香菇多糖课件

1、香菇多糖的生产工艺精化1121梅飞轮主要内容认识产品追根求源 生产技术 一 认识产品1 结构式2 性质 物理：白色或棕黄色粉末状固体化学：能溶于0.5M NaOH溶液中，溶解度可达50-100mg/ml；不溶于甲醇、正丁醇、高浓度乙醇、丙酮等有机溶剂。生物：抗肿瘤，抗病毒3 产品的功能免疫调节功能抗肿瘤 抗感染保肝作用抗氧化、延缓衰老抗突变作用抗病毒作用保健品 广西桂林实力天然食品有限公司生产的荷仕威香菇多糖颗粒冲剂有免疫调节的功效 治疗各种感染 香菇多糖注射液与抗生素合用,能有效防治反复呼吸道感染的发生。药品 配合其他药物治疗慢性乙肝,可提高乙肝病毒标志物的转阴作用农药 香菇多糖0.5%水剂

2、对番茄病毒病、烟草病毒病有较好的抗病毒作用4 产品的应用5 产品的质量标准热水浸提法酶解法超声波提取法微波提取法深层发酵培养提取法 2 各种生产方法比较 01.热水浸提法02.酶解法03.超声波提取法04.微波法提取香菇多糖05.深层发酵培养提取法06 方法比较3 现在常用的生产方法深层发酵培养提取法三 生产技术 1 原料及要求 1 .1 菌种鸡腿蘑(Corprinus comatus)菌株Co一1由河南科技大学林学院园艺研究所提供。12主要试剂葡萄糖麦芽糖乳糖可溶性淀粉硝酸钾硫酸铵酵母膏蛋白胨磷酸二氢钾硫酸镁硫酸钙苯酚硫酸无水乙醇三氯甲烷(氯仿)正丁醇碳酸氢钠氢氧化钠DEAE-纤维素32Se

3、phadexG-200分析纯分析纯分析纯生化试剂分析纯分析纯生化试剂生化试剂分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯分析纯生化试剂生化试剂天津市科密欧化学试剂开发中心北京益利精细化学品有限公司天津市科密欧化学试剂开发中心天津市科密欧化学试剂开发中心西安化学试剂厂北京化工厂北京奥博星生物技术有限责任公司北京双旋微生物培养基制品厂天津石英钟厂霸州市化工分厂北京化工厂西安化学试剂采购站经销(秦岭化工厂)天津博迪化工有限公司开封东大化工(集团)有限公司试剂厂国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司天津市化学试剂一厂北京化工厂上海试剂四厂昆山分厂市售北京欣经科生物技术公司斜面培养基

4、()：马铃薯20，葡萄糖2，KH2P04 02，MgS04 005，琼脂2，VBxl0 mgL,，pH60液体种子培养基()：马铃薯20，葡萄糖2，KH2P04 02，MgS04 005，玉米浆05，pH60发酵基础培养基()：葡萄糖2，蛋白胨02，KH2P0402，MgS0401，玉米浆05，pH60发酵优化培养基()：玉米淀粉4，黄豆饼粉02，蔗糖3，KH2P04 01，MgS04 01，Cas04 O05，玉米浆05，pH6013培养基4 工艺流程说明及主要工艺参数 菌种活化将保藏的鸡腿蘑菌种转接于斜面培养基上，25培养至满管。选择菌丝生长旺盛的菌种备用。斜面培养从已活化的斜面菌种中取出

5、约O5锄2大小的菌丝块，接种于空白斜面培养基中部，于25培养至满管。液体种子培养将斜面菌种切割成约05cm2大小的菌丝块，接种于装有lOOmL液体种子培养基的250mL锥形瓶中，每瓶接半支斜面。于25-26C，140150rmin振荡培养4d。装液量对香菇深层发酵的影响香菇是好气性真菌，足够的氧气是保证香菇正常生长发育的重要环境条件。当空气不流通，氧气不足时，呼吸作用受到阻碍，菌丝的生长繁殖和子实体发育就会受到抑制，甚至死亡。缺氧时，菌丝借酵解作用暂维持生命，但时间过长会消耗大量营养，使菌丝容易衰老或死亡。其生长繁殖及代谢产物的合成过程需要大量的能量，为了获得足够多的能量，以满足细胞生长和发酵

6、代谢产物的需要，培养基中的能源必须经有氧降解才能产生大量的ATP。为此，必须供给充足的氧气。在发酵过程中，随着培养时间的延长，鸡腿蘑的生物量不断增长，到第7d达到最大值，达到192/100mL，然后缓慢下降。发酵液中的胞外多糖含量在发酵的前两天处于很低的水平，第3d开始迅速上升，到第6d达到最高值，达到1469L，然后缓慢下降。说明在发酵的第1d和第2d菌丝体基本未向发酵液中分泌胞外多糖，而第1d和第2d测到的糖含量(O049L)可能是玉米淀粉在用淀粉酶处理时未完全降解掉的少许寡糖。从第3d开始菌体大量向发酵液中分泌胞外多糖，到第6d达到最高值，之后由于营养物质变得不充足，菌体自身分泌出的胞外

7、多糖可能又被自身利用，所以胞外多糖产量在后期开始下降。发酵液pH在整个发酵过程中变化不大，由初始的605下降到543，这可能与该菌株产生少量的酸性物质有关。因此，发酵周期达6d可结束发酵，以获得较高的菌丝量和胞外多糖含量，此时的胞外多糖含量可达1469L，生物量达到17709L。Sevag法脱蛋白在一定体积的粗多糖溶液中，加定体积的Sevag试剂(氯仿，正丁醇按照一定的比例混合)。充分混匀后静止一定时间，放置于分液漏斗中，分层后弃去下层有机溶剂层及中间的蛋白质层。脱色活性炭为黑色细微粉末，无臭、无味。具有无毒，脱色、脱臭效果良好的特点，可以反复使用，成本低，适合工业化生产的需要。粉末活性炭具有

8、惊人的比表面积(800-2000 m2g)62，当被脱除的有色物质的分子直径小于或等于活性炭孔的入口直径时，可被活性炭吸附而起到脱色的效剽631。活性炭的脱色效率高、速度快、成本较低，但也存在一些问题，如再生困难、多肽和氨基酸损失率较高。吸附剂是酶解液脱色的主要影响因素，虽然从液体中脱除颗粒活性炭比粉术活性炭容易得多，但考虑到精制的需要，选择粉末活性炭并优化其脱色工艺。透析脱盐将去蛋白后的多糖提取液装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中透析48h,并及时换水。浓缩将经过透析脱盐后的多糖提取液，利用旋转蒸发仪在60C下减压浓缩至原体积的1/3。DEAE纤维素32的处理DEAE一纤维素32(再生)

9、一05molL NaOH和05moYL Naa混合溶液处理05h一蒸馏水洗至中性一05molL HCl溶液处理O5h一蒸馏水洗至中性一05molL NaOH溶液处理05h一蒸馏水洗至中性一05molL HCI溶液处理05h一蒸馏水洗至中性一悬浮于蒸馏水中备用。Sephadex G-200凝胶的处理Sephadex G一200凝胶一510倍的蒸馏水充分浸泡一倾斜法除去表面悬浮的小颗粒一05molL NaOH和05molL NaCI混合溶液在室温下浸泡O5h一蒸馏水洗至中性一煮沸法除去气泡一冷却后备用。冷冻干燥将透析好的样液倒入冷冻干燥瓶，置于冰箱的速冻室中使之全部冻结后，放入冻干机中进行冷冻干燥

10、。冷冻干燥的温度为30C左右，真空度为40kpa。冷冻干燥得多糖纯品。5 主要生产设备 工艺操作主要设备功能配料 配料桶使发酵培养基中营养物混合均匀灭菌连消塔杀灭发酵培养荃中的杂菌维持维持罐协助杀菌冷却喷淋冷却器冷却至发酵温度接种发酵机械搅拌通风发酵罐完成发酵过程设备生产厂家SHBB95型循环水多用真空泵郑州长城科工贸有限公司SPX250B-Z微电脑生化培养箱上海博讯实业有限公司医疗设备厂QYC系列全温空气摇床上海福玛实验设备有限公司沉淀池上海福玛实验设备有限公司A88组织捣碎机江苏省金坛市医疗仪器厂HS840u水平层流单人净化工作台苏州净化设备有限公司离心机上海福玛实验设备有限公司设备生产厂家恒温干燥箱上海精宏实验设备有限公司RE52CS旋转蒸发器上海本波仪器有限公司GHX一9000B-1隔水式恒温培养箱上海福玛实验设备有限公司50 1型超级恒温水浴锅上海阳光实验仪器有限公司超净工作台哈尔滨东联电子技术开发有限公司Acculab电子天平北京赛多利斯仪器系统有限公司DZF型真空干燥箱上海精宏实验没备有限公司6 关键过程与关键技术