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文档简介
应用锝-99m标记Survivin反义寡核苷酸进行肝癌反义显像的实验研究
华中科技大学协和医院.应用锝-99m标记Survivin反义寡核苷酸进行肝癌反义显1Survivin基因高表达于人类大多数恶性肿瘤、而在正常成人终末分化的组织中不表达或低表达,参与了肿瘤的发生、发展,与预后和肿瘤的耐药性也存在关联。Survivin基因是一个极具潜在价值的癌基因。前言.Survivin基因高表达于人类大多数恶性肿瘤、而在正常成人2从理论上讲,只要靶DNA或mRNA有过度的表达,便可以人工合成相应的反义寡核苷酸(ASON),制成核素标记的分子探针,利用核素显像设备达到早期、特异性地诊断和治疗诸如肿瘤、炎症等疾病,因此具有广阔的应用前景。
前言.从理论上讲,只要靶DNA或mRNA有过度的表达,便可以人工合3DNARNA+antisense﹡γ前言.DNARNA+antisense﹡γ前言.4Survivin反义寡核苷酸的99mTc标记及标记物的分析99mTc-Survivin-ASON在肝癌细胞和正常肝细胞中的动力学分析
99mTc-Survivin-ASON在正常小鼠及荷人肝癌裸鼠体内的生物学分布荷人肝癌裸鼠99mTc-Survivin-ASON肿瘤反义显像研究
前言.Survivin反义寡核苷酸的99mTc标记及标记物的分析5结果.结果.6ASON的99mTc直接标记率为2.7﹪。表明SurvivinASON的99mTc标记是通过螯合剂的偶联作用完成的,且标记成功。SurvivinASON的锝标记99mTc-MAG3-ASON
99mTc-DTPA-ASON
标记率65.22±6.87%50.56±5.45%放化纯94%95%比活度1190kBq/μg860kBq/μg.ASON的99mTc直接标记率为2.7﹪。Survivin7在室温条件下,与生理盐水温育4h、24h后,99mTc-MAG3-ASON和99mTc-DTPA-ASON的放化纯分别为92﹪和91﹪、86﹪和84﹪。99mTc-SurvivinASON的稳定性生理盐水.在室温条件下,与生理盐水温育4h、24h后,99mTc-899mTc-SurvivinASON的稳定性在37℃条件下,与新鲜人血清温育至4h时,两种标记物的放射峰均未出现漂移;24h时,两种标记物放射峰均出现向前移动和变宽,且在峰的小分子量一侧出现多个小峰,其中以99mTc-DTPA-ASON较明显。新鲜血清.99mTc-SurvivinASON的稳定性在37℃条件999mTc-SurvivinASON的稳定性99mTc-SurvivinASON在生理盐水中比较稳定,与血清保温4h内其性质也基本稳定,但在4h后会发生血清蛋白结合反应和受核酸酶的破坏。血清蛋白结合反应新鲜血清核酸酶破坏.99mTc-SurvivinASON的稳定性99mTc-1099mTc-SurvivinASON的细胞动力学.99mTc-SurvivinASON的细胞动力学.1199mTc-SurvivinASON的生物学分布At4hand12hpostinjectioninnudemicebearingtumor.99mTc-SurvivinASON的生物学分布At41299mTc-SurvivinASON的生物学分布At4hpostinjectioninnudemicebearingtumor.99mTc-SurvivinASON的生物学分布13接种后5周荷人肝癌SMMC-7721裸鼠模型.接种后5周荷人肝癌SMMC-7721裸鼠模型.14静脉注射99mTc标记的Survivin反义寡核苷酸探针后15min,在荷人肝癌裸鼠中即可见肿瘤病灶部位有显像剂聚集,于4h达到高峰;随着时间延长,病灶周围本底逐渐减低,肿瘤灶显影也更加清晰。荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像.静脉注射99mTc标记的Survivin反义寡核苷酸探针后15荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinASON肿瘤显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处有明显异常显像剂浓聚,箭头所示。右侧白色圆形浓聚灶为膀胱影。.荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinASO16荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinSON肿瘤显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处仅有轻度显像剂浓聚,分布不均,箭头所示。腹部右侧红色浓聚灶为膀胱影。
.荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinSON17事先注射未标记的SurvivinASON以封闭结合位点,60min后再注射99mTc-SurvivinASON探针,在注射标记寡核苷酸后4h肿瘤灶/对侧肌肉摄取比为0.93±0.23,较位点封闭前降低了62.5﹪。表明99mTc-SurvivinASON探针在肿瘤部位的聚集是特异性摄取。荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像.事先注射未标记的SurvivinASON以封闭结合位点,618荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像99mTc-SurvivinASON肿瘤抑制显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处显像剂浓聚程度明显降低,显像剂分布稀疏不均,箭头所示。
.荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像99mTc-SurvivinA19讨论.讨论.20螯合剂的应用
Survivin的99mTc标记需要用螯合剂
Survivin的99mTc标记方法是可行的
S-acetyl-NHS-MAG3的偶联效果优于环DTPA酸酐
环DTPA酸酐可作为候选的螯合剂.螯合剂的应用Survivin的99mTc标记需要用螯合2199mTc-SurvivinASON的特性在SMMC-7721肝癌细胞中有较高的摄取
在L-02正常肝细胞中仅轻微摄取
选择性的肝癌细胞摄取
在体外性质稳定
.99mTc-SurvivinASON的特性在SMMC-2299mTc-SurvivinASON的特性99mTc-SurvivinSON在肿瘤组织中的摄取明显低于ASON冷SurvivinASON可抑制99mTc-SurvivinASON在肿瘤组织中的摄取
被肝癌组织选择性地摄取,存在反义机制
在肿瘤组织中有较高摄取,4h后趋于平衡
.99mTc-SurvivinASON的特性99mTc-23结论本标记方法可行合理,99mTc-SurvivinASON可被肝癌细胞选择性摄取,在荷肝癌肿瘤模型中获得了特异性阳性显像。经过进一步对标记物载体等实验条件的改进,可望用于肝癌等多种实体肿瘤的反义基因显像诊断。.结论本标记方法可行合理,99mTc-Survivin24THANKYOU.THANKYOU.25应用锝-99m标记Survivin反义寡核苷酸进行肝癌反义显像的实验研究
华中科技大学协和医院.应用锝-99m标记Survivin反义寡核苷酸进行肝癌反义显26Survivin基因高表达于人类大多数恶性肿瘤、而在正常成人终末分化的组织中不表达或低表达,参与了肿瘤的发生、发展,与预后和肿瘤的耐药性也存在关联。Survivin基因是一个极具潜在价值的癌基因。前言.Survivin基因高表达于人类大多数恶性肿瘤、而在正常成人27从理论上讲,只要靶DNA或mRNA有过度的表达,便可以人工合成相应的反义寡核苷酸(ASON),制成核素标记的分子探针,利用核素显像设备达到早期、特异性地诊断和治疗诸如肿瘤、炎症等疾病,因此具有广阔的应用前景。
前言.从理论上讲,只要靶DNA或mRNA有过度的表达,便可以人工合28DNARNA+antisense﹡γ前言.DNARNA+antisense﹡γ前言.29Survivin反义寡核苷酸的99mTc标记及标记物的分析99mTc-Survivin-ASON在肝癌细胞和正常肝细胞中的动力学分析
99mTc-Survivin-ASON在正常小鼠及荷人肝癌裸鼠体内的生物学分布荷人肝癌裸鼠99mTc-Survivin-ASON肿瘤反义显像研究
前言.Survivin反义寡核苷酸的99mTc标记及标记物的分析30结果.结果.31ASON的99mTc直接标记率为2.7﹪。表明SurvivinASON的99mTc标记是通过螯合剂的偶联作用完成的,且标记成功。SurvivinASON的锝标记99mTc-MAG3-ASON
99mTc-DTPA-ASON
标记率65.22±6.87%50.56±5.45%放化纯94%95%比活度1190kBq/μg860kBq/μg.ASON的99mTc直接标记率为2.7﹪。Survivin32在室温条件下,与生理盐水温育4h、24h后,99mTc-MAG3-ASON和99mTc-DTPA-ASON的放化纯分别为92﹪和91﹪、86﹪和84﹪。99mTc-SurvivinASON的稳定性生理盐水.在室温条件下,与生理盐水温育4h、24h后,99mTc-3399mTc-SurvivinASON的稳定性在37℃条件下,与新鲜人血清温育至4h时,两种标记物的放射峰均未出现漂移;24h时,两种标记物放射峰均出现向前移动和变宽,且在峰的小分子量一侧出现多个小峰,其中以99mTc-DTPA-ASON较明显。新鲜血清.99mTc-SurvivinASON的稳定性在37℃条件3499mTc-SurvivinASON的稳定性99mTc-SurvivinASON在生理盐水中比较稳定,与血清保温4h内其性质也基本稳定,但在4h后会发生血清蛋白结合反应和受核酸酶的破坏。血清蛋白结合反应新鲜血清核酸酶破坏.99mTc-SurvivinASON的稳定性99mTc-3599mTc-SurvivinASON的细胞动力学.99mTc-SurvivinASON的细胞动力学.3699mTc-SurvivinASON的生物学分布At4hand12hpostinjectioninnudemicebearingtumor.99mTc-SurvivinASON的生物学分布At43799mTc-SurvivinASON的生物学分布At4hpostinjectioninnudemicebearingtumor.99mTc-SurvivinASON的生物学分布38接种后5周荷人肝癌SMMC-7721裸鼠模型.接种后5周荷人肝癌SMMC-7721裸鼠模型.39静脉注射99mTc标记的Survivin反义寡核苷酸探针后15min,在荷人肝癌裸鼠中即可见肿瘤病灶部位有显像剂聚集,于4h达到高峰;随着时间延长,病灶周围本底逐渐减低,肿瘤灶显影也更加清晰。荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像.静脉注射99mTc标记的Survivin反义寡核苷酸探针后40荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinASON肿瘤显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处有明显异常显像剂浓聚,箭头所示。右侧白色圆形浓聚灶为膀胱影。.荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinASO41荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinSON肿瘤显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处仅有轻度显像剂浓聚,分布不均,箭头所示。腹部右侧红色浓聚灶为膀胱影。
.荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像99mTc-SurvivinSON42事先注射未标记的SurvivinASON以封闭结合位点,60min后再注射99mTc-SurvivinASON探针,在注射标记寡核苷酸后4h肿瘤灶/对侧肌肉摄取比为0.93±0.23,较位点封闭前降低了62.5﹪。表明99mTc-SurvivinASON探针在肿瘤部位的聚集是特异性摄取。荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像.事先注射未标记的SurvivinASON以封闭结合位点,643荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像99mTc-SurvivinASON肿瘤抑制显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处显像剂浓聚程度明显降低,显像剂分布稀疏不均,箭头所示。
.荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像99mTc-SurvivinA44讨论.讨论.45螯合剂的应用
Survivin的99mTc标记需要用螯合剂
Survivin的99
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