血清葡萄糖己糖激酶测定法

1、血清葡萄糖（ GLU）己糖激酶（ HK法）测定法实验原理己糖激酶紫外比色测定法。HK葡 萄 糖+ ATP - G-6-P+ ADPMg2 +G6PDHG-6-P + NAD+- 6- 磷 酸 葡 萄 糖 +NADH + H+标 本 ：2.1病人准备：12 小时禁食。2.2 类型：血清或血浆（ EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅 速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。标本存放：血清、血浆应在血液采集 1小时内，尽早分离。加 入糖分解抑制 剂 （ NaF ， KF） 后 的 稳 定 性 ： 15 25 保 存 可 稳 定 1 天 ,4 8 保 存 可 稳 定天

2、。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在 25 下可稳定 8个小时，在 4下可稳定 72 小时。尿 样应保存在 28下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在 28下稳定至少 5 天，5 天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20 的条件下。标本运输：常温条件下保存运输。标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。实验材料6.1试 剂申 能 血 糖 测 定 试 剂 盒 （ 141 2517170 1试 剂 16 64ml 试 剂 26 16ml ）试剂组成试剂 1：Tris缓 冲 液pH7.880mmol/L2 +ATP1.7mmol/LNAD1.7mmol/L试剂 2：2 +

3、4mmol/LMg己糖激酶1500U/L葡萄糖-6- 磷酸脱氢酶1500U/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂保存于 28，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。6.2校 准 品 ： 使 用 DiaSys 公 司 提 供 的 TruCal U校准品对自动分析仪进行校

4、准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。仪器：贝克曼 AU680 生化分析仪操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP 文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼 AU680 生化分析仪操作规程.SOP 文件检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平 I 与 II质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限，3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。11.计 算 方 法 ： 以 TruCalU 复 合

5、校 准 品 血 糖 校 准 值 校 准 仪 器 后 ，在 病 人 结 果可 报 告 范 围 内 ，仪 器 直 接 报 告 可 靠 的 检 测 结 果 ，以mmol/L报 告 。手 工 测 定 计算方法为：Au葡 萄 糖 浓 度 （ mmol/L） 校准液浓度As参 考 值 范 围 ：（ mmol/L ）新 生 儿脐 带 血3.5 8.81 小 时2.0 5.52小 时2.2 4.9514 小时1.9 4.31028小 时2.6 4.54452小 时2.7 4.4儿童（空腹 ）1 6岁4.1 7.0719 岁3.9 5.9成人（空腹）3.9 6.4参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

6、根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。临床意义：检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视，还可用于检出新生儿低血糖症、排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发性低血糖，郎格罕氏岛细胞癌等。葡糖尿（存在葡萄糖化尿）在健康，怀孕的妇女中很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。脑脊髓液（CSH）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（不到的 40%至

7、50%血清葡萄糖），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌 性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使 CSH葡萄糖值在正常值以下。操作性能14.1线 性 范 围 ： 0.1 28mmol/L14.2 精密度：精密度的评估是根据 NCCLS推荐的标准方法，AU680 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度xsCV批间精密度xsCVn=20(mmol/L)(mmol/L)(%)n=20(mmol/L)(mmol/L)(%)样品 15.050.0470.94样品 13.650.0772.11样品 26.500.0590.91样品

8、 26.720.1422.11样品 316.100.1270.79样品 316.540.2961.7914.3方 法 学 比 较 ： 本 公 司 的 试 剂 盒 (y)与 某 商 品 化 试 剂 盒 (x)， 同 时 对 76 个样品进行 GLU检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00 x+0.00mmol/L； r=0.998 。14.4灵 敏 度 ： 本 试 剂 的 检 测 限 为 0.1mmol/L 。14.5病 人 结 果 可 报 告 范 围 ： 0.1 28mmol/L15.超 出 范 围 结 果 处 理 ： 本 法 线 性 上 限 为 28mmol/L 。如 样

9、品 测 定 值 超 过 上 限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作 1:10 稀释，重新测定，结果乘以 11。16.病 危 报 警 值 的 处 理 ： 女 性 及 婴 儿 的 血 糖 测 定 值 22.2mmol/L； 男 性 的 血 糖 测 定 值 22.2mmol/L；新生儿的血糖 测 定 值 16.6mmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。方法局限性17.1本 法 线 性 上 限 为 28mmol/L。如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ，应 将 样 品 用 0.9%氯化钠溶液作 1:10稀释，重新测定，结果乘以 11。17.2干 扰 物 质 ： 使 用 试 剂 起 始 法 ， 当 样 品 中 抗 坏 血 酸 浓 度1704mol/L， 胆红 素 浓 度684mol/L， 血 红 蛋 白 浓 度5.00g/L， 甘 油 三 酯 浓 度22.6mmol/L时没有观察到干扰。补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。参考文献1.ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1 s