血凝抑制实验报告

Word———血凝抑制实验报告血凝抑制试验报告（通用3篇）

血凝抑制试验报告篇1一、原理

流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而消失抑制现象。

二、应用

该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采纳的试验方法。可用于流感病毒分别株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型全都的感染或免疫抗体。

三、缺点

只有当抗原和抗体HA亚型相全都时才能消失HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。

四、试验步骤

1

阿氏（Alsevers）液配制

称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，

69kPa15min高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。

2

10%和1%鸡红细胞液的制备

2.1采血

用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（假如没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。

2.2洗涤鸡红细胞

将离心管中的血液经1500～1800r/min离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。

2.3

10%鸡红细胞悬液

取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800r/min8分钟，弃去上清液，精确观看刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合匀称。（此步

可省略，直接配制1%红细胞）

2.4

1%鸡红细胞液

取混合匀称的10%鸡红细胞悬液1mL，加入9mL生理盐水，混合匀称即可。（依据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）

3抗原血凝效价测定（HA试验，微量法）

3.1在微量反应板的1孔～12孔均加入25μlPBS（生理盐水），换滴头。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。

3.3从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。

3.4每孔再加入25μlPBS（生理盐水）。

3.5每孔均加入25μl体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。

3.6振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观看结果（假如环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对比孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。

3.7结果判定

将板倾斜，观看血凝板，判读结果。

能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU）。留意对比孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。

4血凝抑制（HI）试验（微量法）

4.1依据3的试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，假如血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。

4.2在微量反应板的1孔～11孔加入25μlPBS（生理盐水），第12孔加入50μlPBS（生理盐水）。

4.3吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。

4.41孔～11孔均加入含4HAU抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。

4.5每孔加入25μl1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下进行），对比红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。

4.6结果判定

试验成立的条件：只有阴性对比孔血清滴度不大于21og2，阳性对比孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。

以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。

HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性；HI价大于或等于41og2为阳性。

五、HI试验留意事项

1、合理选择抗原和对比阳性血清。针对Re-4和Re-5株疫苗免疫采纳相应抗原和对比阳性血清。

同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，假如毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株假如与抗原所用毒株相同时，则所测得的HI效价较高。

2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应根据说明中规定的体积重新溶解并保存。要避开杂菌污染，由于污染所造成的非流感起源的凝集素也可与全部抗血清发生非特异反应。为避开反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。

3、反应温度不能太高。若在37℃（如温箱）下进行，

血凝抑制试验报告篇2随着养殖业的飞速进展和广阔养殖户科学意识的不断提高，人们普遍熟悉到试验室检测技术在临床应用的重要性。下面简洁介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的留意事项及操作方法。

应用：

用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。

下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：

留意事项：

一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采纳四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并留意不要用消毒剂，以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。

二、四单位抗原的精确性：要获得精确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。

三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采纳免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并留意转速和时间，通常采纳五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最终一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。另外，洗红血球过程中，应留意动作要轻，玻璃仪器之间尽量削减碰撞，以免造成红血球裂开而影响结果。

四、结果判定的准时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对比，加入红血球后，每隔5分钟观看一次，一旦两列对比孔图像清楚地显示出来时，应马上对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的精确性。

血凝与血凝抑制试验的操作方法

一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔V型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培育箱、冰箱等。

二、方法：

1%鸡红血球的制备：

1.用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例为1∶3～4。

2.洗血球：共洗4～5次，每次5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为1∶2～3。离心机转速为每分钟1500～3000转，最终倾去上清。

3.吸红血球泥1ml加生理盐水99ml，配成1%红血球备用。

三、血凝试验：

1.血凝板上12个孔内全部加入生理盐水，每孔0.05ml，吸等量新城疫抗原于第一孔内，混匀后吸出同量于其次孔内混匀，以此类推稀释至第11孔，并弃去0.05ml，留第12孔作为生理盐水对比，然后全部孔内加入1%鸡红血球。

2.将血凝板置于振荡器上振荡1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培育箱，每5分钟观看一次，至10～15分钟取出，一般以生理盐水对比孔的图象清析地消失为准。

3.结果判定：红血球在反应板底部全部匀称铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集（++）。

4.消失完全凝集的抗原的最高稀释度，即为该抗原的凝集价。

5.四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），则前移2孔即26（64），作为四单位抗原的稀释度。即：63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。

四.血凝抑制试验：

1.血凝板上1～11孔全部加入0.05ml的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗体，稀释至第10孔，弃去0.05ml，再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔，第11孔为抗