维生素与辅助因子教案课件

维生素与辅助因子维生素与辅助因子1本章主要内容

酶的一般概念酶的组成与维生素酶的结构与功能的关系酶的催化机理酶反应的动力学酶活性的调节

第1页/共65页本章主要内容酶的一般概念第1页/共65页21.酶的概述

酶是生物催化剂。绝大部分酶是蛋白质，还有一些核糖核酸RNA具有催化作用，称为核酶（ribozyme）。1.1定义

细胞的代谢由成千上万的化学反应组成，几乎所有的反应都是由酶（enzyme）催化的。酶对于动物机体的生理活动有重要意义，不可或缺。酶在生产实践中有广泛应用。第2页/共65页1.酶的概述酶是生物催化剂。绝大部分酶是蛋白质31.2酶的命名（1）习惯命名——依据所催化的底物（substrate）、反应的性质、酶的来源等命名。例如，胃蛋白（水解）酶、碱性磷酸酶。（2）系统命名——根据底物与反应性质命名反应：葡萄糖+ATP葡萄糖-6-磷酸+ADP

命名：葡萄糖：ATP磷酰基转移酶（习惯名称，葡萄糖激酶）第3页/共65页1.2酶的命名（1）习惯命名——依据所催化的底物（subs41.3酶的分类

氧化还原酶AH2+BA+BH2

转移酶Ax+CA+Cx

水解酶AB+H2OAH+BOH

裂解酶AB+C

异构酶AB

合成酶A+BC，需要ATP第4页/共65页1.3酶的分类氧化还原酶AH2+B51961年酶学委员会（EnzymeCommission，EC）规定酶的表示法：

EC.X.X.X.X例如：乳酸脱氢酶

第5页/共65页1961年酶学委员会（EnzymeCommission，E61.4酶活性(enzymeactivity)酶活性的表示方法：

酶活性指的是酶的催化能力，用反应速度来衡量，即单位时间里产物的增加或底物的减少。

V=dP/dt=-dS/dt

测定方法：吸光度测定、气体分析、电化学分析等。第6页/共65页1.4酶活性(enzymeactivity)酶活性的表示7酶活性的计量：

EC1961年规定：在指定的条件下，1分钟内，将1微摩尔的底物转变为产物所需要的酶量为1个酶活国际单位（IU）。

比活性（specificityofenzyme）指的是每毫克酶蛋白所具有的酶活性单位数。比活性=活性单位数/酶蛋白重量（mg）比活性反映了酶的纯度与质量。第7页/共65页酶活性的计量：第7页/共65页8酶促反应的速度曲线

随着酶催化的反应进行，反应速度会变慢，这是由于产物的反馈作用、酶的热变性或副反应引起的。但是，在反应起始不久，在酶促反应的速度曲线上通常可以看见一段斜率不变的部分，这就是初速度。在酶的动力学研究中，一般使用初速度的（V0）概念。第8页/共65页酶促反应的速度曲线随着酶催化的反应进行，反应速度会变慢9高效性

酶的催化作用可使反应速度比非催化反应提高108-1020倍。比其他催化反应高106-1013倍

例如：过氧化氢分解

2H2O22H2O+O2Fe3+

催化，效率为6×104

mol/mol.S过氧化氢酶催化，效率为6×106

mol/mol.S专一性

即对底物的选择性或特异性。一种酶只催化一种或一类底物转变成相应的产物。1.5酶的特点第9页/共65页高效性1.5酶的特点第9页/共65页10

绝对专一性一种酶只催化一种底物转变为相应的产物。例如，脲酶只催化尿素水解成CO2

和NH3。

相对专一性一种酶作用于一类化合物或一类化学键。例如，不同的蛋白水解酶对于所水解的肽键两侧的基团有不同的要求。

立体专一性指酶对其所催化底物的立体构型有特定的要求。例如，乳酸脱氢酶专一地催化L-乳酸转变为丙酮酸，延胡索酸只作用于反式的延胡索酸（反丁烯二酸）。立体专一性保证了反应的定向进行。

第10页/共65页绝对专一性第10页/共65页11R1:Lys,ArgR2:不是ProR3:Tyr,Trp,PheR4:不是Pro第11页/共65页R1:Lys,ArgR3:Tyr,Trp,Phe第12

酶容易变性这是酶的化学本质（蛋白质）所决定的。酶的可调节性抑制和激活（activationandinhibition）反馈控制(feedback)

酶原激活(activationofproenzyme)

变构酶(allostericenzyme)

化学修饰(chemicalmodification)

多酶复合体(multienzymecomplex)

酶在细胞中的区室化(enzymecompartmentalization)

第12页/共65页酶容易变性第12页/共65页13已知的上千种酶绝大部分是蛋白质单纯酶：少数，例如：溶菌酶

结合酶：大多数

结合酶=酶蛋白+辅因子辅因子包括:辅酶、辅基和金属离子。2.酶的组成与维生素2.1酶的化学本质第13页/共65页2.酶的组成与维生素2.1酶的化学本质第13页/共6514

酶蛋白的作用：与特定的底物结合，决定反应的专一性。

辅酶、辅基的作用：参与电子的传递、基团的转移等，决定了酶所催化反应的性质。有十几种.

辅酶与辅基的异同点:它们都是耐热的有机小分子，结构上常与维生素和核苷酸有关。但是辅酶与酶蛋白结合不紧，容易经透析除去，而辅基通常与酶蛋白共价相连。

金属离子的作用：它们是酶和底物联系的“桥梁”；稳定酶蛋白的构象；酶的“活性中心”的部分。

第14页/共65页酶蛋白的作用：与特定的底物结合，决定反应的专一性。15

结合酶举例，()内为辅因子：

乳酸脱氢酶（辅酶I,NAD）异柠檬酸脱氢酶（辅酶I,NAD）醇脱氢酶（辅酶I,NAD）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（辅酶II,NADP）琥珀酸脱氢酶（FAD）乙酰辅酶A羧化酶（生物素，ATP，Mg++）脂酰辅酶A合成酶（辅酶A,CoA）第15页/共65页结合酶举例，()内为辅因子：第15页/共65页16维生素（Vitamin）是动物和人类生理活动所必需的，从食物中获得的一类有机小分子。它们并不是机体的能量来源，也不是结构成分，大多数以辅酶、辅基的形式参与调节代谢活动。脂溶性维生素：A视黄醇（维生素A原——胡萝卜素）

D钙化醇

E生育酚

K凝血维生素水溶性维生素：B族维生素和维生素C

（以下主要介绍B族维生素与辅酶、辅基的关系）2.2维生素与辅酶和辅基的关系第16页/共65页维生素（Vitamin）是动物和人类生理活动所必需的，从食物17表7‑2B族维生素及其辅酶形式B族维生素辅酶形式酶促反应中的主要作用硫胺素(B1)硫胺素焦磷酸酯(TPP)α-酮酸氧化脱羧酮基转移作用核黄素(B2)黄素单核苷酸(FMN)黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)氢原子转移氢原子转移尼克酰胺(PP)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)氢原子转移氢原子转移吡哆醇(醛、胺)(B6)磷酸吡哆醛氨基转移泛酸辅酶A(CoA)酰基转移叶酸四氢叶酸"一碳基团"转移生物素(H)生物素羧化作用钴胺素(B12)甲基钴胺素5′-脱氧腺苷钴胺素甲基转移第17页/共65页表7‑2B族维生素及其辅酶形式B族维生素辅酶形式酶促反应18VB1，硫胺素经焦磷酸化转变为TPP，焦磷酸硫胺素。它是酮酸脱氢酶的辅酶。以VB2，核黄素为基础形成两种辅基FMN黄素单核苷酸和FAD黄素腺嘌呤二核苷酸。作用是传递氢和电子。第18页/共65页VB1，硫胺素经以VB2，核黄素为基础形成两种辅基第18页/19泛酸（维生素B3）是CoA（辅酶A）的组成成分。CoA是脂酰基的载体。

吡哆醛和吡哆胺（吡哆素），维生素B6。磷酸吡哆醛是氨基酸转氨酶、脱羧酶等的辅酶。

第19页/共65页泛酸（维生素B3）是CoA吡哆醛和吡哆胺（吡哆素），第1920

尼克酸，烟酸（维生素Vpp）NAD+/NADH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（氧化/还原）NADP+/NADPH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（氧化/还原）。烟酰胺衍生物，传递氢和电子，氧化还原酶的辅酶。

第20页/共65页尼克酸，烟酸（维生素Vpp）21叶酸，其还原衍生物四氢叶酸是一碳基团转移酶的辅酶。一碳基团，如甲基、乙烯基、甲酰基等。生物素，维生素H。噻吩和脲缩组成，CO2

的载体，羧化酶的辅酶，且有戊酸侧链。

第21页/共65页叶酸，其还原衍生物四氢叶酸生物素，维生素H。第21页/共6522硫辛酸，含硫脂肪酸，有氧化和还原两种形式，既可以传递氢和电子，又能转移脂酰基。

维生素B12中心钴原子结合5’-脱氧腺苷基称辅酶B12

，为一些变位酶和转甲基酶的辅酶。第22页/共65页硫辛酸，含硫脂肪酸，有氧化

第22页/共65页23单体酶

只有三级结构，一条多肽链的酶。如129个氨基酸的溶菌酶，分子量14600。寡聚酶

含2-60个亚基，有复杂的高级结构。常通过变构效应在代谢途径中发挥重要的调节作用。多酶复合体

由多个功能上相关的酶彼此嵌合而形成的复合体。它可以促进某个阶段的代谢反应高效、定向和有序地进行。3.酶的分子结构第23页/共65页单体酶3.酶的分子结构第23页/共65页24酶的活性中心（activesite）

活性中心的必需基团

必需基团

活性中心以外的必需基团

结合基团（与底物结合，决定专一性）

活性中心

催化基团（影响化学键稳定性,决定催化能力）第24页/共65页酶的活性中心（activesite）第24页/共65页25酶的活性中心示意图活性中心是酶分子上由催化基团和结合基团构成的一个微区第25页/共65页酶的活性中心示意图活性中心是酶分子上由催化基团和结合基团构成26

化学反应是由具有一定能量的活化分子相互碰撞发生的。分子从初态转变为激活态所需的能量称为活化能。无论何种催化剂，其作用都在于降低化学反应的活化能，加快化学反应的速度。一个可以自发进行的反应，其反应终态和始态的自由能的变化（∆G’）为负值。这个自由能的变化值与反应中是否存在催化剂无关。4.酶的催化机理4.1活化能第26页/共65页4.酶的催化机理4.1活化能第26页/共65页27

催化剂降低了反应物分子活化时所需的能量非催化反应和酶催化反应活化能的比较

Ea，活化能；ΔG，自由能变化第27页/共65页催化剂降低了反应物非催化反应和酶催化反应活化能的比较

E28

S+EESP+E中间产物

反应过程

S+EESES*EPP+E过渡态复合物4.2中间产物学说第28页/共65页S+EES29

酶介入了反应过程。通过形成不稳定的过渡态中间复合物，使原本一步进行的反应分为两步进行，而两步反应都只需较少的能量活化。从而使整个反应的活化能降低。第29页/共65页酶介入了反应过程。通过形成不稳定的过渡态中间第29页30诱导契合学说认为，酶和底物都有自己特有的构象，在两者相互作用时，一些基团通过相互取向，定位以形成中间复合物。4.3诱导契合学说（inducedfit）第30页/共65页4.3诱导契合学说（inducedfit）第30页/共631邻近与定向效应：增加了酶与底物的接触机会和有效碰撞。张力效应：诱导底物变形，扭曲，促进了化学键的断裂。酸碱催化：活性中心的一些基团，如His，Asp作为质子的受体或供体，参与传递质子。共价催化：酶与底物形成过渡性的共价中间体，限制底物的活动，使反应易于进行。疏水效应：活性中心的疏水区域对水分子的排除、排斥，有利于酶与底物的接触。4.4催化机理第31页/共65页邻近与定向效应：增加了酶与底物的接触机会和有效碰撞。4.432

影响酶促反应速度的因素与酶作为生物催化剂的特点密切有关。这些因素有：温度、酸碱性、底物（substrate）浓度、酶浓度、激活剂（activators）和抑制剂（inhibitors）等。

5.酶促反应的动力学及其影响因素第32页/共65页5.酶促反应的动力学及其影响因素第32页/共65页33

一般来说，随着温度升高，化学反应的速度加快。在较低温度条件下，酶促反应也遵循这个规律。但是，温度超过一定数值时，酶会因热变性，导致催化活性下降。

最适温度（optimumT）：使酶促反应速度达到最大时的温度。最适温度因不同的酶而异，动物体内的酶的最适温度在37-400C左右。5.1温度对酶促反应速度的影响第33页/共65页一般来说，随着温度升高，化学反应的速度加快34酶反应的温度曲线和最适温度第34页/共65页酶反应的温度曲线和最适温度第34页/共65页355.2溶液pH值对酶促反应速度的影响最适pH（optimumpH）：使酶促反应速度达到最大时溶液的pH。酶的最适pH与酶的性质、底物和缓冲体系有关第35页/共65页5.2溶液pH值对酶促反应速度的影响最适pH（optimu36

在其他条件确定时，反应速度与酶的浓度成正比。5.3酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对反应速度的影响第36页/共65页在其他条件确定时，5.3酶浓度对酶促反应速度的影响酶375.4底物浓度对酶促反应速度的影响

在其他条件确定的情况下,在低底物浓度时,反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应.当底物浓度较高时，v也随着[S]的增加而升高，但变得缓慢，表现为混合级反应。当底物浓度达到足够大时，反应速度也达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。反应速度对于底物浓度的变化呈双曲线,称为米氏双曲线.其数学表达式为米氏方程.第37页/共65页5.4底物浓度对酶促反应速度的影响在其他条件确定的38米氏双曲线第38页/共65页米氏双曲线第38页/共65页39

米氏方程的推导

首先假设：

1.反应在最适条件下进行

2.pH、温度和酶的浓度是固定的,变化的是底物浓度

3.反应在起始阶段，逆反应可忽略

4.反应体系处在稳态（stablestate）第39页/共65页米氏40

E+SESE+Pk+1k-1k+2

根据中间产物学说，在稳态时，ES的生成速度与其分解速度相等。有以下关系式：

V1=V-1+V+2(1)k+1

[E]

[S]=k-1

[ES]+k+2[ES]

=[ES]

（k-1+k+2

）

[E][S]=

[ES]（k-1+k+2

）/k+1

(2)

令（k-1+k+2）/k+1=Km(米氏常数)[E][S]=

[ES]Km(3)第40页/共65页k+1k-1k41

[Et]是自由酶E的浓度与结合酶ES的浓度之和，即[Et]=[ES]+[E](4)

总的反应速度V应该等于V+2=k+2[ES](5)

将(4),(5)代入(3),整理得到米氏方程:V=Vm[S]/(Km+[S])V速度

Vm最大速度

[S]底物浓度

Km米氏常数第41页/共65页[Et]是自由酶E的浓度与结合酶ES的浓度之和，第442米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度当S<<Ｋm时，v正比于[Ｓ],呈一级反应当Ｓ>>Ｋm时，v＝Ｖm，呈零级反应

米氏双曲线第42页/共65页米氏常数是反应最大速度米氏双曲线第42页/共65页43由米氏方程可知，米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度,即当v=1/2Vm时，Km=S

米氏常数Km=(k-1+k+2)/k+1在反应的起始阶段，k+2<<k-1，Ｋm≈k-1／k+1≈１／Ｋ平≈Ｋ解离此时，Ｋm越大，说明Ｅ和Ｓ之间的亲和力越小，ＥＳ复合物越不稳定。当Ｋm越小时，说明Ｅ和Ｓ的亲和力越大，ＥＳ复合物越稳定，也越有利于反应。米氏常数Ｋm对于酶是特征性的。每一种酶对于它的一种底物只有一个米氏常数。米氏常数及其意义第43页/共65页由米氏方程可知，米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度44米氏常数的求法双倒数作图法双倒数方程和双倒数曲线第44页/共65页米氏常数的求法双倒数作图法双倒数方程和双倒数曲线第44页/共455.5抑制剂对酶促反应速度的影响

酶的抑制剂（inhibitor）:凡能使酶的活性下降而不引起酶蛋白变性的物质。

酶抑制作用分为可逆抑制作用和不可逆抑制作用两大类。第45页/共65页5.5抑制剂对酶促反应速度的影响酶的抑46（一）可逆抑制作用（reversibleinhibition）

抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析、超滤等物理方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合抑制等。第46页/共65页（一）可逆抑制作用（reversibleinhibitio471、竞争性抑制（competitiveinhibitor）

竞争性抑制剂因具有与底物相似的结构，与底物竞争酶的活性中心，与酶形成可逆的EI复合物，减少的酶与底物结合的机会，使酶的反应速度降低的作用。这种抑制作用可通过增加底物浓度来解除。第47页/共65页1、竞争性抑制（competitiveinhibitor）48竞争性抑制的动力学特点是Vmax不变，而Km增大第48页/共65页竞争性抑制的动力学特点是Vmax不变，而Km增大第48页/共49

在可逆的竞争性抑制中，抑制剂通常是酶的天然底物结构上的类似物，两者竞争酶的活性中心。第49页/共65页在可逆的竞争性抑制中，第49页/共65页50磺胺类药物的抑菌机理第50页/共65页磺胺类药物的抑菌机理第50页/共65页512、非竞争性抑制（non-competitiveinhibitor）非竞争性抑制剂与酶的活性中心以外的集团结合，形成EI或ESI复合物，不能进一步形成E和P,使酶反应速度减低的抑制作用。不能通过增加底物浓度的方法来解除第51页/共65页2、非竞争性抑制（non-competitiveinhib52

在可逆的非竞争性抑制作用中：抑制剂结合在活性中心以外；抑制剂的结合阻断了反应的发生。第52页/共65页在可逆的非竞争性第52页/共65页53

非竞争性抑制作用的动力学特点是Vmax变小，而Km不变。第53页/共65页非竞争性抑制作用的动力学特点是Vmax变小，而Km不变。第54(二)不可逆抑制（irreversibleinhibition）抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，从而抑制酶活性。用透析、超滤等物理方法，不能除去抑制剂使酶活性恢复。

例如：有机磷农药中毒

（敌百虫、敌敌畏、乐果杀虫剂1605、1059等）

乙酰胆碱酯酶是羟基酶，与有机磷农药共价结合后失活，使兴奋性神经递质乙酰胆碱不能及时清除降解。第54页/共65页(二)不可逆抑制（irreversibleinh55金属离子如Mg++

对磷酰基转移酶，Cu++对一些氧化酶，Cl-对淀粉酶有激活作用。一些有机小分子如VitC，谷胱甘肽，巯基乙醇等对巯基酶有激活作用。5.5激活剂对酶促反应速度的影响第55页/共65页金属离子5.5激活剂对酶促反应速度的影响第55页/共6556终产物P对途径开头和分支点上的关键酶活性的调节。字母e表示酶。+表示激活，-表示抑制。6.1反馈控制(feedBack)6.酶活性的调节第56页/共65页6.1反馈控制(feedBack)6.酶活性的调节57变构酶模型米氏双曲线与S形变构曲线6.2变构调节0.11第57页/共65页变构酶模型米氏双曲线与S形变构曲线6.2变构调节0.1158

变构酶有特征性的S形动力学曲线。变构剂或底物浓度，在一定的范围里，一个比较小的变化就会导致反应速度显著的改变，因此更具可调节性。变构酶通常是关键酶，催化代谢途径中的非平衡反应，或称不可逆反应。这些酶一般处在途径的开始阶段或分支点上，通过反馈控制来调节。调节亚基与催化亚基分开，彼此独立的，称异促变构。变构剂与底物结合在同一个亚基上，称同促变构。第58页/共65页变构酶有特征性的S形动力学曲线。变构剂或底物浓度59又称酶的共价修饰，有磷酸化/脱磷酸，腺苷酰化/脱腺苷酰以及甲基化/脱甲基等形式。酶的活性在两种状态之间变化。这个化学修饰过程也是由酶催化的。6.3化学修饰(chemicalmodification)磷酸化酶两种形式的相互转变过程第59页/共65页又称酶的共价修饰，6.3化学修饰(chemicalmo60

指催化相同的化学反应，但是理化性质不同的酶。如，氨基酸组成、电泳行为、免疫原性、米氏常数等不同。乳酸脱氢酶同工酶LDH，由2种亚基（M和H）组合成5种4聚体

H4和M4分别在心肌中和在肌肉中活性最高。6.4同工酶（isozyme）第60页/共65页指催化相同的化学反应，但是乳酸脱氢酶同工酶LDH，61大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶系模型功能上相关的几个酶在空间上组织在一起，定向有序地催化一系列反应。例如，丙酮酸脱氢酶系由3个酶组成，脂肪酸合成酶系由6个酶和1个ACP蛋白组成。6.5多酶复合体(multienzymecomplex)第61页/共65页大肠杆菌的丙酮酸脱氢酶系模型功能上相关的几个酶6.5多酶复62

无活性的酶原（proenzyme），在特定的条件下，通过部分肽段的有限水解，转变成有活性的酶。如，动物的消化酶。6.6酶原激活第62页/共65页无活性的酶原6.6酶原激活第62页/共65页637.酶的应用酶基因的缺失引起遗传病酶活性的高低作为疾病诊断指标酶作为试剂用于临床检验和科学研究酶和酶的抑制剂作为治疗药物酶制剂作为饲料添加剂酶用于食品加工酶用于工业生产第63页/共65页7.酶的应用酶基因的缺失引起遗传病第63页/共65页64本章结束第64页/共65页本章结束第64页/共65页65维生素与辅助因子维生素与辅助因子66本章主要内容

酶的一般概念酶的组成与维生素酶的结构与功能的关系酶的催化机理酶反应的动力学酶活性的调节

第1页/共65页本章主要内容酶的一般概念第1页/共65页671.酶的概述

酶是生物催化剂。绝大部分酶是蛋白质，还有一些核糖核酸RNA具有催化作用，称为核酶（ribozyme）。1.1定义

细胞的代谢由成千上万的化学反应组成，几乎所有的反应都是由酶（enzyme）催化的。酶对于动物机体的生理活动有重要意义，不可或缺。酶在生产实践中有广泛应用。第2页/共65页1.酶的概述酶是生物催化剂。绝大部分酶是蛋白质681.2酶的命名（1）习惯命名——依据所催化的底物（substrate）、反应的性质、酶的来源等命名。例如，胃蛋白（水解）酶、碱性磷酸酶。（2）系统命名——根据底物与反应性质命名反应：葡萄糖+ATP葡萄糖-6-磷酸+ADP

命名：葡萄糖：ATP磷酰基转移酶（习惯名称，葡萄糖激酶）第3页/共65页1.2酶的命名（1）习惯命名——依据所催化的底物（subs691.3酶的分类

氧化还原酶AH2+BA+BH2

转移酶Ax+CA+Cx

水解酶AB+H2OAH+BOH

裂解酶AB+C

异构酶AB

合成酶A+BC，需要ATP第4页/共65页1.3酶的分类氧化还原酶AH2+B701961年酶学委员会（EnzymeCommission，EC）规定酶的表示法：

EC.X.X.X.X例如：乳酸脱氢酶

第5页/共65页1961年酶学委员会（EnzymeCommission，E711.4酶活性(enzymeactivity)酶活性的表示方法：

酶活性指的是酶的催化能力，用反应速度来衡量，即单位时间里产物的增加或底物的减少。

V=dP/dt=-dS/dt

测定方法：吸光度测定、气体分析、电化学分析等。第6页/共65页1.4酶活性(enzymeactivity)酶活性的表示72酶活性的计量：

EC1961年规定：在指定的条件下，1分钟内，将1微摩尔的底物转变为产物所需要的酶量为1个酶活国际单位（IU）。

比活性（specificityofenzyme）指的是每毫克酶蛋白所具有的酶活性单位数。比活性=活性单位数/酶蛋白重量（mg）比活性反映了酶的纯度与质量。第7页/共65页酶活性的计量：第7页/共65页73酶促反应的速度曲线

随着酶催化的反应进行，反应速度会变慢，这是由于产物的反馈作用、酶的热变性或副反应引起的。但是，在反应起始不久，在酶促反应的速度曲线上通常可以看见一段斜率不变的部分，这就是初速度。在酶的动力学研究中，一般使用初速度的（V0）概念。第8页/共65页酶促反应的速度曲线随着酶催化的反应进行，反应速度会变慢74高效性

酶的催化作用可使反应速度比非催化反应提高108-1020倍。比其他催化反应高106-1013倍

例如：过氧化氢分解

2H2O22H2O+O2Fe3+

催化，效率为6×104

mol/mol.S过氧化氢酶催化，效率为6×106

mol/mol.S专一性

即对底物的选择性或特异性。一种酶只催化一种或一类底物转变成相应的产物。1.5酶的特点第9页/共65页高效性1.5酶的特点第9页/共65页75

绝对专一性一种酶只催化一种底物转变为相应的产物。例如，脲酶只催化尿素水解成CO2

和NH3。

相对专一性一种酶作用于一类化合物或一类化学键。例如，不同的蛋白水解酶对于所水解的肽键两侧的基团有不同的要求。

立体专一性指酶对其所催化底物的立体构型有特定的要求。例如，乳酸脱氢酶专一地催化L-乳酸转变为丙酮酸，延胡索酸只作用于反式的延胡索酸（反丁烯二酸）。立体专一性保证了反应的定向进行。

第10页/共65页绝对专一性第10页/共65页76R1:Lys,ArgR2:不是ProR3:Tyr,Trp,PheR4:不是Pro第11页/共65页R1:Lys,ArgR3:Tyr,Trp,Phe第77

酶容易变性这是酶的化学本质（蛋白质）所决定的。酶的可调节性抑制和激活（activationandinhibition）反馈控制(feedback)

酶原激活(activationofproenzyme)

变构酶(allostericenzyme)

化学修饰(chemicalmodification)

多酶复合体(multienzymecomplex)

酶在细胞中的区室化(enzymecompartmentalization)

第12页/共65页酶容易变性第12页/共65页78已知的上千种酶绝大部分是蛋白质单纯酶：少数，例如：溶菌酶

结合酶：大多数

结合酶=酶蛋白+辅因子辅因子包括:辅酶、辅基和金属离子。2.酶的组成与维生素2.1酶的化学本质第13页/共65页2.酶的组成与维生素2.1酶的化学本质第13页/共6579

酶蛋白的作用：与特定的底物结合，决定反应的专一性。

辅酶、辅基的作用：参与电子的传递、基团的转移等，决定了酶所催化反应的性质。有十几种.

辅酶与辅基的异同点:它们都是耐热的有机小分子，结构上常与维生素和核苷酸有关。但是辅酶与酶蛋白结合不紧，容易经透析除去，而辅基通常与酶蛋白共价相连。

金属离子的作用：它们是酶和底物联系的“桥梁”；稳定酶蛋白的构象；酶的“活性中心”的部分。

第14页/共65页酶蛋白的作用：与特定的底物结合，决定反应的专一性。80

结合酶举例，()内为辅因子：

乳酸脱氢酶（辅酶I,NAD）异柠檬酸脱氢酶（辅酶I,NAD）醇脱氢酶（辅酶I,NAD）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（辅酶II,NADP）琥珀酸脱氢酶（FAD）乙酰辅酶A羧化酶（生物素，ATP，Mg++）脂酰辅酶A合成酶（辅酶A,CoA）第15页/共65页结合酶举例，()内为辅因子：第15页/共65页81维生素（Vitamin）是动物和人类生理活动所必需的，从食物中获得的一类有机小分子。它们并不是机体的能量来源，也不是结构成分，大多数以辅酶、辅基的形式参与调节代谢活动。脂溶性维生素：A视黄醇（维生素A原——胡萝卜素）

D钙化醇

E生育酚

K凝血维生素水溶性维生素：B族维生素和维生素C

（以下主要介绍B族维生素与辅酶、辅基的关系）2.2维生素与辅酶和辅基的关系第16页/共65页维生素（Vitamin）是动物和人类生理活动所必需的，从食物82表7‑2B族维生素及其辅酶形式B族维生素辅酶形式酶促反应中的主要作用硫胺素(B1)硫胺素焦磷酸酯(TPP)α-酮酸氧化脱羧酮基转移作用核黄素(B2)黄素单核苷酸(FMN)黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)氢原子转移氢原子转移尼克酰胺(PP)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)氢原子转移氢原子转移吡哆醇(醛、胺)(B6)磷酸吡哆醛氨基转移泛酸辅酶A(CoA)酰基转移叶酸四氢叶酸"一碳基团"转移生物素(H)生物素羧化作用钴胺素(B12)甲基钴胺素5′-脱氧腺苷钴胺素甲基转移第17页/共65页表7‑2B族维生素及其辅酶形式B族维生素辅酶形式酶促反应83VB1，硫胺素经焦磷酸化转变为TPP，焦磷酸硫胺素。它是酮酸脱氢酶的辅酶。以VB2，核黄素为基础形成两种辅基FMN黄素单核苷酸和FAD黄素腺嘌呤二核苷酸。作用是传递氢和电子。第18页/共65页VB1，硫胺素经以VB2，核黄素为基础形成两种辅基第18页/84泛酸（维生素B3）是CoA（辅酶A）的组成成分。CoA是脂酰基的载体。

吡哆醛和吡哆胺（吡哆素），维生素B6。磷酸吡哆醛是氨基酸转氨酶、脱羧酶等的辅酶。

第19页/共65页泛酸（维生素B3）是CoA吡哆醛和吡哆胺（吡哆素），第1985

尼克酸，烟酸（维生素Vpp）NAD+/NADH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（氧化/还原）NADP+/NADPH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（氧化/还原）。烟酰胺衍生物，传递氢和电子，氧化还原酶的辅酶。

第20页/共65页尼克酸，烟酸（维生素Vpp）86叶酸，其还原衍生物四氢叶酸是一碳基团转移酶的辅酶。一碳基团，如甲基、乙烯基、甲酰基等。生物素，维生素H。噻吩和脲缩组成，CO2

的载体，羧化酶的辅酶，且有戊酸侧链。

第21页/共65页叶酸，其还原衍生物四氢叶酸生物素，维生素H。第21页/共6587硫辛酸，含硫脂肪酸，有氧化和还原两种形式，既可以传递氢和电子，又能转移脂酰基。

维生素B12中心钴原子结合5’-脱氧腺苷基称辅酶B12

，为一些变位酶和转甲基酶的辅酶。第22页/共65页硫辛酸，含硫脂肪酸，有氧化

第22页/共65页88单体酶

只有三级结构，一条多肽链的酶。如129个氨基酸的溶菌酶，分子量14600。寡聚酶

含2-60个亚基，有复杂的高级结构。常通过变构效应在代谢途径中发挥重要的调节作用。多酶复合体

由多个功能上相关的酶彼此嵌合而形成的复合体。它可以促进某个阶段的代谢反应高效、定向和有序地进行。3.酶的分子结构第23页/共65页单体酶3.酶的分子结构第23页/共65页89酶的活性中心（activesite）

活性中心的必需基团

必需基团

活性中心以外的必需基团

结合基团（与底物结合，决定专一性）

活性中心

催化基团（影响化学键稳定性,决定催化能力）第24页/共65页酶的活性中心（activesite）第24页/共65页90酶的活性中心示意图活性中心是酶分子上由催化基团和结合基团构成的一个微区第25页/共65页酶的活性中心示意图活性中心是酶分子上由催化基团和结合基团构成91

化学反应是由具有一定能量的活化分子相互碰撞发生的。分子从初态转变为激活态所需的能量称为活化能。无论何种催化剂，其作用都在于降低化学反应的活化能，加快化学反应的速度。一个可以自发进行的反应，其反应终态和始态的自由能的变化（∆G’）为负值。这个自由能的变化值与反应中是否存在催化剂无关。4.酶的催化机理4.1活化能第26页/共65页4.酶的催化机理4.1活化能第26页/共65页92

催化剂降低了反应物分子活化时所需的能量非催化反应和酶催化反应活化能的比较

Ea，活化能；ΔG，自由能变化第27页/共65页催化剂降低了反应物非催化反应和酶催化反应活化能的比较

E93

S+EESP+E中间产物

反应过程

S+EESES*EPP+E过渡态复合物4.2中间产物学说第28页/共65页S+EES94

酶介入了反应过程。通过形成不稳定的过渡态中间复合物，使原本一步进行的反应分为两步进行，而两步反应都只需较少的能量活化。从而使整个反应的活化能降低。第29页/共65页酶介入了反应过程。通过形成不稳定的过渡态中间第29页95诱导契合学说认为，酶和底物都有自己特有的构象，在两者相互作用时，一些基团通过相互取向，定位以形成中间复合物。4.3诱导契合学说（inducedfit）第30页/共65页4.3诱导契合学说（inducedfit）第30页/共696邻近与定向效应：增加了酶与底物的接触机会和有效碰撞。张力效应：诱导底物变形，扭曲，促进了化学键的断裂。酸碱催化：活性中心的一些基团，如His，Asp作为质子的受体或供体，参与传递质子。共价催化：酶与底物形成过渡性的共价中间体，限制底物的活动，使反应易于进行。疏水效应：活性中心的疏水区域对水分子的排除、排斥，有利于酶与底物的接触。4.4催化机理第31页/共65页邻近与定向效应：增加了酶与底物的接触机会和有效碰撞。4.497

影响酶促反应速度的因素与酶作为生物催化剂的特点密切有关。这些因素有：温度、酸碱性、底物（substrate）浓度、酶浓度、激活剂（activators）和抑制剂（inhibitors）等。

5.酶促反应的动力学及其影响因素第32页/共65页5.酶促反应的动力学及其影响因素第32页/共65页98

一般来说，随着温度升高，化学反应的速度加快。在较低温度条件下，酶促反应也遵循这个规律。但是，温度超过一定数值时，酶会因热变性，导致催化活性下降。

最适温度（optimumT）：使酶促反应速度达到最大时的温度。最适温度因不同的酶而异，动物体内的酶的最适温度在37-400C左右。5.1温度对酶促反应速度的影响第33页/共65页一般来说，随着温度升高，化学反应的速度加快99酶反应的温度曲线和最适温度第34页/共65页酶反应的温度曲线和最适温度第34页/共65页1005.2溶液pH值对酶促反应速度的影响最适pH（optimumpH）：使酶促反应速度达到最大时溶液的pH。酶的最适pH与酶的性质、底物和缓冲体系有关第35页/共65页5.2溶液pH值对酶促反应速度的影响最适pH（optimu101

在其他条件确定时，反应速度与酶的浓度成正比。5.3酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对反应速度的影响第36页/共65页在其他条件确定时，5.3酶浓度对酶促反应速度的影响酶1025.4底物浓度对酶促反应速度的影响

在其他条件确定的情况下,在低底物浓度时,反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应.当底物浓度较高时，v也随着[S]的增加而升高，但变得缓慢，表现为混合级反应。当底物浓度达到足够大时，反应速度也达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。反应速度对于底物浓度的变化呈双曲线,称为米氏双曲线.其数学表达式为米氏方程.第37页/共65页5.4底物浓度对酶促反应速度的影响在其他条件确定的103米氏双曲线第38页/共65页米氏双曲线第38页/共65页104

米氏方程的推导

首先假设：

1.反应在最适条件下进行

2.pH、温度和酶的浓度是固定的,变化的是底物浓度

3.反应在起始阶段，逆反应可忽略

4.反应体系处在稳态（stablestate）第39页/共65页米氏105

E+SESE+Pk+1k-1k+2

根据中间产物学说，在稳态时，ES的生成速度与其分解速度相等。有以下关系式：

V1=V-1+V+2(1)k+1

[E]

[S]=k-1

[ES]+k+2[ES]

=[ES]

（k-1+k+2

）

[E][S]=

[ES]（k-1+k+2

）/k+1

(2)

令（k-1+k+2）/k+1=Km(米氏常数)[E][S]=

[ES]Km(3)第40页/共65页k+1k-1k106

[Et]是自由酶E的浓度与结合酶ES的浓度之和，即[Et]=[ES]+[E](4)

总的反应速度V应该等于V+2=k+2[ES](5)

将(4),(5)代入(3),整理得到米氏方程:V=Vm[S]/(Km+[S])V速度

Vm最大速度

[S]底物浓度

Km米氏常数第41页/共65页[Et]是自由酶E的浓度与结合酶ES的浓度之和，第4107米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度当S<<Ｋm时，v正比于[Ｓ],呈一级反应当Ｓ>>Ｋm时，v＝Ｖm，呈零级反应

米氏双曲线第42页/共65页米氏常数是反应最大速度米氏双曲线第42页/共65页108由米氏方程可知，米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度,即当v=1/2Vm时，Km=S

米氏常数Km=(k-1+k+2)/k+1在反应的起始阶段，k+2<<k-1，Ｋm≈k-1／k+1≈１／Ｋ平≈Ｋ解离此时，Ｋm越大，说明Ｅ和Ｓ之间的亲和力越小，ＥＳ复合物越不稳定。当Ｋm越小时，说明Ｅ和Ｓ的亲和力越大，ＥＳ复合物越稳定，也越有利于反应。米氏常数Ｋm对于酶是特征性的。每一种酶对于它的一种底物只有一个米氏常数。米氏常数及其意义第43页/共65页由米氏方程可知，米氏常数是反应最大速度一半时所对应的底物浓度109米氏常数的求法双倒数作图法双倒数方程和双倒数曲线第44页/共65页米氏常数的求法双倒数作图法双倒数方程和双倒数曲线第44页/共1105.5抑制剂对酶促反应速度的影响

酶的抑制剂（inhibitor）:凡能使酶的活性下降而不引起酶蛋白变性的物质。

酶抑制作用分为可逆抑制作用和不可逆抑制作用两大类。第45页/共65页5.5抑制剂对酶促反应速度的影响酶的抑111（一）可逆抑制作用（reversibleinhibition）

抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析、超滤等物理方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合抑制等。第46页/共65页（一）可逆抑制作用（reversibleinhibitio1121、竞争性抑制（competitiveinhibitor）

竞争性抑制剂因具有与底物相似的结构，与底物竞争酶的活性中心，与酶形成可逆的EI