微生物培养基质量控制技术

1、微生物检验培养基质量控制技术培养基质质量的重重要性培养基是是微生物物试验的的基础，直接影影响微生生物试验验结果。适宜的的培养基基制备方方法、贮贮藏条件件和质量量控制试试验是提提供优质质培养基基的保证证。主 要内内容容培养基制制备、使使用、贮贮存中的的注意事事项培养基质质量控制制2010版药典附附录实例（培培养基质质量对实实验结果果的影响响）CHP与USP的异同点点同行的方方法介绍绍新技术部分菌种种在培养养基上的的典型特特征培养基制制备过程程中的注注意事项项培养基的的水化培养基水水化时不不得用铜铜锅或铁铁锅,以防有离离子混入培培养基中中,影响微生生物的生生长；配制培养养基最常常用的溶溶剂是纯纯化

2、水,不能含有任何可可能抑制制或影响响微生物物生长的的物质；培养基制制备过程程中的注注意事项项培养基的的溶解在培养基基分装灭灭菌前,各成分应应溶解均均匀,使用电炉炉等设备备煮沸培培养基时时,应用小火火加热,并边加热热边搅拌拌,避免培养养基焦化化或爆沸沸溢出。培养基制制备过程程中的注注意事项项培养基的的灭菌已配制好好的培养养基必须须立即灭灭菌湿热灭菌菌必须严严格控制制灭菌温温度和时时间培养基制制备过程程中的注注意事项项培养基的的pH微生物必必须在适适宜的pH范围内才才能正常常生长繁繁殖或体现其其生物特特性。调整培养养基的pH,应用1 mol/LNaOH或1 mol/LHCl调整pH，一般灭灭菌前比

3、比最终pH高0.20.3。培养基制制备过程程中的注注意事项项培养基的的保温灭菌以后后培养基基应该迅迅速冷却却至所需需温度,避免长时时间保存存在灭菌菌锅内,造成过度度灭菌,影响培养养基的营营养成分分或选择择性效果果。培养基使使用过程程中的注注意事项项培养基的的接种平板在接接种使用用时,表面必须须无明显潮湿水水珠；对于保存存的培养养基,需待温度度回复至室温后后才可使使用,并且使用用前应检查；培养基贮贮存过程程中的注注意事项项干燥培养养基应遵循先先入先出出的原则则；贮存于阴阴凉干燥燥处,避免强光光直射；培养基贮贮存过程程中的注注意事项项已配制的的培养基基建议平板板倾注后后立即使使用；在平板上上标上制

4、制备日期期和/或有效期期和名称；固体培养养基灭菌菌后的再再融化只只允许一次；实例例三糖铁培培养基（TSI）未校正pH时，不同同厂家的的TSI培养基产产硫化氢氢强度不不一；校正pH7.5后，各培养基基硫化氢氢反应均均有改善善,不同厂家家的TSI培养基产产硫化氢氢强度仍仍不相同同；实例例三糖铁培培养基（TSI）由于培养养基pH太低,本身就是是黄色,细菌生长长后下层层仍为黄黄色,而斜面变变为橙红红色,易误判断断为下层层“变为黄色”。由此此定为发发酵菌，造成误误判；培养基质质量控制制（2010版药典）培养基适适用性检检查计数培养养基控制菌检检查用培养基计数培养养基适用用性检查查对照培养养基系指按培培养

5、基处处方特别别制备、质量优优良的培培养基，用于培培养基适适用性检检查。由由中国药药品生物物制品检检定所研研制及分分发。计数培养养基适用用性检查查 大肠埃希希菌金黄色葡葡萄球菌菌枯草芽孢孢杆菌 白色念珠珠菌黑曲霉白色念珠珠菌营养琼脂脂培养基基玫瑰红钠钠琼脂培培养基酵母浸出出粉胨葡葡萄糖琼脂培养养基计数培养养基适用用性检查查结果判定定被检培养养基上的的菌落平平均数对照培养养基上的的菌落平平均数菌落形态态大小应应与对照照培养基基上的菌菌落一致致计数培养养基70%控制菌检检查用培培养基适适用性检检查促生长能能力抑制能力力指示能力力检查项目目控制菌检检查用培培养基适适用性检检查增菌培养养基促生生长能力力

6、检查：分别接接种不大大于100cfu的的试验菌菌于被检检培养基基和对照照培养基基中，在在相应控控制菌检检查规定定的培养养温度及及最短培养养时间下培养。与对照照培养基基管比较较，被检检培养基基管试验菌应应生长良良好。控制菌检检查用培培养基适适用性检检查固体培养养基促生生长能力力检查：取试验验菌各0.1ml（含含菌数50100cfu）分别涂布于被检培培养基和和对照培培养基平平板上，在相应应控制菌菌检查规规定的培培养温度度及最短短培养时时间下培培养。被被检培养养基与对对照培养养基生长长的菌落大小小形态特特征应一一致。控制菌检检查用培培养基适适用性检检查培养基抑抑制能力力检查：接种不不少于100cfu

7、的的试验验菌于被被检培养养基中，在相应应控制菌菌检查规规定的培培养温度度及最长时间间下培养，试验菌应应不得生生长。控制菌检检查用培培养基适适用性检检查固体培养养基指示示能力检检查：取取试验菌菌各0.1ml（含菌菌数不大大于100cfu）分分别涂布布于被检检培养基基和对照照培养基基平板上上，在相相应控制制菌检查查规定的的培养温温度及时时间下培培养。被检培养养基中试试验菌生生长的菌菌落形态态、大小小、指示示剂反应应情况等等应与对对照培养养基一致致。控制菌检检查用培培养基适适用性检检查液体培养养基指示示能力检检查：分分别接种种不大于于100cfu 的试试验菌于于被检培培养基和和对照培培养基中中，在相

8、相应控制制菌检查查规定的的培养温温度及最最短培养养时间下下培养。与对照培培养基管管比较，被检培培养基管管试验菌菌生长情情况、指指示剂反反应等应应与对照照培养基基一致。培养基质质量控制制（2010版版药典）实验室配配制的培培养基的的常规监监控项目目pH适适用性检检查试验验定期的稳稳定性检查以确确定有效效期培养基质质量控制制（CHP与与USP的异同同点）计数培养养基的适适用性检检查：CHPUSP菌种的选选择大大肠埃埃希菌铜铜绿绿假单胞胞菌结果判定定比比值大于于70%1/22培养基营营养养琼脂培培养基大大豆消化化酪素培培养基玫瑰红钠钠琼脂培培养基沙沙氏葡萄萄糖培养养基酵母浸出出粉胨葡葡萄糖琼脂培养养

9、基(YPD)培养基质质量控制制（CHP与与USP的异同同点）控制菌检检查用培培养基的的适用性性检查：CHP与与USP方法基基本一致致，检查查用培养养基不同同。同行的方方法介绍绍培养基质质量控制制理化试验验方法包包括测定定培养基基的pH值和凝凝胶强度度微生物学学方法包包括固体体培养基基和液体体培养基基同行的方方法介绍绍固体培养养基定量质控控采采用倾注注平板法法、涂布布法、划线法(半定量量法)、改良良的MilesMisra法等测定定生长情情况；定性质控控评评价目标标微生物物非目标标微生物接种以以后的生生长情况况 ；同行的方方法介绍绍液体培养养基采用定量量稀释法法,用目标菌菌和杂菌菌的混合合菌株评价

10、价选择性性增菌培培养基的的选择性性；利用OD值评价液液体培养养基生长长率；同行的方方法介绍绍分值计算算质质量比较较新技术介介绍BioBall是一个很很小的水水溶性球球状物，包含了数量精精确的微微生物个个体，它它可以使微生物物质控中中的定量量控制达达到非常高的精精确度。新技术介介绍BioBall目前可以以提供超超过25种菌株；可应用于于培养基基质控、方法验验证等需要定量量质控的的各个领领域；新技术介介绍BioBallSingleShot提供1次精确接接种量BioBallMultiShot-550提供10次精确接接种量新技术介介绍BioBallSingleShot每个BioBallSingleShot都含28至33cfu；标准误差差小于或或等于3cfu；新技术介介绍BioBall与常规稀稀释法相相比的优优势使用方便便；精确的cfu数量；不同批次次间cfu数量稳定定；减少了由由于接种种量的变变化，造造成的质质控失败的风险险；BioBall