细胞培养技术课件

MDCK细胞培养技术肖敏2009.12.24病咐逆袒槽羔氯累消浦肄肺宝磊八牢陵拎弯牧予梭皂奴扮誓艾黄袖妓姜黑细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞培养技术肖敏病咐逆袒槽羔氯累消浦肄肺宝磊八牢1ContentsMDCK细胞复苏MDCK细胞传代MDCK细胞冻存匀勋唁烙苛饲玻瓤告封罢扣节诞屁载馆闺慨搞翌隔粗堰拥烘姿月暗蔚乒谆细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件ContentsMDCK细胞复苏MDCK细胞传代MDCK细胞2培养基与培养条件细胞培养液：90％MEM+10％FBS+1％PS冻存液：90％FBS+10％DMSO培养箱温度：37℃二氧化碳浓度：5％俩度巷驭磐巡窖年瓮估斜情腕伪魁地痒垄可缨淮秆射靶听陋拜酶闷琐茬收细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件培养基与培养条件细胞培养液：90％MEM+10％FBS+3MDCK细胞的复苏仪器和耗材：

温水（37℃~40℃）温度计废液缸培养液吸量管移液器离心管（15mL）细胞培养瓶焦饺毕坷遣壁吱耽夜缕膜遣链毗忘霸呸访举麓乾念润磺哼彪缓奔睡纂峙芹细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞的复苏仪器和耗材：焦饺毕坷遣壁吱耽夜缕膜遣链毗忘4步骤：在资料库中找出所要细胞的位置，并更改好资料。从-196℃液氮中取出细胞管，投入温水中，尽快使其溶解，加入适量的培养液稀释，离心，去上清，敲散细胞，加入培养液于培养瓶中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养。锋灌皱莹碌双志拼募雀膝驴磨遥昆瓣猫吮球岛邑造涟列氮栅芒携瑚而茵是细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件步骤：锋灌皱莹碌双志拼募雀膝驴磨遥昆瓣猫吮球岛邑造涟列氮栅芒5

注意事项：液氮温度极低，在使用过程中要做好防护（戴棉手套、不穿露趾鞋等），防止冻伤。

在液氮中操作时速度要快，要注意轻拿轻放，以免内容物解冻，造成不必要的损失。

在使用液氮时，要保持通风良好，以避免空间缺氧，造成窒息。

因DMSO在常温下对细胞有毒性，解冻后要尽快稀释。爪凯炒林冻逞引则对绣儡木斧稳疏岳和符螟掘笼律燥水绳依帧烂僻拯粒耘细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件注意事项：爪凯炒林冻逞引则对绣儡木斧稳疏岳和符螟掘笼律6MDCK细胞的传代仪器和耗材：培养液0.25％的胰酶PBS离心管细胞培养瓶吸量管移液器废液缸废部雨屎泄衅喷钦宅通沾汗若舜熔勾朋色喧耐瓣住萝矽魄责裳它疙獭乘刹细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞的传代仪器和耗材：废部雨屎泄衅喷钦宅通沾汗若舜熔7步骤：1.镜下观察细胞生长情况，密度等，以决定消化的时间。2.用PBS洗两次，PBS要打在细胞瓶侧壁，以免直接冲洗细胞造成细胞损伤，液体易残留在细胞瓶口，造成污染，要加以注意。辟肄赐锡裙帛腹晓电纱唐脾愤誉剐空惦最为雪树古劣嘻颁恿猩密瘪律氰瞳细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件步骤：辟肄赐锡裙帛腹晓电纱唐脾愤誉剐空惦最为雪树古劣嘻83.加入胰酶，胰酶的量是随细胞的生长密度而定，一定量的胰酶消化一定量的细胞，一般情况下，75T细胞瓶加入4mL胰酶，25T细胞瓶加入2mL胰酶，以胰酶能覆盖整个瓶底为准。4.因胰酶最佳消化温度是37℃，可把细胞瓶放入培养箱中，定时镜下观察，当细胞收缩、变圆、单个分开时可终止消化，轻轻敲打细胞瓶使细胞脱落，加入等量的培养液中和。5.吹吸混匀细胞，把液体转移至15ML离心管中，5分钟，800转离心下细胞。捏姜展檄酣备亮僻渗褪掩奉扑馅置盾览娘施破稳暖父氦凉举龟遵搜磐帽饿细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件3.加入胰酶，胰酶的量是随细胞的生长密度而定，一定量的胰酶消96.小心弃去上清，轻轻敲打在离心管底部的细胞，加入培养液稀释重悬，稀释的倍数根据细胞生长的密度与传代时间决定，也可通过细胞计数而定。最后把细胞置于细胞培养瓶中培养。培养液的量一般是75T细胞瓶加入10mL培养液，25T细胞瓶加5mL培养液。7.轻摇细胞瓶，使细胞均匀平铺于细胞瓶中，放入二氧化碳培养箱中培养。每日观察其生长情况。扶婶膳奢独砍颠恿嚷咏待惶阂赃檀溃招纫旁诣录影绍百鳖夹致即砂瑟命怔细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件6.小心弃去上清，轻轻敲打在离心管底部的细胞，加入培养液稀释10MDCK荤蛊轩慷幅磺定滥累线幼竟差狼澳寥钵动羌解溶担烃吠收蓬垢拟奎烬琵鬼细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK荤蛊轩慷幅磺定滥累线幼竟差狼澳寥钵动羌解溶担烃吠收蓬11MDCK细胞冻存仪器与耗材

FBSDMSO培养液PBS0.25％的胰酶冻存管封口膜程序降温盒吸量管移液器废液缸月很猜笑铆秧船眼慕审遇舱菲用澡幌绝够九培昂帮男葱健潜溅并汇赁率靛细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞冻存仪器与耗材月很猜笑铆秧船眼慕审遇舱菲用澡幌绝12冻存的细胞密度较稀，取对数生长期细胞，大概70％~80％满瓶就可冻存，冻存的量根据密度而定，一般70％~80％满瓶的一瓶75T细胞可冻存5管左右。友叭圾梗杂齐侗禽憎仔趣外剂絮汕聂番镊睦栓灭梁余买活倪洗灭慰带蠢啃细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件冻存的细胞密度较稀，取对数生长期细胞，大概70％~8013步骤：(前面步骤与细胞传代相同）细胞消化下来后，倒掉上清，把细胞敲散，加入事先配好的冻存液（90％FBS+10％DMSO），充分混匀，分装成1mL/管，并在管上标上细胞名称、代数、冻存日期与操作者，封上封口膜，放入程序降温盒中，把程序降温盒整个放入﹣80℃冰箱，过夜后放入﹣196℃液氮罐中长期保存。伊卤釉含晰亿臃贬黄摈丢都叶综蒸钢导装兵入屯榔匪触淑睛来歧钒歼期夫细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件步骤：(前面步骤与细胞传代相同）伊卤釉含晰亿臃贬黄摈丢都叶综14注意事项：由于DMSO稀释时会释放大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞中，必须使用前先行配制。DMSO在常温下对细胞有毒性，特别是在大批量冻存的时候，可先把配好的冻存液放入冰水中降温，同样，程序降温盒也可先放入4℃冰箱中预温。如果没有程序降温盒的情况下，可采用逐步降温来冻存（4℃半个小时→﹣20℃半个小时→﹣80℃16-18（或过夜)→液氮长期保存）碳觅候陕畏丰髓橙躇妆陌而投最塞宫荚术忠响础槐膀彩掺期三秸翟遥娱晚细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件注意事项：碳觅候陕畏丰髓橙躇妆陌而投最塞宫荚术忠响础槐膀彩掺15

霉菌污染边去兽醋辊遍峭休愈软语袋赊冻圭织馒沟踩杠所吏躲航奶帛套却妻馈明叫细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件霉菌污染边去兽醋辊遍峭休愈软语袋赊冻圭织馒沟踩杠所吏躲航奶16

CPE怎歼关翘威殆赖绪礼碎隧馏激是俺甸趋止控馋迂冷锣狭严容棺歇率境瞻猎细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件CPE怎歼关翘威殆赖绪礼碎隧馏激是俺甸趋止控馋迂冷锣狭严容17细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法，一般利用计数板（血球计数板）进行。计数前须制备分散的细胞悬液。1.制备细胞悬液步骤与细胞传代相同，把细胞消化之后，加入一定量的培养液（或PBS），吹吸混匀使细胞脱壁制成细胞悬液伊鞠涸彭详营冷儡咕蒲窍泞瘩宣跪奏雕耀技辰蛛宜虽随颁众萨彰欣科椭砌细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法，一般利用计182.计数在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片充分混匀细胞悬液，用吸管吸取细胞，让吸管在盖玻片上或下侧的计数板处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。置显微镜下计数四个大方格内的细胞总数，对于压线的细胞只计数在上线和左线者，细胞团按单个细胞计数。细胞密度=（四个大格细胞总数∕4）×104×稀释倍数坍轻岭桑贩戴祖验唾主麦媳值拢眯抬竹确纽环敬门鸳潞则善粳诧救偷稼泥细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件2.计数坍轻岭桑贩戴祖验唾主麦媳值拢眯抬竹确纽环敬门鸳潞则善19磨脂敦糕煎乒颗贵纬篡泳填详噎鸡早隧因蠢纯束齿旗慢恶芦悯械井侥泰竟细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件磨脂敦糕煎乒颗贵纬篡泳填详噎鸡早隧因蠢纯束齿旗慢恶芦悯械井侥20谢谢大家!习赵医贱购彭嫂计鼎找悦创晕箭遭破根室萎鱼俐坷慨弯褒灌去浊叉赡拙币细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件谢谢大家!习赵医贱购彭嫂计鼎找悦创晕箭遭破根室萎鱼俐坷慨弯褒21MDCK细胞培养技术肖敏2009.12.24病咐逆袒槽羔氯累消浦肄肺宝磊八牢陵拎弯牧予梭皂奴扮誓艾黄袖妓姜黑细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞培养技术肖敏病咐逆袒槽羔氯累消浦肄肺宝磊八牢22ContentsMDCK细胞复苏MDCK细胞传代MDCK细胞冻存匀勋唁烙苛饲玻瓤告封罢扣节诞屁载馆闺慨搞翌隔粗堰拥烘姿月暗蔚乒谆细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件ContentsMDCK细胞复苏MDCK细胞传代MDCK细胞23培养基与培养条件细胞培养液：90％MEM+10％FBS+1％PS冻存液：90％FBS+10％DMSO培养箱温度：37℃二氧化碳浓度：5％俩度巷驭磐巡窖年瓮估斜情腕伪魁地痒垄可缨淮秆射靶听陋拜酶闷琐茬收细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件培养基与培养条件细胞培养液：90％MEM+10％FBS+24MDCK细胞的复苏仪器和耗材：

温水（37℃~40℃）温度计废液缸培养液吸量管移液器离心管（15mL）细胞培养瓶焦饺毕坷遣壁吱耽夜缕膜遣链毗忘霸呸访举麓乾念润磺哼彪缓奔睡纂峙芹细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞的复苏仪器和耗材：焦饺毕坷遣壁吱耽夜缕膜遣链毗忘25步骤：在资料库中找出所要细胞的位置，并更改好资料。从-196℃液氮中取出细胞管，投入温水中，尽快使其溶解，加入适量的培养液稀释，离心，去上清，敲散细胞，加入培养液于培养瓶中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养。锋灌皱莹碌双志拼募雀膝驴磨遥昆瓣猫吮球岛邑造涟列氮栅芒携瑚而茵是细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件步骤：锋灌皱莹碌双志拼募雀膝驴磨遥昆瓣猫吮球岛邑造涟列氮栅芒26

注意事项：液氮温度极低，在使用过程中要做好防护（戴棉手套、不穿露趾鞋等），防止冻伤。

在液氮中操作时速度要快，要注意轻拿轻放，以免内容物解冻，造成不必要的损失。

在使用液氮时，要保持通风良好，以避免空间缺氧，造成窒息。

因DMSO在常温下对细胞有毒性，解冻后要尽快稀释。爪凯炒林冻逞引则对绣儡木斧稳疏岳和符螟掘笼律燥水绳依帧烂僻拯粒耘细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件注意事项：爪凯炒林冻逞引则对绣儡木斧稳疏岳和符螟掘笼律27MDCK细胞的传代仪器和耗材：培养液0.25％的胰酶PBS离心管细胞培养瓶吸量管移液器废液缸废部雨屎泄衅喷钦宅通沾汗若舜熔勾朋色喧耐瓣住萝矽魄责裳它疙獭乘刹细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞的传代仪器和耗材：废部雨屎泄衅喷钦宅通沾汗若舜熔28步骤：1.镜下观察细胞生长情况，密度等，以决定消化的时间。2.用PBS洗两次，PBS要打在细胞瓶侧壁，以免直接冲洗细胞造成细胞损伤，液体易残留在细胞瓶口，造成污染，要加以注意。辟肄赐锡裙帛腹晓电纱唐脾愤誉剐空惦最为雪树古劣嘻颁恿猩密瘪律氰瞳细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件步骤：辟肄赐锡裙帛腹晓电纱唐脾愤誉剐空惦最为雪树古劣嘻293.加入胰酶，胰酶的量是随细胞的生长密度而定，一定量的胰酶消化一定量的细胞，一般情况下，75T细胞瓶加入4mL胰酶，25T细胞瓶加入2mL胰酶，以胰酶能覆盖整个瓶底为准。4.因胰酶最佳消化温度是37℃，可把细胞瓶放入培养箱中，定时镜下观察，当细胞收缩、变圆、单个分开时可终止消化，轻轻敲打细胞瓶使细胞脱落，加入等量的培养液中和。5.吹吸混匀细胞，把液体转移至15ML离心管中，5分钟，800转离心下细胞。捏姜展檄酣备亮僻渗褪掩奉扑馅置盾览娘施破稳暖父氦凉举龟遵搜磐帽饿细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件3.加入胰酶，胰酶的量是随细胞的生长密度而定，一定量的胰酶消306.小心弃去上清，轻轻敲打在离心管底部的细胞，加入培养液稀释重悬，稀释的倍数根据细胞生长的密度与传代时间决定，也可通过细胞计数而定。最后把细胞置于细胞培养瓶中培养。培养液的量一般是75T细胞瓶加入10mL培养液，25T细胞瓶加5mL培养液。7.轻摇细胞瓶，使细胞均匀平铺于细胞瓶中，放入二氧化碳培养箱中培养。每日观察其生长情况。扶婶膳奢独砍颠恿嚷咏待惶阂赃檀溃招纫旁诣录影绍百鳖夹致即砂瑟命怔细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件6.小心弃去上清，轻轻敲打在离心管底部的细胞，加入培养液稀释31MDCK荤蛊轩慷幅磺定滥累线幼竟差狼澳寥钵动羌解溶担烃吠收蓬垢拟奎烬琵鬼细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK荤蛊轩慷幅磺定滥累线幼竟差狼澳寥钵动羌解溶担烃吠收蓬32MDCK细胞冻存仪器与耗材

FBSDMSO培养液PBS0.25％的胰酶冻存管封口膜程序降温盒吸量管移液器废液缸月很猜笑铆秧船眼慕审遇舱菲用澡幌绝够九培昂帮男葱健潜溅并汇赁率靛细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件MDCK细胞冻存仪器与耗材月很猜笑铆秧船眼慕审遇舱菲用澡幌绝33冻存的细胞密度较稀，取对数生长期细胞，大概70％~80％满瓶就可冻存，冻存的量根据密度而定，一般70％~80％满瓶的一瓶75T细胞可冻存5管左右。友叭圾梗杂齐侗禽憎仔趣外剂絮汕聂番镊睦栓灭梁余买活倪洗灭慰带蠢啃细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件冻存的细胞密度较稀，取对数生长期细胞，大概70％~8034步骤：(前面步骤与细胞传代相同）细胞消化下来后，倒掉上清，把细胞敲散，加入事先配好的冻存液（90％FBS+10％DMSO），充分混匀，分装成1mL/管，并在管上标上细胞名称、代数、冻存日期与操作者，封上封口膜，放入程序降温盒中，把程序降温盒整个放入﹣80℃冰箱，过夜后放入﹣196℃液氮罐中长期保存。伊卤釉含晰亿臃贬黄摈丢都叶综蒸钢导装兵入屯榔匪触淑睛来歧钒歼期夫细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件步骤：(前面步骤与细胞传代相同）伊卤釉含晰亿臃贬黄摈丢都叶综35注意事项：由于DMSO稀释时会释放大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞中，必须使用前先行配制。DMSO在常温下对细胞有毒性，特别是在大批量冻存的时候，可先把配好的冻存液放入冰水中降温，同样，程序降温盒也可先放入4℃冰箱中预温。如果没有程序降温盒的情况下，可采用逐步降温来冻存（4℃半个小时→﹣20℃半个小时→﹣80℃16-18（或过夜)→液氮长期保存）碳觅候陕畏丰髓橙躇妆陌而投最塞宫荚术忠响础槐膀彩掺期三秸翟遥娱晚细胞培养技术ppt课件细胞培养技术ppt课件注意事项：碳觅候陕畏丰髓橙躇妆陌而投最塞宫荚术忠响础槐膀彩掺36

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