(总论)5中药鉴定技术四大方法2课件

1、中药鉴定技术中药教研室来源鉴定性状鉴定显微鉴定理化鉴定四大鉴定方法中药鉴定技术山茶花的新鲜花朵的花粉粒气孔？簇晶牌香湛香肇香25002500 2500 2500 2500 2500 10000 10000 10000三 显微鉴定(microscopic identification) 利用显微技术对药材进行显微分析，以确定其品种和质量的一种鉴定方法。包括：组织鉴定用于完整药材或粉末特征相似的同属药材鉴定；粉末鉴定用于破碎、粉末状药材和中成药鉴定。 黄连（味连）粉末图黄柏（关黄柏）粉末图扫描电镜图1.花粉粒2.草酸钙簇晶3.种脐4.气孔5.花丝非腺毛6.导管 理化鉴定是利用某些 物理的、化学的或

2、仪器分析方法，分析药材中所含的有效成分或主要化学成分的有无和含量的多少，鉴定药材的真实性、纯度和品质优劣程度。 四、理化鉴定（physicochemical identification) 物理常数的测定 包括相对密度、旋光度、折光率、黏稠度、凝固点、熔点等的测定。多用于挥发油、油脂类、树脂类、液体类药和加工品类药材的鉴定。常规检查1、水分测定 2、灰分测定 3、膨胀度检查 4、酸碱度 5、色度检查 6、有害物质的检查 有机农药的检测黄曲霉毒素的检查重金属检查砷盐检查 . 荧光分析概念：利用中药所含的某些化学成分，在紫外光或常光下能产生一定颜色的荧光的性质进行鉴定。 举例：黄连折断面在紫外光灯

3、下显金黄色荧光，木质部尤为明显。 秦皮的水浸出液在自然光下显碧蓝色荧光。薄层色谱法1、概念：是将适当的吸附剂或载体涂布于玻璃板或铝片上，使成一均匀薄层，待点样、展开后，与适宜的对照物（对照品或对照药材）按同法在同板上所得的色谱作对比，用以进行中药的鉴别 2、操作方法： 薄层板的制备 点样 展开 检测10药根碱* 11巴马汀 12小檗碱 13表小檗碱* 14黄连碱1黄连对照药材（味连） 2黄连（恩施黄连） 3黄连对照药材（雅连） 4黄连对照药材（云连）5野连 67黄连（国产黄连） 8黄连（日本黄连） 9非洲防己碱 黄 连黄柏18.黄柏 9.黄柏对照药材（川） 10.黄柏对照药材（关）11.非洲防

4、己碱 12.药根碱 13.巴马汀14、小檗碱 15、表小檗碱 16、黄连碱*对照品川牛膝光 谱 法 光谱法是通过测定物质在特定波长处或一定波长范围内对光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。具体分为： 1.紫外分光光度法 2.可见分光光度法 3.红外分光光度法 4.原子吸收分光光度法 白头翁委陵菜新技术、新方法简介1. DNA分子遗传标记技术； 2. 中药指纹图谱鉴定技术； 3. 高效毛细管电泳技术；1、DNA 分子鉴定Identification of TCM by DNA Molecular Marker20世纪90年代中后期开始；解决形态鉴定的某些局限；同属多来源药材的鉴别道地药材

5、的鉴别等PCR (Polymerase chain reaction)PCR fragmentsInterested DNA sequencesPrimerPrimerIdentification of TCM by DNA Molecular MarkerExtracts Genomic DNATCM materialsDNA sequencing寻找特征性基因PCR-RFLPDNA ChipDiagnostic PCR高等植物中nrDNA基因重复单位的基本结构，P1、P2为PCR扩增的两引物 18S r DNAITSITSSpacer regionASAS-1 5S-rRNA Coding

6、 regionCoding region在高等植物中，5SDNA是编码5S核糖体RNA的多拷贝基因，以串联重复的形式存在，每个重复单位包括一个大约120bp的编码区和长度在100700bp之间的转录间隔区 核糖体DNA(ribosome DNA,rDNA)基因片段 中药鉴定常用的基因F.unibracteataF.cirrhosaF.przewalskiiF.thunbergii浙贝母川贝母及其伪品浙贝母幼小鳞茎的性状和显微特征两者性状和显微特征难以区别 浙贝母的鉴别性PCR鉴定上游引物：Fth-P3: 5- GGT GAG ATT AGA TCA TAA TTT CGG TG -3 329

7、下游引物：Fth-P2: 5-TAT TAG CAT TAA TCG ATC GAA TTC-3 522基于5S-rRNA 基因间区序列: 152(P1);522(P2);329(P3);505(P4)300 400 500FthP2、P3于60的扩增243M：100bp Ladder DNA 分子量标记， 1 浙贝母 2 东贝母 3 平贝母 4 伊贝母 5 新疆贝母 6 蒲圻贝母 7 蒲圻贝母 8 湖北贝母 9 梭砂贝母 10 暗紫贝母 11 甘肃贝母 12 卷叶贝母 13 紫花贝母 14 绿黄贝母 15 康定贝母浙贝母川贝母类药材的PCR-RFLP鉴定nrDNA ITS区(含5.8S) 序

8、列全长610bp川贝类特异性序列: 5- TGCCCGCCCT GCCCGGGACC TCGC3 非川贝类 T75bpITS1区序列全长212bp200 300 400ITS1区Sma酶03131798.7118 190308川贝类川贝母 暗紫贝母 甘肃贝母 梭砂贝母基于5S-rRNA基因间区序列 Hinf梭砂贝母;Bcn暗紫贝母Primer Premier 金银花存在明显的道地性，同一物种产地不同质量差异明显金银花道地药材的鉴定金银花ITS区序列全长（含5.8S）616bp, 变异位点： 道地： GCCCCCCCGCCCCGCCTCCCACAGGGTCGCG 非道地： GCCCCCCCGCC

9、CCGCTTCCCACAGGGTCGCG 近缘种 EcoNI458bp458bp不同产地金银花及其近缘种PCR-RFLP分析结果 500 400 30003113003.8708461247 A1为河南封丘，A2为河南新密，A3为山东平邑，A4为山东费县；B1为江苏南京，B2为湖南溆浦，B3为广东广州，B4为贵州贵阳，B5为重庆武隆，B6为云南昆明；C1为山银花，C2为毛花柱忍冬，C3为红腺忍冬道地非道地近缘种EcoNIPrimer Premier The major 5-cevane isosteroidal alkaloids in Beimu 中药贝母中含有的主要活性成分川贝;新贝湖贝;

10、浙贝To control active compounds (alkaloids) by TLC fingerprintsI 伊贝母药材薄层色谱图 1、2阴性对照 3.西贝素甙对照品 4. 西贝素对照品 5. 样品990120yc 6. 样品990406yc 7. 样品990918yc 8、9伊贝母药材对照 : 展开系统为乙酸乙酯：丙酮：甲酸：水（5：3：0.5：1） ：展开系统为氯仿-甲醇-水（40：10：1）西贝素甙西贝素II西贝素西贝素甙To control active compounds (alkaloids) by HPLC fingerprints134567822123456990720Waters 515 (Waters 公司产品)；柱：Kromasil C-18 5m, 2004.6mm (Turner公司产品)；流动相：乙腈-水-二乙胺（71：29：0.03），流速1.0ml/min；检测器：Alltech 500 蒸发光散射检测器（ELSD），漂移管温度88 oC，氮气流速2.38SLPM（每分钟标准升）；数据处理：江申色谱工作站 1.FPJ2 2.贝母辛 3.西贝素苷 4.FPJ4 5.伊贝碱苷A 6.西贝素 7.新贝甲素 8.FP