肾气丸剂量配比变课件

1、 肾气丸剂量配比变化对肾损伤大鼠肾功能影响的研究 研究生姓名 郑兴刚 指 导 教 师 陶汉华 教授 论文框架理论探讨 一 肾气丸方药相关问题探讨 二 肾气丸组方思想探讨 三 肾气丸的组方特点 四 肾气丸成方的现代药理研究 五 历史上肾气丸剂量配比变化的文献考证 六 肾气丸抗庆大霉素肾毒性的作用实验研究 一 实验目的 二 实验材料 三 实验方法 四 实验结果 一 肾气丸方药相关问题探讨（一） 方名 肾气丸因首见于金匮要略，故又有“金匮肾气丸”之称，在原著中该方主治五种病症有三种称谓，治脚气入腹者名为崔氏八味丸；治虚劳腰痛者名为八味肾气丸；治痰饮、消渴、女子转胞者名为肾气丸，方名虽异，实为一方。（

2、现在市场上销售的金匮肾气丸并非仲景原方，而与南宋严用和的济生肾气丸比较接近。两者的不同在于严氏的济生肾气丸中用酒浸的川牛膝、酒蒸的车前子及炒山药，而金匮肾气丸在现行国家标准中所用牛膝不用炮制、车前子用盐炙且山药也不炒用。现在市场上销售的与仲景肾气丸原方比较接近一点的还有桂附地黄丸，但桂附地黄丸所用地黄为熟地黄，肉桂及附子的量也与仲景原方不同。）肾气丸方药相关问题探讨（二）药物组成 在金匮要略中肾气丸组成见于二处，先见于中风历节病脉证并治第五，后见于妇人杂病脉证并治第二十二，其药味组成、用量及制法完全相同。对于方中干地黄是后世的生地黄还是熟地黄有不同的认识。据神农本草经、别录、本草纲目和全国中药

3、炮制规范、实用中药炮制学等的相关记载，可以看出名医别录所载生地黄与徐大椿所说的生地黄一致，乃新掘的地黄鲜根茎即当前所用的鲜地黄不是生地黄；（仲景肾气丸中所用干地黄与本经、本草纲目及徐大椿所说的干地黄一致，相当于当前所用之生地黄不是熟地黄。） 对仲景方中所用“桂枝”一药，历代医家的认识颇不一致。医圣制方用药多以本经之药物学知识为基础。整部伤寒杂病论共用本经所载药物达136种，占该书用药总数的80%以上，其中不载于本经的30余种药物均被名医别录一一收载。仲景方中用桂枝者达74首之多，但本经、名医别录甚或唐以前的本草著作中却查无此名，出现鲜见的方剂用药与本草记载相脱离的情况。众所周知，方药之间的源流

4、发展关系，方剂是由单味药到多味药的反复运用中形成的，为中医用药治病的一大飞跃。仲景绝不可能在前人对桂枝一药毫无认识的情况下，即能对此运用变化得心应手，同时，也不可能于仲景广泛使用此药后的几百年间，诸多的本草著作连起码的记载也没有。（三）服用方法 在金匮要略中肾气丸服用方法有两种：一为“酒下十五丸，日再服”，一是“酒下十五丸，加至二十五丸，日再服”，这体现了根据体质的个体差异、病情轻重和服药反应而用量不同。 服药用酒送服者在伤寒杂病论中除肾气丸外还有薯蓣丸、九痛丸、赤丸、大黄蜇虫丸、天雄散、侯氏黑散、土瓜根散、当归芍药散、当归散及白术散。酒在经方中是颇为常用的一味药物，归纳仲景用酒之法可主要分为

5、水酒同煮、以酒代水、以酒洗药、以酒浸药、以酒煮丸和以酒下丸（散）六种情况。酒在经方中主要发挥了活血通脉、温通阳气、驱除寒邪、醒脾除湿及助行药力的作用。 （肾气丸用酒送服，首先从药物化学来看，因中药的有效成分主要分为水溶性、脂溶性和醇溶性三种，很多脂溶性和醇溶性成分只有在含醇溶剂中才能较好地溶出，所以肾气丸用酒送服能促进有效成分的溶出和利用。其次从现代药理学来看，因酒可以扩张血管，促进血液循环，增加肾脏滤过量，使小便排泄量明显增加，所以肾气丸用酒送服既可以促进其有效成分的吸收、转运及代谢又可以利小便，对肾气丸所治病证的小便不利之症有治疗作用。）肾气丸方药相关问题探讨 分析肾气丸在原书中治疗的五种

6、病证，症状表现中均出现了小便的改变，其中四处小便不利，一处 (男子消渴)小便反多，其病机均系肾气虚弱致使“肾主水液”功能异常而不能化气行水或化气摄水。素问上古天真论曰：“气脉常通而肾气有余”，反之肾气虚弱也多会伴有血脉失畅的病理改变。金匮要略水气病篇云:“经为血,血不利则为水”, 所以金匮要略中肾气丸证可因肾气虚弱，血脉失畅而水气不利，这也即血证论所云“瘀血化水”之意，当然水气不利也会反过来加重血脉的失畅，而使两者互为因果，即如金匮要略心典所说的“水分者，因水而病及血也”。牡丹皮在肾气丸中的作用 本经载牡丹皮曰: “除徵坚瘀血”，所以可以用牡丹皮活血以利水，也能减轻水气不利引起的血行不畅，现代

7、药理研究也证实牡丹皮的有效成分牡丹皮酚有利尿作用，且在肾脏中的作用部位可能与氢氯噻嗪不同。近代医家张锡纯谓：“肾气丸为补肾之药，实兼为开瘀血之药”也指出了肾气丸蕴含的活血化瘀利水的意味。宋国维在临床上以活血化瘀行水法治疗小儿肾病综合征，能取得消除水肿的目的，并且有较好的降低蛋白尿的作用。（所以肾气丸中牡丹皮之作用作活血利水理解，既有理论依据，又有临床意义，实乃仲景制方之本义。）（六）肾气丸化裁方 （六）肾气丸化裁方 牡丹皮在肾气丸中的作用二、肾气丸组方思想探讨 肾气丸一直以来是被大多数医家公认的一首补肾名方，但对于仲景创制肾气丸的组方思想一直存有不同认识，加之现在对肾脏精气阴阳的认识上也存在一

8、些分歧，这就造成了很多医家学者对肾气丸认识上的模糊及应用上的不恰当。为了能较正确地理解仲景肾气丸的原创思想以便更好地应用之，首先对肾阴虚、肾阳虚和肾气虚的概念含义简要分析如下。肾气丸组方思想探讨（二）从中医的“气分阴阳”观谈肾阴虚、肾阳虚、肾气虚 春秋战国至秦汉时期，古代哲学家为了揭示宇宙万物发生发展变化的规律和终极原因，随着阴阳概念的产生，便引入阴阳的概念并把其与气的概念相结合，这样哲学上“气分阴阳”的观念便逐渐形成，继而以阴阳二气的升降聚散运动来阐释宇宙万物生成发展变化的规律和终极原因。 在医学领域，古代医家在医学实践的基础上，为了更好的认识人体，解释生命现象，从而进行更有成效的医疗实践，

9、就把哲学上的“气分阴阳”观引入医学方面，这样便形成了中医学上的气分阴阳观。如内经载“阴阳者，天地之道也，万物之纲纪，变化之父母，生杀之本始。”、 “人生有形，不离阴阳。”等。张景岳言:“天地之道，以阴阳二气而造化万物;人生之理，以阴阳二气而长养百骸”。目前从现代医学的认识来看，无论从各系统的实体还是功能来看无疑“气分阴阳”观都是非常正确的，如存在凝血因子也存在抗凝血因子、存在利尿激素也存在抗利尿激素，凝血系统功能异常可发生出血性疾病也可发生凝血性疾病等等都体现了阴阳的对立统一性。 在中医学气分阴阳观的影响下，内经已明确指出了气具有阴阳两个方面的功能。灵枢决气曰:“上焦开发,宣五谷味,熏肤,充身

10、,泽毛,若雾露之溉,是谓气”。其中的“熏肤”就是“气”中之“阳”的温煦作用；“泽毛”、 “若雾露之溉”就是“气”中之“阴”的濡润滋养作用。灵枢终始云:“少气则阴阳俱不足,补阳则阴竭,泻阴则阳脱。如是者,可将以甘药”。对气虚表现出阴阳俱虚者,提出了阴阳双调的治疗原则。难经三十七难也提出:“人气内温于藏腑,外濡于腠理”。其中“温”与“濡”也是指气具有的阴阳双重功能。可见内经、难经都有对 “气分阴阳”观的深刻体现。后世很多医家对“气分阴阳”论点也有发挥,如王肯堂指出:“阴阳各因其对待而言之。形与气对,则以形为阴,气为阳;寒与热对,则以寒为阴,热为阳;升与降对,则以降为阴,升为阳;动与静对,则以静为阴

11、,动为阳一气之中而有阴阳,寒热升降动静备于其间。”；清石寿棠亦说:“阴阳互根,本是一气,特因升降而为二耳。”；明汪机亦有“阴中有阳,阳中有阴,阴阳同一气也”之论。可见“气分阴阳”观是中医学气学理论的本意。因此,作为五脏之气亦应包括阴阳两个方面。从中医的“气分阴阳”观谈肾阴虚、肾阳虚、肾气虚（三）历代医家对肾气丸组方思想的不同认识 历代医家对肾气丸组方思想有着不同的认识，归纳其主要观点，可归为三类。1补肾阳说 2.补肾气说 3.其它学说（四）肾气丸组方思想浅释 虽然对仲景创制肾气丸之组方思想有上述多种观点，且其中补肾阳之说已成思维定势，被大多数医家学者所接受，但这些观点均十分值得商榷。 1.温补

12、肾阳，于理不符 第一，肾气丸温补肾阳说的理论基础是“阴中求阳”理论，“阴中求阳”乃明代医家张景岳根据阴阳互根、肾命水火等理论，效素问阴阳应象大论“从阴引阳，从阳引阴”之法，用来治疗阳虚的著名辨证补益理论。“阴中求阳”治疗思想是阴阳互根关系在中医治疗上的运用和体现，即在治疗阳偏衰时，在扶阳剂中佐用滋阴药，即张景岳：“故善补阳者，必于阴中求阳，则阳得阴助而生化无穷”，“此阴阳相济之妙也”。“阴中求阳”法是据阴阳互根提出的补虚变法，亦是有效的药物配伍规律。 体现“阴中求阳”思想的方剂乃张景岳之右归丸，但仔细探究右归丸，不难发现，右归丸中乃使用大量补阳药，少量补阴药来达到“阴中求阳”的目的，而肾气丸的

13、方剂组成是用大量补阴药配以少量补阳药，因此若将肾气丸也作为“阴中求阳”的方剂，如此则让人难以理解究竟是用大量补阴药配少量补阳药是谓 “阴中求阳”，还是用大量补阳药配少量补阴药才谓“阴中求阳”。分析张景岳之“阴中求阳”理论，既为“求阳”，当然针对的是阳虚病证，既然阳虚，当然就当重用补阳药以补阳，而不该重用补阴药以补阴，因为若为阳虚，则易生内寒，阳虚内寒再重用寒凉滋腻之补阴药，则易壅遇阳气，加重病情。而以补阳为主，佐以补阴，方才能体现“冶病求本”、“阴阳互根”的思想。因此“阴中求阳”是指针对阳虚病证，以大量的补阳药为主，佐以少量补阴药进行治疗的一种治法，正如景岳所言：“善补阳者，必于阴中求阳，阳得

14、阴助则化生无穷”， 必是张景岳在使用仲景之肾气丸治疗肾阳虚的病证难奏良效，才另制右归丸主用补阳药补阳，又根据内经“阴阳互根阴生阳长”的理论指导，佐加少量补阴药达到“阴中求阳”的目的，且又可避免纯阳辛燥伤阴之弊以达到补肾阳的目的，因此可说张景岳 “阴中求阳”学术思想是受到了仲景的启发，但真正体现“阴中求阳”思想的方剂是右归丸而非肾气丸 ，所以说肾气丸并非“阴中求阳”之剂。 体现“阴中求阳”思想的方剂乃张景岳之右归丸，但仔细探究右归丸，不难发现，右归丸中乃使用大量补阳药，少量补阴药来达到“阴中求阳”的目的，而肾气丸的方剂组成是用大量补阴药配以少量补阳药，因此若将肾气丸也作为“阴中求阳”的方剂，如此

15、则让人难以理解究竟是用大量补阴药配少量补阳药是谓 “阴中求阳”，还是用大量补阳药配少量补阴药才谓“阴中求阳”。分析张景岳之“阴中求阳”理论，既为“求阳”，当然针对的是阳虚病证，既然阳虚，当然就当重用补阳药以补阳，而不该重用补阴药以补阴，因为若为阳虚，则易生内寒，阳虚内寒再重用寒凉滋腻之补阴药，则易壅遇阳气，加重病情。而以补阳为主，佐以补阴，方才能体现“冶病求本”、“阴阳互根”的思想。因此“阴中求阳”是指针对阳虚病证，以大量的补阳药为主，佐以少量补阴药进行治疗的一种治法，正如景岳所言：“善补阳者，必于阴中求阳，阳得阴助则化生无穷”， 必是张景岳在使用仲景之肾气丸治疗肾阳虚的病证难奏良效，才另制右

16、归丸主用补阳药补阳，又根据内经“阴阳互根阴生阳长”的理论指导，佐加少量补阴药达到“阴中求阳”的目的，且又可避免纯阳辛燥伤阴之弊以达到补肾阳的目的，因此可说张景岳 “阴中求阳”学术思想是受到了仲景的启发，但真正体现“阴中求阳”思想的方剂是右归丸而非肾气丸 ，所以说肾气丸并非“阴中求阳”之剂。 第二，观前文所列肾气丸在金匮要略中所治病症的所有条文，均未提出典型的虚寒症状，何来仲景制方专为补肾阳之说呢？ 第三，从肾气丸药量而言，温热之性的桂枝、附子仅占总量的227，以此温补肾阳，显然力有不足。正因为肾气丸不具有明显的温补肾阳功效，故很多医家凡以补肾阳为目的而使用该方时，故常不同程度的增大桂附用量，例

17、如千金方、局方、奇效良方等。并常把生地黄易为熟地黄并常添置巴戟天、鹿茸等补阳药物。综上所述认为肾气丸的组方思想为温补肾阳，即难以解释其组方意义，更不符合临床实际。 2.补肾气及其它学说，以偏概全 补肾气及其它学说均突出了肾气丸的“补”字,均只是在不同方面揭示了肾气丸的组方思想，不能全面表达仲景制肾气丸之本意，也容易让人产生误解。很显然在肾气丸方中占很大比例发挥重要作用的泽泻、茯苓、牡丹皮三味药物并不具有明显的补益之功。 3.肾气丸组方思想乃调复肾气 如上文所述肾气丸在金匮要略原著条文中共出现五次，分别治疗五种病证。分析肾气丸治疗的这五种病证，病证虽异,但其病机相同,即均属肾气虚弱, 在症状表现

18、中均出现了小便的改变,其中四处小便不利系“肾主水液”功能异常不能化气行水所致;一处 (男子消渴)小便反多系“肾主水液”功能异常不能化气摄水所致。肾主水液,是指肾具有蒸化和调节津液输布和排泄,以维持体内水液正常代谢的功能。体内的水液,来源于胃的受纳,经脾的转运,肺的通调,肾的蒸化,以三焦为通道,输布全身，代谢后的津液,则化为汗液、尿液等排出体外。这个过程,必须通过肾的蒸腾气化作用才能完成。如果肾的气化功能受到影响,水液代谢的调节发生障碍,可引起尿少、尿闭而致水肿;也可因肾不能固摄水液,出现小便清长、夜间多尿等病理改变。三、肾气丸的组方特点 （一）阴阳并补，注重比例 中医有“肾无实证”说，强调了肾

19、脏疾病大都是以肾精不足引起的功能异常。如上文所述肾阳精相对不足引起肾阳虚、肾阴精相对不足引起肾阴虚、肾精阴阳俱不足而又相对平衡引起肾气虚。如上文所述仲景原书中肾气丸所治五种病证，病虽异但证相同,均为肾气虚证，所以仲景用生地黄、山药、山茱萸补肾阴精，肉桂、附子补肾阳精，以使肾精充足，气化有源。仲景在补益肾脏不足之肾精时，妙处在于补阴精药多而重，补阳精药少而轻，用大量补阴精药配以少量补阳精药而不是等量用药，以顺应肾脏的生理特性。肾脏五行属水，主藏精，喜润恶燥，若用大剂量桂枝、附子补阳精，其燥热之性必耗及肾阴精，或火热扰及精室迫精外泄，或燥化太过，使心火偏亢，心肾不济，亦即内经的“壮火食气”之理。

20、这一点被后世医家十分强调，并多用“微微生火”来解释，如柯琴云：“肾气丸纳桂、附于滋阴剂中十倍之一，意不在补火，而在微微生火”。 （二）补泻结合，标本兼 肾气丸在金匮要略中所致病症均是由于肾精不足，精不化气，引起肾主水功能异常，而出现小便异常之症，所以仲景用生地黄、山萸肉、山药补肾阴精，用肉桂、附子补肾阳精以治本，而使肾精酒利水以治标而解决小便异常之症，所以肾气丸实属补泻结合，标本兼治之剂。（四）用药精当，多向调节 本方组方严谨，用药精当，配伍巧妙，体现出组方从补泻、寒热、气血、阴阳及多脏并调等多方面着手的特点，可多系统、多环节、多向调节人体功能，如方中山茱萸配泽泻补泻兼施；山药配茯苓固利相合；

21、附子配丹皮寒热并调；附子配生地黄阴阳相合；桂枝配丹皮气血并治；桂枝配茯苓气水并调；丹皮配茯苓血水兼治等。方中以生地黄滋补肾阴，山茱萸补益肝阴，山药补益脾肺之阴，以泽泻泻肾水而不伤肾气，丹皮活血以利水，茯苓健脾而渗湿，利水而不伤正。诸药相和，可共凑调肾肝肺脾四脏功能，有开有合，寓泻于补，使补不助火，补而不腻，泻水而不伤正。四、肾气丸成方的现代药理研究 五、历史上肾气丸剂量配比变化的文献考证 历史上有些医家根据自己对肾气丸的不同理解和临床需要对其剂量配比进行了一定的调整，对后世影响比较大的主要为以下几部著作。 东晋葛洪的肘后备急方在治虚损赢瘦不堪劳动方第三十三提到张仲景八味肾气丸方疗虚劳不足大伤饮

22、水腰痛小腹急，小便不利，在其论述中干地黄为四两，附子泽泻各一两，其余药物各为二两。 唐代王焘的外台秘要卷十一中运用八味肾气丸治疗消渴，并称之为“神方。其八味肾气丸剂量不同于仲景原方，其中山茱萸用到五两，泽泻四两，桂附各三两，其余同原方不变。 千金要方、太平惠民和剂局方和奇效良方中肾气丸用桂附各二两，其余药物剂量同原方。 清代，在医学从众录中肾气丸用附桂各五两，其余六味各减半。在医方集解中桂枝三两，附子四两。血证论中为附子三两、桂枝二两、茯苓、泽泻各四两、丹皮五两、其余同原方。 皇汉医学中肾气丸附、桂各0.9克，干地黄3.5克，山药，山茱萸各1.5克，丹皮、茯苓各1.3克；近代方剂书，亦有将附子

23、增大到原方四倍，桂枝增大到原方三倍，而其他药之剂量不变者. 综上所述历代很多医家早已注意到了肾气丸的剂量配比与药效关系问题，所以本论文通过试验方法探讨肾气丸在抗实验性肾损伤方面的剂量配比与药效关系问题，具有较客观的参考价值。 六、肾气丸抗庆大霉素肾毒性的作用实验研究 一、实验目的 研究肾气丸剂量配比变化对庆大霉素肾损伤大鼠血清肌酐(Cr)、血清尿素氮(BUN)及肾组织病理学的影响，进一步探讨肾气丸剂量配比变化对药效的影响，以探求肾气丸最佳剂量配比。 二、实验材料 （一）实验动物 成年雄性健康Wistar大鼠48只，体重18020g，合格证号：SCXK（鲁）20050015（山东中医药大学实验动

24、物中心提供）。动物饲料用普通饲料, 合格证号：SCXK(鲁)20090014（山东中医药大学实验动物中心提供）。实验研究 （二）主要仪器设备 半自动生化分析仪（型号：Microlab300;厂商：荷兰威图科学公司）Leica QWinV3图像分析系统，双目显微镜，载玻片，电子天平，灌胃器，注射器，50ml量杯，1000ml烧杯，恒温水浴锅，玻璃棒，大鼠解剖台，手术器械等。均由山东中医药大学实验中心提供。实验研究 （三）实验试剂 肌酐、尿素氮试剂盒，均购自南京建成生物有限公司；庆大霉素批准文号：国药准字H37021973，产品批号： 090727301，规格：2ml：8万u支，生产单位：山东鲁抗

25、辰欣药业股份有限公司；04台盼兰液；苦味酸；美蓝染料；生理盐水；蒸馏水等。 （四）中药制剂 肾气丸：生地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮、肉桂、附子。以上中药均购自山东中医药大学中鲁医院。 三、实验方法 （一）实验设计 将肾气丸设为4个因素，每个因素为一组，A组：生地黄、山茱萸；B组：山药、茯苓；C组：泽泻、牡丹皮；D组：肉桂、附子，每个因素设2个水平进行比较试验（见表1） 由于要观察A、B两因素交互作用，选择正交表为 L8（27）（见表2）。 以上设计把肾气丸分为ABCD四个因素，ABCD四个因素分别分成A1A2B1B2C1C2D1D2八个水平组。即A1水平组为生地黄8份、山茱萸4份；A

26、2水平组为生地黄4份、山茱萸4份；B1水平组为山药4份、茯苓3份；B2水平组为山药3份、茯苓3份；C1水平组为泽泻3份、牡丹皮3份；C2水平组为泽泻3份、牡丹皮2份；D1水平组为肉桂1份、附子1份；D2水平组为桂枝2份，附子2份。动物实验所用药材按人体常用剂量折算为每份为3 g，据正常标准体重60公斤用生地黄24g计算，200g左右实验大鼠用量按正常人用量7.5倍换算（见表3）。表3 肾气丸处方及剂量换算表 1处方：干地黄8两 山茱萸4两 山药4两 茯苓3两 泽泻3两 丹皮3两 桂枝1两 附子1两 2处方 8 4 4 3 3 2 2 2 3处方 8 4 3 3 3 3 2 2 4处方 8 4

27、3 3 3 2 1 1 5处方 4 4 4 3 3 3 2 2 6处方 4 4 4 3 3 2 1 1 7处方 4 4 3 3 3 3 1 1 8处方 4 4 3 3 3 2 2 2分组 干地黄 山茱萸 山药 茯苓 泽泻 丹皮 桂枝 附子 1 8（75.6） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 3（28.35） 1（9.45） 1（9.45） 2 8（75.6） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 2（18.9） 3 8（75.6） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35）

28、 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 4 8（75.6） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 1（9.45） 1（9.45） 5 4（37.8） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 6 4（37.8） 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 1（9.45） 1（9.45） 7 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35） 3（28.35） 1（9.45） 1（9.45）

29、8 4（37.8） 4（37.8） 3（28.35）3（28.35） 3（28.35） 2（18.9） 2（18.9） 2（18.9）（二）实验分组方法 将48只雄性Wistar大鼠同步化喂养1周后，随机分为8组，每组6只。其组别即为上述正交试验设计表中的8行，其序号与之相应，药物用量在常规用量基础上，其比例按正交设计每组的药物比例。（三）实验大鼠造模方法 1.实验用雄鼠的准备： 48只Wistar雄性大鼠同步化常规喂养1周。 2.造模方法：各组大鼠均腹腔注射庆大霉素每只0.8 ml/d，共7 d。 3.给药方法：各组大鼠造模同时分别灌胃相应肾气丸处方水煎剂，每只2 ml/d，共21 d。（四

30、）标本采集 麻醉状态下腹主动脉取血及剥离肾脏1.麻醉 10%水合氯醛(100mgkg)腹腔注射，使雄鼠知觉消失。2.术区备皮。3.麻醉成功后，令大鼠仰卧于手术台上。常规消毒，范围以切口为中心5cm，铺单。4. 取无菌手术包，左手用镊子提起皮肤，右手持剪刀逐层分开皮肤、皮下组织、肌层、腹膜。保护重要脏器。5. 在腹主动脉取血后，迅速剖取双肾，用4%多聚甲醛固定右肾，石蜡包埋，切片。（五）观测指标 1一般状况：记录体重、体态、精神状态、自主活动情况、反应灵敏度，皮毛情况、饮食、大小便情况等。 2生化指标：肌酐、尿素氮。 3.病理观察：用甲醛固定右肾，做病理切片。（六）统计方法统计处理采用PEMS

31、3.1软件中的正交试验分析方法进行统计。 四、实验结果 （一）一般状况 在造模过程中，实验大鼠逐渐出现反应迟钝，自主活动减少，倦怠，精神萎靡，时扎堆，皮毛光泽度差，竖毛，饮食减少，小便增多，大便质稀等症状。在造模过程中大鼠共死亡10只。 造模完成，在用不同剂量配比的肾气丸治疗过程中，各组大鼠以上症状逐渐好转。 （二）对大鼠血清尿素氮(BUN)的影响 见表4表4 血清尿素氮(BUN)方差分析表 因素 SS df MS F P A 0.3062 1 0.3062 0.0308 0.8626 B 1.5550 1 1.5550 0.1565 0.6971 AB 13.6549 1 13.6549 1

32、.3740 0.2564 C 46.3843 1 46.3843 4.6673 0.0445 D 24.2627 1 24.2627 2.4414 0.1356 从以上统计结果分析，对实验性肾损伤大鼠BUN水平的影响，A、B、D三个因素的两个水平之间无明显差异，P0.05。C因素两个水平之间存在差异，P0.05。但从均数统计结果来看，Cr水平A因素的1水平低于2水平；B因素的1水平低于2水平；C因素的2水平低于1水平；D因素的2水平低于1水平,故整体分析得出，降低肾损伤大鼠Cr水平的肾气丸最佳剂量配比为A1B1C2D2，即干地黄8份、山茱萸4份、山药4份、茯苓3份、泽泻3份、牡丹皮2份、肉桂2

33、份、附子2份。（四）对大鼠肾脏病理的影响 病理切片示A组：A1-1和A1-2部分肾小管变性（嗜酸性变），个别肾小管上皮坏死、A1-3肾小管变性坏死面积较大、 A1-4灶性变性坏死、A1-5肾皮质内部分肾小管扩张上皮变性、A1-6部分肾小管变性；A2组中A2-1小灶性水肿炎细胞浸润、 A2-2灶性坏死并纤维细胞增生、A2-3灶性坏死并纤维细胞增生，间质细胞增生、A2-4部分肾小管上皮轻度增生、A2-5灶性间质增生、A2-6灶性间质增生，并钙盐形成。(见附录图A1、A2) B组：B1-1 和B1-2均表现为间质增生炎细胞浸润部分肾小管扩张显著，后者较轻、B1-3 和B1-4均现灶性间质增生部分肾小

34、管扩张，后者较重、B1-5部分肾小管轻度变性、B1-6部分肾小管轻度变性，个别肾小管扩张及肾小管萎缩；B2-1部分肾小管间质增生肾小管扩张、B2-2和B2-3部分肾小管间质增生肾小管扩张，并部分泡空变性、B2-4部分肾小管上皮玻璃样变性、B2-5和B2-6部分肾小管显著扩张。(见附录图B1、B2)C组：C1-1个别肾小管玻璃样变性、C1-2间质增生慢性炎细胞浸润、C1-3间质增生慢性炎细胞浸润，部分肾小管扩张显著、C1-4和C1-5部分肾小管玻璃样变性；C2-1间质增生慢性炎细胞浸润部分上皮坏死脱落、C2-2 间质增生慢性炎细胞浸润部分上皮坏死脱落、 C2-3部分肾小管变性扩张、 C2-4部分

35、肾小管变性，个别肾小球充血增生。(见附录图C1、C2)D组：D1-1间质增生慢性炎细胞浸润，部分肾小管扩张显著、D1-2同上，并个别肾小管坏死、D1-3部分肾小管轻度变性、D1-4和D1-5部分间质变性坏死，慢性炎细胞浸润，间质增生；D2-1部分肾小管轻度增生、D2-2部分肾小管轻度增生，个别肾小管扩张、D2-3灶性间质增生并慢性炎细胞浸润。(见附录图D1、D2)从上述实验大鼠的肾脏病理结果来看，庆大霉素主要造成了大鼠肾脏肾小管的损害，由于肾气丸四个因素两个水平组中的各个大鼠的肾损害程度大都轻重不一，所以组间比较的意义较小。讨 论一、庆大霉素肾损伤模型与肾虚证模型的关系问题 本实验中实验大鼠在被制造成庆大霉素肾损模型后，出现了反应迟钝，自主活动减少，倦怠，精神萎靡，时扎堆，皮毛光泽度差，竖毛，饮食减少，小便增多，大便质稀等症状，虽然没有对其进行舌象和脉象的观测，但这些症状比较符合肾虚证表现，所以本实验中的肾损伤大鼠模型与实验大鼠肾虚证模型的相关性较高，提示下一步在研究防治、减小庆大霉素等药物的肾毒性时可从中医的肾虚证入手。 二、实验设计未设空白组和模型组问题 由于本人导师在长期主持的肾气丸相关实验研究课题中，对肾气丸抗实验性庆