乙肝五项操作规程

乙肝五项操作规程乙肝五项操作规程乙肝五项操作规程xxx公司乙肝五项操作规程文件编号：文件日期：修订次数：第1.0次更改批准审核制定方案设计，管理制度昆仑泌尿外科医院检验科免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测(乳胶法)操作规程生效日期：页码：第1页共4页乙肝五项（乳胶法）操作规程1.检测目的乙型肝炎病毒标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)检测。2.测定原理HBsAg检测采用双抗体夹心法原理，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒（即标记物）结合的HBsAb（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAb捕获，形成HBsAb标记抗体-HBsAg-HBsAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBsAb检测采用双抗原夹心法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBsAg。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBsAg反应（即标记抗原）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗原（标记抗原）在层析过程中先与标本中的HBsAb结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAg捕获，形成HBsAg标记抗原-HBsAb-HBsAg复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBeAg检测采用双抗体夹心法原理。试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBeAb。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBeAb反应（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBeAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBeAb捕获，形成HBeAb标记抗原-HBeAg-HBeAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。HBeAg、HBcAb采用竞争抑制法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争，与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，则预包被在乳胶颗粒上的相应抗原与膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。阳性标本，测试区(T)将没有红色条带；阴性标本，测试区(T)会出现明显的红色条带。昆仑泌尿外科医院检验科免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测(乳胶法)操作规程生效日期：页码：第2页共4页3.标本采集样本采集后应尽快分离血清或血浆以避免溶血。检测进应尽量使用新鲜的样本。样本若不能及时送检，可在2-8℃冷藏3天。长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。发臭、溶血等异常样本请勿使用。4.试剂艾博生物医药有限公司5.操作步骤使用前将试剂板和血清／血浆标本恢复至室温(20～30％)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在1小时内应尽快地使用。将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2-3滴)。加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果无效。6.结果判定由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不同的，请注意区别。.HBsAg、HBsAb、HbeAg阳性(+)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。阴性(-)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应昆仑泌尿外科医院检验科免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测(乳胶法)操作规程生效日期：页码：第3页共4页该判为阳性结果。、HBcAb阳性(+)：仅质控区(C)出现一条红色条带．在测试区(T)内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。弱阳性(+)：质控区(C)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。阴性(-)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区(C)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。7.质量控制请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。质控区内(C区)一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提。质控内(C)所显现的红色条带是判定标本是否足够，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。8.注意事项乳胶法乙肝五项检测试剂板(血清／血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。8.生物安全防护在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。昆仑泌尿外科医院检验科免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测(乳胶法)操作规程生效日期：页码：第4页共4页HBV对低温、干燥、紫外线、70％乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分钟、高压蒸汽灭菌121℃15分钟或加热160℃2小时均可灭活HBV。5～10g／L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72小时，％过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。9.临床意义HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAg也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期或既往曾感染过HBV，现在已恢复，而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即接种免疫成功的指标。HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为70％～90％。HBeAb阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb；在HBsAg和HBsAb阴性时，如能检出HBeAh和HBcAb，也能确诊为乙型肝炎近期感染。HBcAb阳性：说明既往感染过乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈阳性,也是最晚转阴性的一项，而且有些人一辈子都是阳性。附：HBcAb-lgG阳性：高滴度表示正在感染HBV，低滴度则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。H