食品卫生微生物学检验-O157课件

食品卫生微生物学检验

大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36-2008曾静北京出入境检验检疫局2009.3.20大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36—2008一、采标情况二、适用范围三、大肠肝菌O157：H7/NM四、操作过程大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36—2008一、采标情况第一法：常规培养法修改采用美国FDA第4a章2002与FDA方法的区别：增菌培养基以mEC+n肉汤取代了EEB肉汤增加了CHROMagarO157显色培养基大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36—2008一、采标情况

第二法：免疫磁珠捕获法修改采用北欧食品分析委员会（NMKL）No.164，1999与该标准的区别:增菌培养基以mEC+n肉汤取代了EEB肉汤增加了CHROMagarO157显色培养基增菌培养温度由41.5℃±0.5℃修改为36℃±1℃大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36—2008一、采标情况第三法：全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法修改采用AOAC-RIPerformanceTestedMethodsVIDASE.coliO157(ECO)Test,No.010502与该方法的主要区别：增菌培养基以mEC+n肉汤取代了mTSB肉汤大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36—2008三、适用范围适用于各类食品中和食品中毒样品中大肠埃希氏菌O157：H7和O157：NM的检验。大肠肝菌O157：H7/NM介绍肠出血性大肠杆菌（EHEC）是能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌。以O157:H7血清型为代表菌株。大肠肝菌O157：H7/NM介绍生物学特征EHEC除其代表菌株O157:H7外，还包括O157:NM、O26:H11、O111:H8、O125:NM、O121:H19、O45:H2、O4:NM、O145:NM、O5:NM、O91:H21、O103:H2、O113:H2等血清型的部分菌株。血清学鉴定包括O抗原和H抗原的鉴定。前者可使用玻片凝集试验或胶乳凝集试验；后者则应先进行动力试验，动力活泼者再进行玻片和试管凝集试验。

EHECO157:H7的另一个显著特征是可产生大量的Vero毒素（VT），也称作类志贺氏毒素（SLT），是EHEC的主要致病因子。Vero毒素按免疫原性等方面的不同可分为VT1和VT2。该毒素有一个A亚单位和5~6个B亚单位组成。B亚单位与宿主肠壁细胞糖脂受体结合，具有毒素活性的A亚单位进入细胞，改变60s核糖体的组分，干扰蛋白质的合成。编码VT的基因位于噬菌体上，可缺失而不产生VT。大肠肝菌O157：H7/NM介绍流行病学

1982年美国首次报道了由EHECO157:H7引起的出血性肠炎暴发。此后，世界各地陆续报道了该菌引起的感染，并有上升趋势。1996年在日本发生的EHECO157:H7的暴发流行，引起出血性腹泻，先后波及30多个都、府、县，感染近万人，并造成12人死亡，引起了全世界的关注。此外，美国、加拿大、瑞典、澳大利亚、英国的苏格兰和威尔士等国家和地区也相继报道了EHEC的散发性感染和暴发流行。日本、加拿大及瑞士等国已将EHECO157:H7列为必须报告的传染病，予以高度重视。我国于1988年首次分离到EHECO157:H7，从已有的流行病调查资料来看，我国亦存在EHEC的散发病例，但尚未有暴发流行的报道。EHECO157:H7引起的感染有明显的季节性，多发生于夏秋两季，7-8月为发病高峰。在地区分布上，多发生于发达国家，主要以散发性感染为主。在年龄分布上，儿童与老年人的发病率明显高于其他年龄组。最易分离到O157:H7的年龄为5-9岁（0.9%）和50-59岁（0.89%）。大肠肝菌O157：H7/NM介绍农场动物，尤其是反刍动物，构成EHECO157:H7在世界范围内的主要贮存宿主。

O157:H7在牛中的流行报告范围为0.1-16%；羊、猪、鸡、马、鹿、鸽子、海鸥等动物均可能为EHEC的携带者。

EHEC的感染可形成直接传播（动物→人，人→人），也可以通过间接传播（食物、水源→人）。食源性的EHEC感染中，牛肉、生奶、鸡肉及其制品，蔬菜、水果及其制品等均可能受其污染。其中，牛肉是最主要的传播载体。

EHECO157:H7的感染剂量极低。潜伏期为3-10天，病程2-9天。通常是突然发生剧烈腹痛和水样腹泻，数天后出现出血性腹泻，可发热或不发热。严重者可导致死亡。大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36—2008四、操作过程5.1增菌25g样品于225mLmEC+n增菌液中，均质，于36℃±1℃，培养18-24h,同时加阳性和阴性对照;5.2分离划线接种CT-SMAC和CHROMagarO157弧菌显色培养基，36℃±1℃，培养18-24h

大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36—2008四、操作过程5.2分离

CT-SMAC（山梨醇麦康凯琼脂基础）显色培养基不发酵山梨醇的菌落为圆形、光滑、较小的无色菌落，中心呈现较暗的灰褐色；发酵山梨醇的菌落为红色CHROMagarO157弧菌显色培养基圆形、较小的菌落，中心呈淡紫色-紫红色，边缘为无色或浅灰色CHROMagarO157弧菌显色培养基O157CT-SMAC显色培养基bioMérieuxO157:H7IDAgar大肠肝菌O157：H7/NM检验

GB/T4789.36