血小板血型系统培训课件

1、教学内容血小板血型抗原及其抗体血小板血型检测技术血小板血型的临床应用适合型血小板输注10/5/20221血小板血型系统教学内容血小板血型抗原及其抗体10/3/20221血小板血型教学目的重点掌握：血小板输注无效掌握：血小板血型检测技术熟悉：血小板血型抗原及其抗体 血小板血型的临床应用了解：适合型血小板输注10/5/20222血小板血型系统教学目的重点掌握：血小板输注无效10/3/20222血小板血一、血小板血型抗原及其抗体10/5/20223血小板血型系统一、血小板血型抗原及其抗体10/3/20223血小板血型系（一）血小板血型抗原定义: 指用同种免疫抗体检测出 的血小板表面抗原分类：血小板相

2、关抗原 血小板特异性抗原10/5/20224血小板血型系统（一）血小板血型抗原定义: 指用同种免疫抗体检测出 11. 血小板相关抗原(platelet-associated antigen)定义：血小板表面存在的与其他细胞或 组织共有的抗原分类：红细胞血型系统相关抗原(ABO等） 组织相容性抗原（HLA）10/5/20225血小板血型系统1. 血小板相关抗原(platelet-associate血小板上的红细胞血型抗原存在ABO、Lewis、I和P抗原缺失Rh、Duffy、Kell、Kidd和Lutheran系统的抗原10/5/20226血小板血型系统血小板上的红细胞血型抗原10/3/2022

3、6血小板血型系统血小板HLA系统血型抗原Chromosome 6DPDQDRBCAClass IIClass I存在HLA-A和B位点的抗原HLA-C位点的抗原未发现HLA-DP、DQ和DR等位点抗原。但经细胞因子刺激，可产生HLA-DR抗原 10/5/20227血小板血型系统血小板HLA系统血型抗原DPDQDRBCAClass IIC2. 血小板特异性抗原即人类血小板抗原 （human platelet antigen，HPA）血小板特有的，其他组织细胞没有表现血小板独特的遗传多态性均存在于血小板膜糖蛋白（GP）上10/5/20228血小板血型系统2. 血小板特异性抗原即人类血小板抗原10/

4、3/20228血10/5/20229血小板血型系统10/3/20229血小板血型系统HPA的命名1990年国际血液学标准化委员会(ICSH)/国际输血协会（ISBT）血小板血清学研讨会对血小板抗原系统进行国际命名2003年国际输血协会（ISBT）和国际血栓和止血协会（ISTH）建立的血小板命名委员会（PNC） 10/5/202210血小板血型系统HPA的命名1990年国际血液学标准化委员会(ICSH)/国命名规定在系统前冠以HPA按发现顺序用数字编号只有在2个对偶抗原全被检测出来后，才能被称为系统，对偶抗原按其在人群中频率由高到低，用字母命名，高的为a，低的为b尚未发现对偶抗原的，给予暂时命名

5、，在等位基因数字后加后缀w表示10/5/202211血小板血型系统命名规定在系统前冠以HPA10/3/202211血小板血型系10/5/202212血小板血型系统10/3/202212血小板血型系统（二）血小板抗体产生机理：机体对血小板表面或相关抗原免疫临床分类：血循环里的游离抗体 结合于血小板上的抗体(PAIgG)血型学分类：血小板同种抗体 自身抗体见于：血小板输注治疗无效 同种免疫血小板减少症 自身免疫血小板减少症 药物、病毒、细菌引起的血小板减少症10/5/202213血小板血型系统（二）血小板抗体产生机理：机体对血小板表面或相关抗原免疫10血小板表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输注血

6、小板的患者约50%以上产生血小板同种抗体据报道HLA抗体占多数，约80%左右HPA抗体单独存在的频率较低（2%-3%）HPA抗体与HLA抗体共存（18%）左右必须首先识别并去除血清中存在的HLA抗体，才能分析血小板抗体的特异性（二）血小板抗体10/5/202214血小板血型系统血小板表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输注血小板的患者约5鉴别有无HLA抗体存在的方法 淋巴细胞毒试验 混合淋巴细胞培养除去血小板表面HLA抗原方法 氯喹或酸溶液在0处理血小板10/5/202215血小板血型系统10/3/202215血小板血型系统二、血小板血型检测技术血清学检测分子生物学检测 10/5/202216血

7、小板血型系统二、血小板血型检测技术血清学检测10/3/202216血小板（一）血清学技术 血小板免疫荧光试验 简易致敏红细胞血小板血清学试验 单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验 改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验 流式细胞仪检测技术 微柱凝胶血小板定型试验当HLA类抗原在血小板定型时出现强表达时，要用氯喹或酸进行预处理，去除血小板上的HLA抗原10/5/202217血小板血型系统（一）血清学技术 血小板免疫荧光试验10/3/202217血1. 血小板免疫荧光试验(platelet immunofluorescence test, PIFT)10/5/202218血小板血型系统1. 血小板免疫荧光试

8、验(platelet immunof原理 用多聚甲醛（PFA）或氯喹预处理的血小板，加入异硫氰酸荧光标记的抗血小板抗体，通过流式细胞仪或荧光显微镜检测血小板抗原抗体结合情况10/5/202219血小板血型系统原理 用多聚甲醛（PFA）或氯喹预处理的10/5/202220血小板血型系统10/3/202220血小板血型系统临床应用同种异体抗体与血小板的反应活性检测血小板配型10/5/202221血小板血型系统临床应用10/3/202221血小板血型系统方法学评价 优点荧光信号只评估血小板，避免了由细胞碎片引起的非特异性反应多特异性的抗球蛋白试剂可以识别IgG、IgA和IgM抗体最可靠的方法之一 缺

9、点对反应不敏感。血小板至少要结合1 000个IgG分子才能得到阳性结果10/5/202222血小板血型系统方法学评价 优点10/3/202222血小板血型系统2. 简易致敏红细胞血小板血清学试验（Simplified Sensitized Erythrocyte Platelet Serology Assay, SSEPA）10/5/202223血小板血型系统2. 简易致敏红细胞血小板血清学试验（Simplified原理将血小板抗原固定在U型孔壁上，与被检血清反应后洗净，以抗IgG（或抗IgM)指示细胞反应结果如果血小板上结合了血小板抗体，则致敏在指示细胞上的抗IgG（抗IgM）与血小板抗体结

10、合，指示细胞向孔底移动被组织，广泛覆盖在固定的血小板单层上，为阳性结果若血小板上无抗体，则指示细胞向孔底移动不受阻，聚集在孔底中央，呈扣状，为阴性结果10/5/202224血小板血型系统原理将血小板抗原固定在U型孔壁上，与被检血清反应后洗净，以抗阳性结果阴性结果10/5/202225血小板血型系统阳性结果阴性结果10/3/202225血小板血型系统结果图示10/5/202226血小板血型系统结果图示10/3/202226血小板血型系统方法直接测定法：测定血小板表面结合的血小板抗体间接测定法：测定血清内的血小板抗体交叉配血试验：选择配合的血小板供体10/5/202227血小板血型系统方法直接测定

11、法：测定血小板表面结合的血小板抗体10/3/20临床应用血小板抗体鉴定血小板血型研究开展母婴血小板血型及多种血液病的研究适合性血小板输注10/5/202228血小板血型系统临床应用血小板抗体鉴定10/3/202228血小板血型系统方法学评价简单、微量，重复性、特异性和敏感性均较理想应用范围广，可用于检测血小板抗原抗体以及交叉配合试验；可开展大量样本的检测工作及研究工作固相化的血小板及指示细胞能长期保存备用不需要特殊的仪器设备，易于推广10/5/202229血小板血型系统方法学评价简单、微量，重复性、特异性和敏感性均较理想10/33. 单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验(Monoclonal a

12、ntibody-specific immobilization of platelet antigens assay, MAIPA)10/5/202230血小板血型系统3. 单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验(Monoclon原理在血小板上先结合人的同种抗体，然后再结合鼠抗人血小板抗体，裂解血小板后，把裂解产物移至包被的羊抗鼠IgG微孔板内，通过辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG检测人的血小板同种抗体10/5/202231血小板血型系统原理在血小板上先结合人的同种抗体，然后再结合鼠抗人血小板抗体单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验10/5/202232血小板血型系统单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验

13、10/3/202232血小方法学评价优点：敏感性强。可检测出被污染的抗体、微量抗原（HPA-5）、低频率抗原。缺点：在未知抗原检测时必须使用一组单克隆抗体，而又不能对所有糖蛋白具有活性 如果人抗体与单克隆抗体和同一个抗原决定簇反应，就会引起假阴性结果10/5/202233血小板血型系统方法学评价优点：敏感性强。可检测出被污染的抗体、微量抗原（H4. 改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验(Modified antigen capture ELISA, MACE)10/5/202234血小板血型系统4. 改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验(Modified a原理血小板与抗体致敏，将形成的抗原-抗体复合物分

14、别加入包被有抗GP Ib、GP IIb、GP IIIa、GP IX、HLA等鼠抗人单克隆抗体的微孔内，再加入酶标羊抗人IgG底物显色，终止反应后测405nm吸光度10/5/202235血小板血型系统原理血小板与抗体致敏，将形成的抗原-抗体复合物分别加入包被有方法学评价及应用优点：特异性较高缺点：非特异的物质和某些血清中的IgG结合非常牢固应用：对于已经去除了HPA-1a的大量标本的定型常使用竞争性ELISA技术10/5/202236血小板血型系统方法学评价及应用10/3/202236血小板血型系统5. 流式细胞仪检测技术(Flow cytometry, FCM)10/5/202237血小板血型

15、系统5. 流式细胞仪检测技术(Flow cytometry, 原理免疫荧光标记技术，抗原抗体结合同一激光光源激发得到特异荧光色细胞体积、结构、荧光种类及性质等多种参数分析10/5/202238血小板血型系统原理免疫荧光标记技术，抗原抗体结合10/3/202238血小FCM检测血小板相关抗体10/5/202239血小板血型系统FCM检测血小板相关抗体10/3/202239血小板血型系统6. 微柱凝胶血小板定型试验（microcolume gel test for platelet typing）10/5/202240血小板血型系统6. 微柱凝胶血小板定型试验（microcolume ge原理向微

16、柱凝胶中依次加入待检血清、血小板、指示红细胞阳性结果：若待检血清中存在血小板抗体，则形成血小板-血小板抗体-抗IgG-指示红细胞四位一体的免疫复合物不能通过凝胶柱阴性结果：若待检血清无血小板抗体，则不能形成免疫复合物，指示红细胞离心后沉于柱底10/5/202241血小板血型系统原理向微柱凝胶中依次加入待检血清、血小板、指示红细胞10/310/5/202242血小板血型系统10/3/202242血小板血型系统10/5/202243血小板血型系统10/3/202243血小板血型系统10/5/202244血小板血型系统10/3/202244血小板血型系统10/5/202245血小板血型系统10/3/

17、202245血小板血型系统10/5/202246血小板血型系统10/3/202246血小板血型系统方法学评价方法快速、敏感、操作简单操作标准化（试剂、设备、工作程序）标本试剂用量少结果判断客观准确结果保存时间长（数天或数周）安全：减少医源性传播10/5/202247血小板血型系统方法学评价方法快速、敏感、操作简单10/3/202247血小（二）分子生物学检测22个HPA抗原中除HPA-14bw基因外，其它所有HPA基因多态性都表现为SNP（单核苷酸多态性），因此检测SNP的方法基本上适用于HPA基因分型 共同特点：以聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）为基

18、础，所不同的只是在于PCR引物设计以及检测PCR产物的方法10/5/202248血小板血型系统（二）分子生物学检测22个HPA抗原中除HPA-14bw基因方法PCR-SSP: 首选，最简单常用，快速经济PCR-RFLP: 繁琐，无法对HPA-4基因分型PCR-ASO: 繁琐，不太容易判断结果SSCP： 不适合常规HPA检查DNA序列分析法: 操作复杂，成本较高10/5/202249血小板血型系统方法PCR-SSP: 首选，最简单常用，快速经济10/10/5/202250血小板血型系统10/3/202250血小板血型系统（三）血清学检测与分子生物学检测的关系 血清学检测简单、快速成本低主要用于血

19、小板抗体检测和交叉试验血型抗原的血清学定型是基因分型的前提10/5/202251血小板血型系统（三）血清学检测与分子生物学检测的关系 血清学检测10/三、血清学检测与分子生物学检测的关系 分子生物学检测结果准确、可靠不需要特异性抗体的血小板基因组DNA的来源：可为尿沉淀物、口腔黏膜细胞和羊水细胞主要用于血小板血型抗原分型10/5/202252血小板血型系统三、血清学检测与分子生物学检测的关系 分子生物学检测10三、血小板血型的临床应用 血小板输注无效 输血后紫癜 新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 特发性血小板减少性紫癜10/5/202253血小板血型系统三、血小板血型的临床应用 血小板输注无效

20、10/3/20225 （一）血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR)10/5/202254血小板血型系统 （一）血小板输注无效(platelet transfus1. 定义指患者在输注合适剂量的血小板后没有产生“适当的反应”，即连续两次输注足量随机供者血小板后，没有达到合适的校正血小板计数增加值（CCI），临床出血表现亦未见改善长期依靠血小板支持治疗这是临床输血中颇为棘手的问题10/5/202255血小板血型系统1. 定义指患者在输注合适剂量的血小板后没有产生“适当的反应2. 原因免疫因素（17.5%） ： HLA抗体、HPA抗体、AB

21、O抗体、自身抗体、药物抗体、循环免疫复合物等非免疫因素（67.5%） ：发热、败血症、脾肿大、骨髓移植、DIC、静注抗菌素等；血小板质量非免疫+免疫因素（15%）10/5/202256血小板血型系统2. 原因免疫因素（17.5%） ： HLA抗体、HPA抗体3. 判定指标临床: 出血趋势不减轻，或出现输血性紫癜，出血加重 血小板计数较输注前不仅不增高，有时还会下降校正血小板计数增加值 (corrected count increment, CCI) CCI = (输注后血小板计数- 输注前血小板计数) 体表面积(m2)输入血小板总数（1011L） PTR判定标准: 1 小时 CCI 7.5 1

22、09L 20-24小时 CCI 4.5 109L血小板回收率 (percentage platelet recovery, PPR) PPR = (输注后血小板数输注前血小板数)血容量(L) 输入血小板总数2/3 PTR判定标准： 1小时 PPR30% 20-24小时PPR 20%10/5/202257血小板血型系统3. 判定指标临床: 出血趋势不减轻，或出现输血性紫癜，出血4. 预防措施 选用单一供者血小板（机釆血小板） 自身血小板输注 去除血小板中白细胞：WBC 5 106/L 去除血小板表面抗原：用氯喹或枸橼酸解离技术去除HLA抗原 紫外线照射灭活抗原提呈细胞（antigen prese

23、nting cell, APC）功能10/5/202258血小板血型系统4. 预防措施 选用单一供者血小板（机釆血小板）10/3/25. 处理流程 首先要考虑血小板质量问题，可输注ABO 同型的非库存血小板，以排除ABO系统的抗体或血小板质量因素 若有发热、感染、DIC 等导致血小板消耗增加的因素存在，积极治疗原发病，并增加输注剂量 若有同种抗体存在，则挑选HLA、HPA 相合的供者血小板，或使用激素、免疫抑制剂或静脉注射免疫球蛋白 若病人持续输注血小板效果不佳而又找不到明确的原因，则应考虑药物性抗体的存在，停用或换用相关药物10/5/202259血小板血型系统5. 处理流程 首先要考虑血小板

24、质量问题，可输注ABO6. 处理 供者选择：ABO和Rh相合 HLA相合 HPA相合大量静脉注射免疫球蛋白（IVIG）血浆置换免疫抑制剂抗纤溶药物等10/5/202260血小板血型系统6. 处理 供者选择：ABO和Rh相合10/3/202260病 因 处 理免疫性因素 HLA 同种抗体 输注HLA抗原配合的血小板或交叉配合试验相合的血小板血小板特异性抗体 输注血小板特异性抗原（HPA）配合的血小板或交叉配合试验相合的血小板自身抗体 IVIG、皮质类固醇、脾切除术药物（如肝素） 停用诱发药物 非免疫性因素脾肿大 治疗病因 药物（如两性霉素B） 若可能时，停用诱发药物 消耗增加 治疗病因 败血症

25、治疗病因 PTR的病因及处理10/5/202261血小板血型系统病 因 处 理免疫性因素 HLA 同种抗体 输注H（二）输血后紫癜(post-transfusion purpura, PTP)10/5/202262血小板血型系统（二）输血后紫癜(post-transfusion pur1. 定义及临床表现 定义指输注全血或血小板后引起的急性、暂时性的同种免疫性血小板减少综合征 临床表现在输血后1周左右突然发生皮肤瘀点、瘀斑和黏膜出血，严重者有内脏和颅内出血大多数的患者是女性，有输血或妊娠史10/5/202263血小板血型系统1. 定义及临床表现 定义10/3/202263血小板2. 病因出现血

26、小板特异性同种抗体常见的是抗HPA-1a通常发生于HPA-1a阴性患者，欧美多见10/5/202264血小板血型系统2. 病因出现血小板特异性同种抗体10/3/202264血小3. 预防和治疗措施血小板抗体筛选血小板交叉配血试验，选择配合型的血小板供体输注免疫抑制剂血浆置换大量静脉注射免疫球蛋白10/5/202265血小板血型系统3. 预防和治疗措施血小板抗体筛选10/3/202265血小（三）新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(neonatal alloimmune thrombocytopenic purpura, NAITP)10/5/202266血小板血型系统（三）新生儿同种免疫性血小板

27、减少性紫癜(neonatal1. 定义妊娠期间由于母婴间血小板血型不合，胎儿血小板抗原刺激母体产生血小板相关抗体，通过胎盘进入胎儿体内，导致胎儿和新生儿血小板减少常见，病死率较高，约13%10/5/202267血小板血型系统1. 定义妊娠期间由于母婴间血小板血型不合，胎儿血小板抗原刺10/5/202268血小板血型系统10/3/202268血小板血型系统 内脏和中枢神经系统出血 脑水肿 出生时有严重而广泛的瘀点和瘀斑 出生时正常，2-3天后出现血小板显著减少2. 临床症状10/5/202269血小板血型系统 2. 临床症状10/3/202269血小板血型系统3. 实验室检查血小板抗原的鉴定血小

28、板抗体的检查指 标HDNNAITP母细胞表面缺乏常见抗原红细胞抗原鉴定血小板抗原鉴定抗体特异性红细胞抗体筛选血小板抗体筛选婴儿血细胞包被有IgG直接抗人球蛋白试验血小板相关Ig检测低频率抗原抗体母血清+父红细胞母血清+父血小板10/5/202270血小板血型系统3. 实验室检查血小板抗原的鉴定指 标HDNNAITP母细 治疗患者输入母体中同种抗体无不良反应性的血小板对患者进行换血治疗给新生儿静脉内注射免疫球蛋白 预防随时监测母亲血清中血小板抗体效价高时可对母亲作血浆置换治疗，降低母亲血浆中抗体的含量4. 治疗及预防10/5/202271血小板血型系统 治疗4. 治疗及预防10/3/202271血小板血型系统（四）特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP)10/5/202272血小板血型系统（四）特发性血小板减少性紫癜(idiopathic th1. 定义及临床表现定义