实验三 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察课件

实验三鞭毛染色法及活细菌

运动性的观察

一、实验目的：1.学习细菌的鞭毛染色法,观察细菌鞭毛的形态特征;2.学习用悬滴法观察细菌的运动性.二、实验原理：细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。三、实验器材1.菌种：培养12-16h小时的普通变形杆菌。2.标本片：周鞭毛（伤寒杆菌）3.试剂：硝酸银鞭毛染色液、生理盐水、蒸馏水、香柏油、二甲苯。4.器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸水纸、接种环，显微镜等。四、实验方法（一）鞭毛染色

硝酸银染色法：1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，最好选用新的。然后将玻片置洗衣粉过滤液中（洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将水沥干后，放入95%乙醇中脱水。新的载片虽没有油污、划痕，但含游离碱较多，所以要用2％盐酸浸泡几小时，用自来水冲洗干净，然后再用蒸馏水洗净，沥干后再用效果较好。

2.菌液的制备：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上连续移接3-5代，以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒温箱中培养12—16h。①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可，不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛易脱落，造成染色失败。③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落，影响观察。④A、B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验效果。⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。注意事项（二）细菌的运动性观察悬滴法：1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4滴生理盐水，制成轻度混浊的菌悬液。2.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，也可用接种环挑取一环菌液于玻片中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。4.镜检：

先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈增大反差，便于观察。镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。注意事项1、检查细菌运动的载玻片和盖玻片都要洁净无油，否则将影响细菌的运动。2、制水封片时菌液不可加得太多，过多的菌液会在盖玻片下流动，因而在视野内只见大量的细菌朝一个方向运动，从而影响了对细菌正常运动的观察。3、若使用油镜观察，应在盖玻片上加香柏油一滴。五、实验作业：1.绘出鞭毛菌（自制片子或伤寒杆菌）的形态图.2.用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要注意哪些环节？3.悬滴法中，为什么加的菌液不能大多？如果发现显微镜视野内大量细菌向一个方向流动，你认为是什么原因造成的？