五倍子中多酚类物质对DPPH自由基清除作用的电子自旋共振研究

1、五倍子中多酚类物质对DPPH自由基去除作用的电子自旋共振研究【摘要】目的研究五倍子提取物对活性氧自由基的去除作用。方法采用电子自旋共振ESR和自旋捕集技术直接测定不同浓度的五倍子两种方法提取物对DPPH自由基的去除作用。结果五倍子两种提取物具有良好的去除DPPH自由基的作用,在实验条件下,五倍子水提取物去除DPPH自由基的I50为0.4147g/L，五倍子醇提取物去除DPPH自由基的I50为0.8586g/L。结论五倍子中多酚类物质具有较强的抗氧化活性。【关键词】五倍子电子自旋共振技术DPPH自由基抗氧化活性Abstrat：bjetiveTstudytheatinfplyphenlsfrGal

2、lahinensisnsavengingDPPHradial.ethdsUsingeletrnspinresnane(ESR)andspintrappingtehnlgy,thesavengingeffetsfdifferentnentratinsftextratsfGallahinensisnDPPHfreeradialerestudied.ResultsTheresultsshedthattextratsfGallahinensishadstrngsavengingeffetnDPPHfreeradial.TheI50fsavengingDPPHradialftheaterextratan

3、dethanlextratfrGallahinensisere0.4147g/Land0.8586g/Lrespetively.nlusinTheplyphenlsfrGallahinensishavestrngantixidantativity.Keyrds：Gallahinensis;Eletrnspinresnane(ESR);DPPHfreeradial;Antixidantativity五倍子为漆树科漆树属盐肤木Rhushinensisill等叶或叶柄因受五倍子蚜虫的刺伤而成的囊状虫瘿，具有敛肺降火、涩肠止泻、固精缩尿、止汗、止血、解毒、敛疮等多种临床成效1。五倍子中的主要有效成分为

4、鞣质以及没食子酸等成分，具有较多邻位酚羟基的构造。电子自旋共振(eletrnspinresnane,ESR)又称电子顺磁共振(eletrnparaagnetiresnane,EPR)是研究自由基的最直接和最有效的方法。所谓电子自旋捕集技术2就是为了检测和识别短寿命自由基如氧自由基，需将一不饱和的抗磁性物质自由基捕集剂参加反响体系，捕捉瞬时自由基，生成寿命较长的自由基，通过电子自旋共振仪来检测。目前，关于五倍子去除自由基的研究尚无报道。故本实验采用电子自旋共振法ESR和自旋捕集技术对五倍子的抗氧化作用进展研究3，讨论了五倍子两种提取物去除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的才能，旨在为利用

5、五倍子开发天然的、高效低毒的抗氧化成效因子提供根据。1仪器与材料1.1仪器JEX-RE3XESRspetr-phteter(日本JEL公司)，KQ5200超声波清洗器昆山市超声仪器，RE-52AA旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂，FA2022电子分析天平上海恒平科学仪器。1.2材料五倍子购自佳木斯市金天药店，由本院生药学教研室刘娟教授鉴定为漆树科植物盐肤木Rhushinesensisill五倍子正品。DPPH(1,1-diphenyl-2-piryllhydrazyl)为色谱纯，ESR检测无杂质信号，标准品购自日本东京化成工业株式会社。其余试剂均为分析纯。2方法2.1供试样品溶液的配制取五倍子枯燥

6、粉末50g，加水进展超声提取；取五倍子枯燥粉末50g，加95%乙醇超声提龋各样品提取液减压挥干溶剂，枯燥后待用。取各样品提取物适量，精细称定，加甲醇溶解后，配成浓度为0.01，0.1，1.0，10.0g/L的溶液。2.2测试参数条件X波段，磁场范围：336.010.0T，微波功率，5，频率，9.45GHz，调制幅度，100kHz，响应时间，0.03s，扫描时间：1in，室温检测。2.3DPPH自由基的检测方法2.3.1空白对照组的测定取甲醇溶液200l，参加DPPH100l剧烈混合后，吸入石英毛细管，放入谐振腔，1in后在上述测定参数条件下测定DPPH自由基，记录谱图。2.3.2样品溶液的测定

7、取五倍子水提物不同浓度的样品溶液200l，分别参加DPPH100l剧烈混合后，按照上述方法进展测定DPPH自由基ESR信号；五倍子醇提物不同浓度的样品溶液亦按照同样方法测定DPPH自由基ESR信号；记录谱图。3结果3.1ESR指标的测定DPPH是一个相对稳定的自由基，甲醇中测得的DPPH自由基的ESR图谱中，以第三峰高表示DPPH自由基的浓度。抗氧化剂的参加只会使峰的高度降低，不会改变形状，而且随着五倍子水提物和醇提物的浓度增加,其ESR信号强度递减。见图1。去除率=(HDPPH/Hn)ntrl-(HDPPH/Hn)saple(HDPPH/Hn)ntrl100%3.2五倍子多酚类物质对DPPH

8、的去除作用通过记录的谱图，测量出DPPH和n的峰高,处理数据后，可以看出当参加一定浓度范围的五倍子水提物和醇提物后，DPPH自由基信号明显减弱，去除率随着浓度的增加而进步，说明五倍子多酚类物质对DPPH自由基有显著的去除作用，且呈明显的量-效关系。见图2。从图1中还可以看出五倍子两种提取物对DPPH具有不同的去除效果。五倍子醇提物的去除才能相对较弱，表现为在低浓度范围内去除率上升得比拟快，而在高浓度范围内去除率上升得较为缓慢，10.0g/L去除率可达94.24%；五倍子水提物去除才能相对较强，特别是在低浓度时表现明显，在浓度为1.0g/L时去除率就已到达70.82%，在10.0g/L去除率已到

9、达100%。经计算五倍子水提取物去除DPPH自由基的I50去除率到达50%时的样品浓度为0.4147g/L，五倍子醇提取物去除DPPH自由基的I50为0.8586g/L。4讨论自由基学说认为，人体内虽不断产生自由基，但又不断被自身的一套有效机制所去除，而一旦体内自由基产生过多或去除才能下降时,就会导致各种炎症、脏器损伤、肿瘤、衰老等一系列病变，因此，抗氧化剂的研究越来越受到高度的重视。但由于使用的合成抗氧化剂多有不良反响，挑选能防御自由基损害的天然来源的抗氧化剂是目前研究的热点。本实验结果说明，五倍子水提取物和醇提取物对活性氧自由基均有很好的去除作用，而且五倍子水提取物的效果明显优于醇提取物，因抗氧化活性与其构造有关。五倍子中的主要有效成分为鞣质，我国药典上收载的五倍子鞣质，称为鞣酸tanniaid，又叫单宁。它是倍酰葡萄糖的混合物，属水解鞣质。五倍子中鞣质以及没食子酸等成分具有较多邻位酚羟基的构造，通过作为氢供体释放出氢与环境中的自由基结合，终止自由基引发的链锁反响，从而阻止氧化过程的继续传递和进展，因此在生物体内具有较强的去除氧自由基的作用，从而产生了抗氧化的作用。五倍子是一种前景非常看好