人教版微生物的培养与应用（48张）-完整版课件

课题一

微生物的实验室培养

了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。

一、课题目标：

掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：微生物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.

原核生物界

原生生物界真菌界病毒（一）微生物的结构(细菌、放线菌、蓝藻)(酵母菌、霉菌、大型真菌)(草履虫、变形虫、衣藻)(噬菌体、艾滋病毒)一、基础知识：细菌的结构基本结构细胞壁：肽聚糖。保护细胞膜：细胞质：(核糖体、质粒:小型环状DNA分子)拟核：大型环状DNA分子，控制细菌的主要遗传形状。特殊结构荚膜：多糖。保护作用鞭毛：运动芽孢：细菌休眠体，对恶劣的环境有抵抗力芽孢

有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.培养基：

培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质。（二）培养微生物根据物理性质分固体培养基半固体培养基液体培养基1、培养基的种类液体培养基+琼脂→（半固体培养基）↓固体培养基固体培养基半固体培养基液体培养基主要用于微生物的分离、计数等主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等主要用于工业生产需加入凝固剂，如琼脂半固体培养基：无动力有动力(弥散)(是否运动)

单个微生物在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。(一种微生物形成一种菌落。)微生物的菌落

每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。功能：定义：有鞭毛细菌菌落无鞭毛细菌菌落无鞭毛的球菌，常形成较小较厚边缘较整齐的菌落，有鞭毛细菌形成大而扁平、边缘波浪或锯齿状菌落菌落细菌的菌落特征因种而异根据化学成分分合成培养基——成分明确,常用于分类,鉴定天然培养基——成分不明确,常用于工业生产（加牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等）牛肉膏是用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。蛋白胨用新鲜牛骨及牛肉混合提取，经过消化、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黄色。酵母膏采用新鲜酵母乳液自溶、酶解、分离、浓缩等现代生物高新技术精制而成的一种棕黄色可溶性膏状纯天然制品。。选择培养基——在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。根据用途分鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌落呈深紫色选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌（耐盐细菌）不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物1、培养基的种类根据物理性质分固体培养基半固体培养基液体培养基根据化学成分分合成培养基天然培养基根据用途分鉴别培养基选择培养基营养物质的种类

碳源、氮源、生长因子、水和无机盐

2、微生物的营养概念来源作用碳源凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳源

CO2NaHCO3等有机碳源糖类（主要）脂肪酸石油等①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的能源（1）微生物的碳源自养型和异养型微生物分别能利用哪类碳源物质？思考概念来源作用氮源无机氮源

N2、NH4+、

NO3-、NH3等有机氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物（2）微生物的氮源思考哪些微生物能够利用氨气？氮源能否为微生物提供能量？概念常见的生长因子为什么不可缺少？微生物生长不可缺少的微量有机物维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等天然物质包括：酵母膏，蛋白胨，动植物组织提取液缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限（3）生长因子

请判断下列说法的正确性同一种物质不能既做碳源，又做氮源。碳源都能提供能量。NaHCO3只能提供碳源。无机氮源也能提供能量。微生物都需要生长因子。常见微生物主要的碳源、氮源、代谢类型微生物碳源氮源代谢类型蓝藻CO2无机氮自养需氧型硝化细菌CO2NH3自养需氧型酵母菌葡萄糖有机氮、无机氮异养兼性厌氧型①、目的要明确根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制②、营养要协调注意各种营养物质的浓度和比例。③、pH要适宜

细菌pH6.5~7.5

真菌pH5.0~6.03、培养基的配制原则（二）无菌技术

无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止外来杂菌入侵。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。1）清洁和消毒2）灭菌3）酒精灯附近进行4)避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触1.注意事项：（二）无菌技术2.消毒与灭菌的概念及两者的区别

消毒使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线30min消毒，照射前，可喷石炭酸或煤酚皂等消毒液加强消毒效果(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法1、灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口2、干热灭菌：玻璃器皿和金属用具3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的方法：1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。旁栏思考2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。1.器具的灭菌2.培养基的配制3.培养基的灭菌4.倒平板5.微生物接种6.恒温箱中培养7.菌种的保存二、实验操作二、实验操作(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL1．计算2.称量3．溶化（注意称量纸）操作步骤4．灭菌:

将培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。5．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？在培养箱里，倒置平板可以减少培养基表面的空气流动，是培养基水分蒸发减慢，减慢培养基出现干裂的时间。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。1、平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.

在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.（二）纯化大肠杆菌微生物接种的方法：平板划线法和稀释涂布平板法1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种。使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能