloningvectorsinconjunctionwiththeinvitropackingsystem.SDSequence：ThespecialDNAsequencewhichbindsto3'endof16SrRNAandinitiatessynthesisofprotein.Inclusionbody:“Inclusionbodies"typicallyreferstoaggregatesofproteininbacterialcytoplasm.Inclusionbodiesareclassicallythoughttobecomprisedofmisfoldedprotein二、填空题(每题2分，5小题，共10分)：1.RACE:cDNA末端快速扩增2.ori:复制原点(复制起始位点)3.MCS:多克隆位点4.PCR:聚合酶链式反应5.cccDNA:共价闭合环状DNA三、单选题(每题1分，25小题，共25分)Prokaryotesandeukaryotesuseseveralmethodstoregulategeneexpression,butthemostcommonmethodis()A.translationalcontrolB.transcriptionalcontrolC.posttranscriptionalcontrolD.controlofmRNApassagefromthenucleusWhateffectwouldtheadditionoflactosehaveonarepressedlacoperon?()A.TheoperatorsiteontheoperonwouldmoveB.ItwouldreinforcetherepressionofthatgeneC.ThelacoperonwouldbetranscribedD.Itwouldhavenoeffectwhatsoever3.CuttingcertaingenesoutofmoleculesofDNArequirestheuseofspecial(A.degradingnucleasesB.restrictionendonucleasesC.eukaryoticenzymesD.viralenzymes4.ADNAlibraryis(A.B.C.D.ageneralcollectionofallgenessequencedthusfar.acollectionofDNAfragmentsthatmakeuptheentiregenomeofaparticularorganism.aDNAfragmentinsertedintoavector.allDNAfragmentsidentifiedwithaprobe.5.Aprobeisusedinwhichstageofgeneticengineering?(AcleavingDNAB.recombiningDNAC.cloning)D.screening6.Theenzymeusedinthepolymerasechainreactionis(A.restrictionendonucleaseC.DNApolymeraseD.B.reversetranscriptaseRNApolymerase.下列对A.具有C.具有.大肠杆菌合成，这种DNA聚合酶的描述哪一种是错误的5'-3'外切活性3'-5'外切活性mRNA上起始密码子上游的(B.具有D.具有SD序列可与某种)-3-5聚合活性聚合活性RNA的端配对,然后启动多肽链RNA是(A.tRNA9.反转录酶是一种()B.)SnRNAC.16sRNAD.23srRNAA.依赖DNA的DNA聚合酶C.依赖RNA的DNAODD10.根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是A.基因诱变B.分子克隆11.下列五个DNA片段中含有回文结构的是A.GAAACTGCTTTGACC.GAAACTGGTCAAAG

B.依赖DNA的RNAODDD.依赖RNA的DNAODD()DNA重组D.基因无性繁殖()B.GAAACTGGAAACTGGAAACTGCAGTTTC12.T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段是()A.2'-OH和5'-PB.2'-OH和3'-P-P

DNA片段连接在一起，其底物的关键基团C.3'-OH和2'-PD.3'-OH和513.13.若某质粒带有A.半乳糖lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加B.葡萄糖C.蔗糖D.X-gal和IPTG核酸分子杂交的化学原理是形成A.共价键B.离子键有利于基因的蛋白质产物分泌的元件是核糖体B.信号肽

()C.氢键D.配位键()C.终止子D.多聚腺苷酸16.基因工程菌中重组质粒的丢失机制是A.重组质粒被细胞内核酸酶降解C.重组质粒在细胞分裂时不均匀分配)B.D.重组质粒渗透至细胞外

重组质粒杀死受体细胞17.下列哪种克隆载体对外源18.A.C.19.A.C.A.质粒

同一种质粒B.柯斯质粒(DNA的容载量最大(Cosmid)C.酵母人工染色体DNA,以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁动速率是：(OCDNA>SCDNA>LDNALDNA>OCDNA>SCDNA用下列方法进行重组体的筛选，只有(SouthernblottingWesternblottingD.九噬菌体B.SCDNA>LDNA>OCDNA

D.SCDNA>OCDNA>LDNA

)能证明外源基因进行了表达。B.D.Northernblottinginsituhybridization.强化.强化mRNA翻译的元件是(A口启动子.基因工程操作的三大基本元件是：(()A.I+II+III)B口复制起始区C口SD序列I供体II受体I+III+IV

D口回文序列III载体IV抗体V配体)II+III+IV

II+IV+V22.限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是A.修复自身的遗传缺陷()B.促进自身的基因重组C.强化自身的核酸代谢23下列哪一项不是产生星号活性的主要原因？(D.提高自身的防御能力

)A.甘油含量过高B.反应体系中含有有机溶剂C.含有非Mg2+的二口阳离子D.酶切反应时酶浓度过低24．下列对cosmid描述中不正确的是口A口它具有cos位点，因而可进行体外包装

B口它具有质粒DNA的复制特性C口进入受体细胞后，可引起裂解反应

D口进入受体细胞后，可引起溶源化反25．用免疫化学法筛选重组体的原理是（）A口根据外源基因的表达B口根据载体基因的表达C口根据mRNA同DNA的杂交D口根据DNA同DNA的杂交三、单选题（每题1分，25小题，共25分）1．B2．C3．B4．B5．D6．C7．D8．C9．C10.A11.D12.D13.D14.C15.B16.B17.A18.B19.C20.C21.A22.D23.D24.C25.B四、问答题（30分）1．简要途述蓝白斑筛选的原理及其有基因克隆中的应用。（7分）口：许多载体（如PUC系列）带有一段大肠杆菌的DNA片段，为B-半乳糖苷酶（LacZ）的调控序列和NO146个氨基酸的编码序列（编码LacZ的a肽）。某些特定的宿主菌可表达LacZ的CO（□3肽）。单独存在的a肽和3肽都没有活性，但当它们同时在宿主细胞表达时，可互补产生LacZ的活性，将底物X-gal水解，形成蓝色化合物，这种现象称为a互补。由a-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无a-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这TOC\o"1-5"\h\z种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。2．概括典型原核生物启动子的基本结构和功能，并解释什么是保守序列。（7分）答：启动子是与RNA聚合酶结合和转录起始的特殊序列。典型的原核启动子大约长40个核苷酸并有两个重要的序列：（1）-35区：位于复制起点（+1）上游35个核苷酸处的6核苷口序列，能被RNA聚合酶全酶识别并结合。（2）Pribnow框或-10区：另一个位于-10处的6核苷酸序列。Pribnow框具有的保守序列：5'-TATAAT-3'。保守序列指所有启动子的该部位都有这一序列或十分相似的序列；仅在极少数启动口中，Pribnow框有1个或2个核苷酸不同。与此相似，-35区有TTGACA的保守序列。3．影响原核生物基因表达效率的因素有哪些？（9分）答：影响外源基因原核表达效率的主要因素如下：1、启动子的结构对表达效率的影响：启动子区域有两段保守序列，即-35区的5'-TTGACA-3'和-10区的5'-TATAAT-3'序列，启动子序列与上述保守序列相似程度越高，表达能力越强，且，-35区和-10区间距离为17bp,启动子活性最强。2、启动子与克隆基因间距离：翻译起始点和S-D序列必须接近到一定程度，S-D序列与起始密码子距离为5-9bp较合适。3、转录终止子：转录终止区的存在保证载体不会转录非必须基因，不必浪费资源和能量、不会干扰正常表达。4、载体拷贝数及稳定性：增加拷贝数可以提高表达效率。5、外源蛋白在菌体中的稳定性：菌体蛋白酶会降解表达产物，以下途径可解决这一问题：（1）融合表达；（2）分泌表达；（3）使用蛋白酶缺陷型表达菌株。6、外源基因结构及密码子偏爱性。4．原核表达载体必须具备哪些基本结构？（7分）答：原核表达载体必须具备如下结构：起始序列；多克隆位点；选择标记；可调控的启动子；转录终止子；翻译起始序列；核糖体结合位点。五、应用分析题（15分）甲型流感病毒是一种RNA病毒，血凝素是该病毒的重要保护性抗原之一，试设计原核表流感病毒血凝素基因的基本程序。佛山科学技术学院2006〜2007学年第二学期B一名词解释(每题4分，5小题，共20分)Palindromes：Asegmentofdouble-strandedDNAinwhichthenucleotidesequenceofonestrandreadsinreverseordertothatofthecomplementarystrand.Imcompatibilityofplasmids：Plasmidincompatibilityistheinabilityoftwodifferentplasmidstocoexistinthesamecellintheabsenceofselectionpressure.Consensussequence：Ifthetranscriptionstarpointisassignedtheposition+1thenthisconsensussequenceconsistsofthe-35region(TTGACA)andthe-10region,orPribnowbox(TATAAT).RNApolymerasemustbindtobothsequencestoinitiatetranscription.cDNALibrary：AcDNAlibraryisthesetofallthemRNAscontainedwithinacell.ReferredtoascDNAthesereversetranscribedmRNAsarecollectivelyknownasthelibrary.Promotor:PromotorisaregionofDNAwhichbindstoRNApolymeraseandinitiatessynthesisofprotein.二、填空题(每题2分，5小题，共10分)：1口ORF:开放阅读框2.YAC:酵母人工染色体SDS:SDDWmmWWRT-PCR:反转录-聚合酶链式反应ocDNA:开口DNA三、单选题(每题1分，20小题，共20分)A(n)isapieceofDNAwithagroupofgenesthataretranscribedtogetherasaunit.A．promoterB．repressorC．operatorD．operonWhateffectwouldtheadditionoflactosehaveonarepressedlacoperon?()A．TheoperatorsiteontheoperonwouldmoveB．ThelacoperonwouldbetranscribedC．ItwouldreinforcetherepressionofthatgeneD．ItwouldhavenoeffectwhatsoeverTOC\o"1-5"\h\zAtypeofDNAsequencethatislocatedfarfromagenebutcanpromoteitsexpressionisa(n)()A．promoterB．activatorC．enhancerD．TATAboxWhichofthefollowingcannotbeusedasavector?()A．phageB．plasmidC．bacteriumD．AllcanbeusedasvectorsProkaryotesandeukaryotesuseseveralmethodstoregulategeneexpression,butthemostcommonmethodis()A．translationalcontrolB．transcriptionalcontrolC．posttranscriptionalcontrolD．controlofmRNApassagefromthenucleus.Whichofthefollowingisnotanapplicationofgeneticengineeringinplants?()A．nitrogenfixationB．DNAvaccinesC．resistancetoglyphosateD．productionofinsecticidalproteinsinplants7．第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白(多肽)药物是()A□生长激素(Growthhormone)B□胰岛素(Insulin)C□生长激素释放抑制素(Somatostatin)D口干扰素(Interferon)8口用碱变性分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：()A．染色体DNA断成了碎片B．染色体DNA分子量大，而不能释放C口染色体变性后来不及复性D口染色体未同蛋白质分开而沉淀9口下列哪一个不是Southernblotting的步骤？()A．DNA片段转移至硝酸纤维素膜上B．DNA与载体连接C口用凝胶电口分离DNA片段D□用一个标记的探针与膜杂交10口在利用lacZ失活的显色反应筛选中，IPTG的作用是()A口诱导宿主的a肽合成B口诱导宿主的3肽合成C口作为酶的作用底物D口作为显色反应的指示剂11．基因工程操作的三大基本元件是：(I供体II受体III载体IV抗体V配体)()A．I+II+IIIB．I+III+IVC．II+III+IVD．II+IV+V12．限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是()A口修复自身的遗传缺陷B口促进自身的基因重组C口强化自身的核酸代谢D口提高自身的防御能力

13．下列哪一种不是产生星号活性的主要原因？（A．甘油含量过高CD含有非Mg2+的二口阳离子14．第一个作为重组DNA载体的质粒是（ADpBR322BDColE115D下列对cosmid描述中不正确的是（AD它具有cos位点，因而可进行体外包装BD它具有质粒DNA的复制特性CD进入受体细胞后，可引起裂解反应DD进入受体细胞后，可引起溶源化反应16口下列筛选重组体的方法中，不属于遗传学的方法是（AD插入失活法CD噬菌斑选择法17□启动子的特征之一是口口。ADTATABoxBDGC富积区）BD反应体系中含有有机溶剂DD酶切反应时酶浓度过低）CD）BD反应体系中含有有机溶剂DD酶切反应时酶浓度过低）CDpSC101DDPUC18））。BD显色反应选择法DD限制性酶切分析法18□下列mRNA5'端序列中，具有典型的原核生物AD5'UAUAAG3'CD5'AUAUCU3'Shne-Dalgarno序列特征的是()。BD5'AGGAGG3'DD5'CCUCCA3'19口高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，原因是（）。AD表达产物浓度过高BD表达产物不含糖基侧链CD表达产物不能正确折叠DD表达产物难以形成二硫口20口有利于基因的蛋白质产物分泌的元件是AD核糖体(）。BD信号肽CD终止子21口一般而言，分子量小的蛋白质更不稳定，其原因是（AD分子量越小，形成良好空间构象的可能性越低BD分子量越小，表达效率越高CD分子量越小，越容易被加工修饰DD分子量越小，分泌效果越佳22D某一重组DNA（6.2kb）的载体部分有两个DD多聚腺苷酸）。SmaI酶切位点。用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有（）。AD4个BD3个23D在基因工程中，外源基因表达产物的重折叠通常是指（AD氢键的形成BD离子键的形成CD口水口的形成DD二硫口的形成24D下列能区分期望重组子的筛选方法是（AD抗药性筛选法BD菌落原位杂交法CD显色筛选法DD营养缺陷筛选法25D包涵体是一种（）。AD受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒CD噬菌体或病毒DNA的体外包装颗粒三、单选题（每题1分，25小题，共25分）1DD2DB3DC4DC5DB6DBCD2个DD至少2个）。）。BD大肠杆菌的亚细胞结构DD用于转化动物细胞的脂质体7DB8DC9DB10.A

11.A12.D13.D14.C15.D16.D17.A21.A22.D23.D24.B25.A18.B19.C20.B四、问答题（3011.A12.D13.D14.C15.D16.D17.A21.A22.D23.D24.B25.A18.B19.C20.B四、问答题（30分）提高目的基因在原核生物中表达效率的策略有哪些？（答：1□选择强启动子，如tac或T7启动子；3．改变起始密码下面的几组密码子