盐酸小檗碱对糖尿病大鼠胸主动脉内皮损伤的保护作用

1、盐酸小檗碱对糖尿病大鼠胸主动脉内皮损伤的保护作用 张卓王春梅王春艳白岩王丽杰徐嘉琪陈立【摘要】目的讨论盐酸小檗碱对2型糖尿病血管内皮功能损伤的保护作用。方法采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射加高脂饲料喂养的方法建立2型糖尿病大鼠模型。将模型动物随机分为模型组、盐酸小檗碱组，另设正常对照组以及正常盐酸小檗碱组。用药组灌胃给药8后，做葡萄糖耐量实验；检测各组动物血清中空腹血糖(FPG)、总胆固醇(T)、甘油三酯(TG)、空腹血清胰岛素(FINS)的程度；检测血清中一氧化氮(N)和超氧化物歧化酶(SD)含量；免疫组织化学方法检测内皮型一氧化氮合酶eNS的表达。结果与模型组比较，盐酸小檗碱治疗组FPG、T、

2、TG程度明显下降(P0.05)，血清胰岛素程度有所升高，但无显著性差异P0.05；盐酸小檗碱能明显进步糖尿病大鼠胰岛素敏感指数，同时进步大鼠对腹腔注射葡萄糖的耐受力，改善胰岛素抵抗(均P0.01)；盐酸小檗碱可显著降低糖尿病组大鼠血清中N含量，进步SD程度(P0.05，P0.01)；显著降低胸主动脉组织eNS蛋白表达(P0.05)；而正常大鼠给予盐酸小檗碱治疗，上述指标未出现明显改变。结论盐酸小檗碱对2型糖尿病大鼠血管内皮损伤具有明显的保护作用。【关键词】盐酸小檗碱；糖尿病；血管内皮；一氧化氮；eNS【Keyrds】Berberine;Diabetes;Vasularendtheliu;N;e

3、NS糖尿病并发心血管事件如动脉粥样硬化AS、冠心病发生率是同年龄组非糖尿病患者的35倍，是糖尿病致死的主要原因之一1。内皮细胞功能障碍不仅是AS形成的早期表现，也是糖尿病血管病变的始动因素和主要病理变化。研究说明，高糖、高脂、胰岛素抵抗(IR)及氧化应激均可导致血管内皮受损，发生功能障碍2；其治疗策略应该是调整糖脂代谢紊乱，同时改善血管内皮功能损伤。但目前临床治疗糖尿病及其并发症的主要措施只是降低血糖或直接针对并发症治疗。盐酸小檗碱黄连素是我国传统中药，近年临床及动物试验均证明其具有确切的降血糖、降血脂、改善IR、抗过氧化等作用，对糖尿病具有显著的疗效35。但盐酸小檗碱是否可以减轻糖尿病引起的

4、血管内皮功能损伤，从而防治糖尿病心血管并发症尚未见报道。本实验旨在讨论盐酸小檗碱对2型糖尿病(T2D)血管内皮功能损伤的保护作用。1材料与方法1.1动物及饲料1.2药物及试剂盐酸小檗碱由东北制药厂赠予；链脲佐菌素STZ为Siga公司产品；葡萄糖、总胆固醇T、甘油三酯TG检测试剂盒均为北京北化康泰临床试剂产品；胰岛素放射免疫分析药盒购自天津九鼎生物技术；一氧化氮(N)和超氧化物歧化酶(SD)检测试剂盒购于南京建成生物技术；内皮型一氧化氮合酶(eNS)多克隆抗体购于美国Santaruz公司；免疫组化试剂盒购于福州迈新生物技术开发；其他试剂均为国产分析纯。1.3仪器1.4T2D动物模型的建立及分组4

5、60只istar雄性大鼠，随机分出正常对照组N和正常盐酸小檗碱组N+BER各10只，以普通饲料喂养；其余40只用于建立T2D大鼠模型，以高脂饲料喂养。大鼠高脂饲料喂养4后，腹腔注射小剂量STZ30g/kg2次，间隔1；2后检测空腹血糖(FPG)，以FPG7.8l/L作为判断模型成功的标准。将制备成功的T2D大鼠26只随机分为糖尿病模型组T2D和盐酸小檗碱治疗组T2D+BER。T2D+BER组和N+BER组以盐酸小檗碱100gkg-1d-1连续灌胃8，N组和T2D组给予等体积溶媒灌胃8。1.5血清中FPG、TG、T和空腹血清胰岛素(FINS)的检测大鼠治疗8后，禁食1216h，乌拉坦100g/k

6、g腹腔注射麻醉，腹主动脉取血并处死动物。每只大鼠约可以取血45l，别离血清，分装入Eppendrf管，-70冻存，用于检测FPG、TG、T和FINS。FPG、TG和T采用酶学方法检测。FINS由吉林大学第三医院核医学科采用放免法检测。1.6葡萄糖耐量实验葡萄糖耐量实验进展前，大鼠禁食1216h，自由饮水，腹腔注40%葡萄糖2g/kg体重，在葡萄糖注射前、注射后30、60、120in断尾取血，3500r/in离心15in，汲取血清。随后按照试剂盒说明书，利用葡萄糖氧化法测定血清中葡萄糖含量。1.7血清中N和SD的检测分别按照N和SD试剂盒说明书方法测定血清中N及SD的含量。1.8免疫组化方法检测

7、大鼠胸主动脉组织eNS蛋白表达1.9统计学方法实验数据用xs表示，统计分析采用SPSS13.0软件处理，多组间比较用单因素方差分析(neayANVA)方法，两组间比较采用最小显著差异(LSD)t检验。2结果2.1盐酸小檗碱对大鼠体重和生化指标的影响T2D组大鼠精神萎靡、毛发稀落欠光泽，糖尿病病症较重，与其他3组相比，体重略有升高，但无统计学差异(P0.05)。T2D+BER组大鼠经灌胃治疗8后，精神状态良好，毛发较润泽，糖尿病病症明显减轻。与N组比较，T2D组FPG、TG和T程度明显增高(P0.05)，血清胰岛素程度略有降低，胰岛素敏感指数(ISI)明显下降(P0.05)。盐酸小檗碱治疗8显著

8、降低了糖尿病大鼠血清FPG、TG和T程度(P0.05)，进步了ISI(P0.05)，而对正常大鼠血糖及血脂没有影响。见表1。表1各组大鼠体重及生化指标变化(略)转贴于论文联盟.ll.2.2盐酸小檗碱对大鼠腹腔注射葡萄糖耐量的影响如图1所示，N组、N+BER组及T2D+BER组在葡萄糖注射后30in血糖达峰值，在90in内逐渐下降；而T2D组血糖在60in达峰值，后缓慢下降，T2D组血糖程度与N组相比一直维持在较高程度。结果说明T2D大鼠对葡萄糖耐受力下降，出现IR，而盐酸小檗碱可明显进步机体对葡萄糖的耐受量，改善了IR。2.3盐酸小檗碱对血清N含量和SD活性的影响与N组比较，T2D组血清N含量

9、及SD活性明显降低(P0.01)，盐酸小檗碱治疗8后明显增加糖尿病大鼠血清N程度和SD活性(P0.05)，而对正常大鼠N程度及SD活性无明显影响。见表2。2.4盐酸小檗碱对大鼠胸主动脉组织eNS蛋白表达的影响如图2B和图2所示，N组和N+BER组大鼠胸主动脉内膜区主要是内皮细胞胞质可见连续线状棕黄色阳性染色，即eNS阳性表达；而T2D组血管内膜区棕黄色着色明显减弱，局部出现未表达区图2D。盐酸小檗碱治疗组与T2D组比较，eNS表达明显增加图2E。表2盐酸小檗碱对各组大鼠血清N、SD程度的影响(略)3讨论血管内皮损伤是糖尿病血管并发症的主要发病机制之一。高血糖、高血脂、高胰岛素血症均会使氧化应激

10、增加，氧自由基产生增多，造成血管内皮细胞损伤2。因此，要想维持T2D患者血管内皮的正常功能，同时改善患者的糖、脂、胰岛素代谢是非常重要的。本实验显示，盐酸小檗碱可显著降低高脂饮食结合小剂量STZ诱导的T2D大鼠FPG、TG、T程度，并进步ISI，改善IR，有效遏制了导致内皮细胞损伤的始动环节。氧化应激是糖尿病导致内皮损伤的主要原因之一。糖毒性，脂毒性等引起的氧化应激使超氧阴离子等活性氧产生增多。超氧阴离子可迅速与N发生反响，将其氧化生成过氧化亚硝基，而导致N灭活。过氧化亚硝基也可以将eNS的辅酶BH4氧化为BH2，降低BH4与BH2比例，从而使eNS脱耦联，失去催化生成N的才能，反而催化超氧阴离子的产生，造成恶性循环8。SD是体内去除自由基的主要酶系之一，可将超氧阴离子迅速氧化为2和H22，有效去除体内的氧自由基，减轻组织损伤。糖尿病高血糖可与SD活性中心的赖氨酸结合，产生糖基化反响，使SD活性下降，去除自由基才能下降9。本实验结果