骨髓细胞学检验培训课件

1、骨髓细胞学检验骨髓细胞学检验 目的与要求掌握骨髓细胞学检测的临床应用；有核细胞增生程度分级；血细胞发育的一般规律 。熟悉血细胞化学染色（POX、NAP、NAE、PAS、铁染色）的临床意义，免疫学分型、遗传学分析在血液病中的应用。了解各系统血细胞的正常形态学特征；低倍镜、高倍镜、油镜下骨髓的检查内容。2骨髓细胞学检验 目的与要求2骨髓细胞学检验 教学内容骨髓细胞学检测的临床应用骨髓细胞学检测的方法和内容 血细胞成熟过程中形态演变的一般规律 血细胞的正常形态学特征 血细胞的细胞化学染色 细胞免疫学分型细胞遗传学分析3骨髓细胞学检验 教学内容骨髓细胞学检测的临床应用3骨髓细胞一.骨髓细胞形态学检测的

2、临床应用4骨髓细胞学检验一.骨髓细胞形态学检测的临床应用4骨髓细胞学检验2.血液系统疾病的常见体征发热:是最常见的临床表现之一黄疸:血清胆红素增高而使巩膜、皮肤和粘膜发生 黄染淋巴结肿大:全身或局部肝脾肿大:仰卧位或侧卧位在肋缘下能触及的肝脾贫血:血细胞分析的Hb、RBC 或HCT低于正常值出血倾向:eg.皮肤和粘膜自发性出血或轻微创伤后 凝血时间延长骨痛或关节痛:白血病细胞浸润刺激骨膜5骨髓细胞学检验2.血液系统疾病的常见体征5骨髓细胞学检验诊断造血系统疾病 eg.白血病、恶组、 MM、AA、巨幼贫等 以及评价疗效和判断预后辅助诊断某些疾病 eg.骨髓转移癌、淋巴瘤浸润、MDS、增生性疾病、

3、缺铁贫、溶血性贫血、脾亢、ITP 等提高某些疾病的诊断率 eg.疟原虫、黑热病原虫等2.临床应用6骨髓细胞学检验诊断造血系统疾病2.临床应用6骨髓细胞学检验外周血细胞成分及形态异常不明原因发热，肝、脾、淋巴结肿大 骨质破坏、肾功能异常、紫癜等化疗后疗效观察其他：禁忌症：出血性疾病、晚期妊娠 3. 适应症和禁忌症7骨髓细胞学检验外周血细胞成分及形态异常3. 适应症和禁忌症7骨髓细胞学检 二.骨髓细胞学检测的方法和内容8骨髓细胞学检验8骨髓细胞学检验1.肉眼观察 取材、 制片、 染色9骨髓细胞学检验1.肉眼观察 9骨髓细胞学检验2.低倍镜检查 判断骨髓增生程度 有核细胞与成熟红细胞的比例，骨髓小粒

4、的结构，五级分类法 计数巨核细胞 低倍镜浏览全片，尤其是片头尾部和边缘，计数全片的巨核细胞数，ITP观察有无特殊细胞及其他 eg.骨髓转移癌细胞、异常组织细胞等10骨髓细胞学检验2.低倍镜检查 判断骨髓增生程度 10骨髓细胞学检验2.油镜检查 有核细胞分类计数 连续计数 200个有核细胞，并按细胞的不同系列和发育阶段的形态特征进行分类，累计粒细胞总数和幼红细胞总数，计算粒红比值观察细胞形态 观察包括粒、单、淋、巨核系及成熟红细胞的形态有无异常，估计血小板数量11骨髓细胞学检验2.油镜检查 有核细胞分类计数 连续计数 200个有核细 三.血细胞发育过程中形态演变的一般规律 12骨髓细胞学检验 1

5、2骨髓细胞学检验 血细胞起源：造血干细胞造血干细胞特点： 具有高度自我更新的能力 具有多向分化的能力干细胞的增殖分化的影响因素： 造血微环境、造血细胞生长因子、 白细胞介素、神经和体液因子 1.血细胞的生成和发育13骨髓细胞学检验 1.血细胞的生成和发育13骨髓细胞学检验 图1 血细胞的发育过程14骨髓细胞学检验14骨髓细胞学检验 2.血细胞发育过程形态学演变规律 细胞体积：由大变小（巨核系细胞除外）细胞质：量：少多 ；染色：由深蓝浅染 ；颗粒：无颗粒嗜天青颗粒特异性颗粒细胞核：大小：大小（巨核细胞除外） 染色质：细致疏松粗躁、致密或凝集成块，着色浅蓝,核仁：有无, 2.2.4 核膜：不明显明

6、显细胞核/细胞质比例：大小(巨核系细胞除外) 15骨髓细胞学检验 2.血细胞发育过程形态学演变规律 细胞体积：由大变小（巨 四.血细胞的正常形态学特征16骨髓细胞学检验 16骨髓细胞学检验 原红细胞（normoblast）:圆形或椭圆形，细胞边缘可见半球状或瘤状突起。 核染色质呈细砂状或细粒状，核仁1-3个,胞质深蓝色，有核周淡染区，无颗粒。 早幼红细胞（basophilic normo-blast）：染色质凝集成小块状,核仁消失。胞质不透明,深蓝色，有核周淡染区，不含颗粒。 4.1 红细胞系统17骨髓细胞学检验 4.1 红细胞系统17骨髓细胞学检验 中幼红细胞（polychromatic n

7、ormo-blast）：染色质凝集成团块状或粗索状，似碎砚状排列，胞质量较多，因内含血红蛋白逐渐增多，呈不同程度的嗜多色性。 晚幼红细胞（ortho-chromatic normo-blast ）：核染色质凝聚成大块状或固缩成团，呈紫褐色或紫黑色，胞质量多，呈均匀的淡红色或灰紫色。4.1 红细胞系统18骨髓细胞学检验 中幼红细胞（polychromatic normo-b 原粒细胞（myeloblast）：圆形或椭圆形，染色质呈淡紫色红色细粒状，核仁2-5个，胞质量少，透明天蓝色，不含颗粒或有少量颗粒。 早幼粒细胞（promyeocyte）：胞体较原粒大，染色质开始聚集呈粗网粒状，核仁可见或消

8、失，胞质内含有大小不均的紫红色非特异性嗜天青颗粒。 4.2 粒细胞系统19骨髓细胞学检验 中幼粒细胞（myelocyte）：圆形，胞核内侧缘开始变扁平，或稍呈凹陷，染色质凝聚成粗索状或小块状，核仁消失，胞质量多，根据胞质特异性颗粒分为:a.中性中幼粒细胞,b.嗜酸性中幼粒细胞,c.嗜碱性中幼粒细胞。晚幼粒细胞（metamyelocyte）：胞核明显凹陷呈肾形，凹陷程度一般不超过假设核直径的一半,核染质粗糙呈粗块状，紧密,胞质量多，呈淡红色。4.2 粒细胞系统20骨髓细胞学检验中幼粒细胞（myelocyte）：圆形，胞核内侧缘开始变扁平 杆状核粒细胞(stab granulocyte)：胞核狭长

9、，弯曲呈带状，两端钝圆。核染色质粗糙呈块状，染深紫红色。 分叶核粒细胞(segmented granulocyte) ：胞核分叶状，常分为2-5叶，叶与叶之间有细丝相连或完全断开，核染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。4.2 粒细胞系统21骨髓细胞学检验 杆状核粒细胞(stab granulocyte)：胞核 嗜碱性粒细胞嗜酸性粒细胞22骨髓细胞学检验 原淋巴细胞：圆形或椭圆形，核圆形或椭圆形，偏位。核染色质细致颗粒状，较原粒细胞稍粗，核仁1-2个，胞质量少，呈透明天蓝色，无颗粒。 幼淋巴细胞：圆形或椭圆形，核圆形或椭圆形，有切迹，染色质较致密粗糙，核仁模糊或消失，胞质量较少，淡蓝色，一般无颗粒

10、，或有嗜天青颗粒。4.3 淋巴细胞系统原淋细胞23骨髓细胞学检验 4. 淋巴细胞： 大淋巴细胞：直径13-18m。胞核圆形或椭圆形，偏于一侧。染色质常呈块状，紫红色。胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而稀疏的嗜天青颗粒。 小淋巴细胞：直径6-10m。胞核圆形或椭圆形，或有切迹，染色质粗糙致密呈大块状，深紫红色,胞质量极少，似裸核，无颗粒。淋巴细胞24骨髓细胞学检验 淋巴细胞：淋巴细胞24骨髓细胞学检验 原浆细胞(plasmablast)：圆形或椭圆形，胞核圆形，常偏位。核染色质呈粗颗粒网状，紫红色。核仁2-5个。胞质量多，呈灰蓝色，不透明，有核周淡染区，不含颗粒。 幼浆细胞(proplasma

11、cyte)：椭圆形，胞核圆形，偏位。核染色质开始聚集，可呈车轮状排列，核仁基本消失。胞质量多，呈不透明灰蓝色，有核周淡染区，有时可见空泡或少数嗜天青颗粒。 4.4 浆细胞系统原始浆细胞25骨髓细胞学检验 4.4 浆细胞系统原始浆细胞25骨髓细胞学检验浆细胞(plasmacyte)：圆形或卵圆形，直径8-20m。胞核圆形，偏位。核染色质凝聚成块，深染，排列呈车轮状。胞质丰富，呈不透明深蓝色或蓝紫色，有明显的核周淡染区，常见小空泡，偶见少数嗜天青颗粒。成熟浆细胞26骨髓细胞学检验浆细胞(plasmacyte)：圆形或卵圆形，直径8-20 4.5 单核细胞系统 原单核细胞(monoblast)：圆形

12、或椭圆形，核较大，圆形或椭圆形。染色质纤细疏松呈网状，淡紫红色。核仁1-3个，大而清楚。胞质丰富，浅灰蓝色，半透明如毛玻璃样，边缘不整齐，可见伪足状突起，无颗粒。 原单细胞27骨髓细胞学检验 4.5 单核细胞系统 幼单核细胞(promonocyte)：圆形或不规则形，胞核圆形或不规则形，有凹陷、切迹、扭曲或折叠。染色质较粗，疏松丝网状，淡紫红色。核仁模糊或消失。胞质量多，呈灰蓝色，边缘可有伪足突出，浆内可见许多细小、分布均匀嗜天青颗粒。 单核细胞(monocyte)：圆形或不规则形，边缘常见伪足突出。胞核不规则形，呈肾形、马蹄形、笔架形、“S”形等，并有明显扭曲折叠。染色质疏松细致，呈淡紫红色

13、丝网状。胞质丰富，淡灰蓝色或淡粉红色，可见细小细尘样淡紫红色颗粒。 成熟单核细胞28骨髓细胞学检验 原巨核细胞(megakaryoblast)：圆形或椭圆形，胞体较大，胞核大，圆形或椭圆形。染色质呈深紫红色，粗粒状，可见核仁2-3个，胞质量较少，呈不透明深蓝色，边缘常有不规则突起。 幼巨核细胞(promegakayrocyte)：圆形或不规则形，胞体明显增大，胞核开始分叶，核形不规则。染色质凝聚呈粗颗粒或小块状，核仁模糊或消失。4.6 巨核细胞系统原幼巨核细胞29骨髓细胞学检验4.6 巨核细胞系统原幼巨核细胞29骨髓细胞学检验 颗粒型巨核细胞(granular megakayrocyte)：胞

14、体明显增大，外形不规则。胞核高度分叶，染色质粗糙，排列致密呈团块状，染深紫红色。胞质极丰富，呈淡紫红色，其内充满大量细小紫红色颗粒，但无血小板形成。颗粒巨核细胞30骨髓细胞学检验 颗粒型巨核细胞(granular megakayrocy产血小板型巨核细胞(thronbocytogenousmegaka-yrocyte)：胞质内有血小板形成，胞质周缘部分已裂解成血小板，其内侧和外侧常有成簇的血小板出现。巨核细胞裸核(naked nucleous)：产血小板型巨核细胞的胞质裂解成血小板完全脱落后，仅剩细胞核时。31骨髓细胞学检验产血小板型巨核细胞(thronbocytogenousmeg 五.血细

15、胞的细胞化学染色32骨髓细胞学检验 32骨髓细胞学检验 1.过氧化物酶染色 原理：血细胞内的过氧化物酶能分解底物中的H2O2，释出新生态的氧，使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒，主要分布于细胞浆。 临床意义:急性白血病的鉴别诊断，急粒为阳性，急淋为阴性33骨髓细胞学检验 1.过氧化物酶染色 原理图 过氧化物酶染色34骨髓细胞学检验图 过氧化物酶染色34骨髓细胞学检验2.苏丹黑B染色 原理：苏丹黑B是一种脂溶性染料，可溶于细胞质的脂类物质，使脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。 临床意义:同过氧化物酶染色。35骨髓细胞学检验2.苏丹黑B染色35骨髓细胞学检验3.氯化醋

16、酸AS-D萘酚酯酶染色原理：氯化醋酸AS-D萘酚酯酶又称特异性酯酶，能将基质中的氯化醋酸AS-D萘酚水解AS-D萘酚+重氮盐GBC不溶性蓝色沉淀（细胞质）。结果：粒系原粒-/弱阳性，早幼粒以后细胞强阳性；淋巴细胞、单核细胞及幼红细胞阴性。临床意义：鉴别急性粒细胞白血病（阳性）急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病（阴性）36骨髓细胞学检验3.氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色36骨髓细胞学检验4.-醋酸萘酚酯酶染色原理：-醋酸萘酚酯酶又称非特异性酯酶，能将基质中的-醋酸萘酚水解-萘酚+重氮染料棕褐色沉淀。结果：原单-/弱阳性，幼单和单核细胞阳性，阳性反应可被NaF抑制；粒系细胞阴性或弱阳性，阳性反应

17、不被NaF抑制。临床意义：鉴别急性粒细胞白血病急性单核细胞白血病，前者阴性或弱阳性，阳性反应不被NaF抑制，后者强阳性，阳性反应可被NaF抑制。37骨髓细胞学检验4.-醋酸萘酚酯酶染色原理：-醋酸萘酚酯酶又称非特异性酯 急性白血病组化染色程序 外周血或骨髓发现白血病细胞 过氧化物酶染色（阴性） 急性淋巴细胞白血病或 急性髓细胞白血病-M7 （阳性） 氯化醋酸AS-D萘酚酯酶 -醋酸萘酚酯酶 阳性 阴性 急性粒细胞白血病（M1-3) 阴性（弱阳性） 阳性 急性单核细胞白血病(M5) 阳性 阳性 急性粒单细胞白血病(M4) 备注：急性单核细胞白血病-醋酸萘酚酯酶阳性被NAF抑制，急性粒细胞白血病弱

18、阳性时，阳性反应不被NAF抑制。38骨髓细胞学检验 急性白血病组化染色程序 外周血 5.酸性磷酸酶染色原理：硫化铅法血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下将基质中-甘油磷酸钠水解磷酸钠+硝酸铅磷酸铅+硫化铵棕黑色硫化铅沉淀（细胞质）临床意义：毛细胞白血病ACP阳性，且不被L-酒石酸抑制；鉴别T淋巴细胞（阳性）B淋巴细胞（阴性）；鉴别Gaucher细胞（阳性）Niemann-Pick细胞（阴性）39骨髓细胞学检验 5.酸性磷酸酶染色39骨髓细胞学检验6.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）原理：偶氮偶联法血细胞内的碱性磷酸酶在pH 9.4-9.6时，使基质中的-磷酸萘酚钠水解-萘酚+重氮盐灰黑色沉淀（细

19、胞质）钙-钴法碱性磷酸酶在硷性条件下使-甘油磷酸钠水解磷酸钠+硝酸钙、硝酸钴、硫化铵棕黑色硫化钴（细胞质）40骨髓细胞学检验6.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）40骨髓细胞学检验结果计算：观察100个成熟中性粒细胞，计算阳性百分率，再将阳性细胞按反应强度分级（-，1+，2+，3+，4+），最后将阳性百分率乘以级数，然后相加，得到积分。正常参考值：NAP 阳性率10%-40%；积分40-80。临床意义:鉴别感染性疾病（活性明显增高）；鉴别CML（活性明显减低）和类白；鉴别AA（活性增高）和PNH （活性减低）；鉴别急粒和急淋41骨髓细胞学检验结果计算：观察100个成熟中性粒细胞，计算阳性百分率

20、，再将阳7.糖原染色原理：糖原染色即过碘酸-Schiff反应，过碘酸将血细胞内的糖原氧化醛基+无色品红（Schiff液）紫红色化合物（细胞质）结果：粒系、淋系和单核均呈不同程度的阳性反应临床意义：红血病和红白血病（AML-M6）阳性反应；鉴别急单-急粒-急淋42骨髓细胞学检验7.糖原染色42骨髓细胞学检验图 糖原染色43骨髓细胞学检验图 糖原染色43骨髓细胞学检验 原理：即普鲁氏蓝反应，人体内的铁以铁蛋白和含铁血黄素的形式储存在骨髓的单核-吞噬细胞胞质中，含铁血黄素还存在于幼红细胞中，这些铁与低铁氰化钾在酸性条件下生成铁氰化铁（细胞质） 细胞外铁:低倍镜观察骨髓的单核-吞噬细胞胞质中铁，阳性为

21、绿色或蓝绿色珠状/块状物质，分为-、1+、2+、3+、4+ 共五级 细胞内铁:幼红细胞内的铁，油镜计数100个有核红细胞，计算阳性百分率 环状铁粒幼细胞：幼红细胞内的铁粒在6-10个以上，绕核排列超过2/3直径，称为环状铁粒幼细胞，多见于MDS-RAS 8.铁 染 色44骨髓细胞学检验 原理 临床意义: IDA:细胞外铁阴性，细胞内铁百分率15%。在铁剂治疗IDA 时细胞内铁先出现，细胞外铁在治疗一段时间后才会出现 非缺铁性贫血:eg.AA、珠蛋白生成障碍性贫血、溶血性贫血、巨幼细胞性贫血等，细胞外铁增加 铁粒幼细胞性贫血:细胞内外铁增加，环状铁粒幼细胞15%，eg.MDS-RAS45骨髓细胞

22、学检验 45骨髓细胞学检验 六.细 胞 免 疫 分 型46骨髓细胞学检验 46骨髓细胞学检验 1 定义： 用单克隆抗体及免疫学技术对细胞膜表面和（或）细胞质存在的特异性抗原进行检测，借以分析细胞所属系列，分化程度和功能状态的一种方法47骨髓细胞学检验 47骨髓细胞学检验2检测方法免疫荧光法免疫酶染色法：APAAP、PAP、ABC48骨髓细胞学检验2检测方法免疫荧光法48骨髓细胞学检验3.临床应用3.1 有助于识别不同系列的细胞识别髓系细胞的抗体:CD13、CD14、CD15、CD33等识别淋系细胞的抗体:CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD10、CD19、CD20等识别巨核细胞和血小板

23、的抗体:CD41、CD42、CD61等识别红细胞系列的抗体:血型糖蛋白A或B49骨髓细胞学检验3.临床应用3.1 有助于识别不同系列的细胞49骨髓细胞 3.2 识别不同的淋巴细胞识别成熟T 淋巴细胞的抗体:CD2、CD3、CD4、CD7、CD8 等识别成熟B 淋巴细胞的抗体:CD19、CD20、CD22等识别NK 细胞的抗体:CD16、CD56 50骨髓细胞学检验 3.2 识别不同的淋巴细胞50骨髓细胞学检验3.3 用于检测T淋巴细胞亚群临床上常用CD3、CD4和CD8单抗检测全T(CD3)细胞，并将外周淋巴器官和血液中的T细胞分为辅助性T细胞TH(CD4 +，CD8 +)和抑制性T细胞Ts(

24、CD4-，CD8 +)两个主要亚群THTS(CD4 + /CD8 +)比值作为机体免疫状态、某些疾病诊断、病期分析、监测治疗和判断预后的参数51骨髓细胞学检验3.3 用于检测T淋巴细胞亚群51骨髓细胞学检验 3.4 识别不同分化阶段的细胞造血干细胞: CD34 + 、CD90+、Lin- 造血干细胞向髓系定向的标志:CD34 + 、CD33 + T淋巴细胞系祖细胞:CD34 +、TDT +、CD10 +、 CD7 + B淋巴细胞系祖细胞:CD34 +、CD19 +为标志。根据不同抗体组合可将T、B淋巴细胞区分为不同的分化阶段52骨髓细胞学检验 3.4 识别不同分化阶段的细胞52骨髓细胞学检验3

25、.5有助于识别不同功能状态的细胞3.6 有助于对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究: 用免疫荧光法标记的活细胞可经流式细胞仪或免疫磁珠法将其分离出来，并进行研究3.7 可用于各种白血病细胞的免疫表型分析53骨髓细胞学检验3.5有助于识别不同功能状态的细胞53骨髓细胞学检验3.8用于白血病微小残留病的检测 完全缓解的白血病病人骨髓细胞中，出现CDl9、CD22、CD10、CD7、CD5、CDl3、CD37、CD34等任一种抗原阳性,伴TbT +,则可诊断微小残留病存在 54骨髓细胞学检验3.8用于白血病微小残留病的检测 54骨髓细胞学检验 4.急性白血病细胞免疫表型特点55骨髓细胞学检验

26、 55骨髓细胞学检验4.1 急淋的免疫表型特点B 细胞型ALL:CD19,CD20,CD22,CD10,HLA-DR,CD34,CD38T 细胞型ALL:CD3,CD5,CD7,HLA-DR56骨髓细胞学检验4.1 急淋的免疫表型特点56骨髓细胞学检验 表 急性髓细胞白血病的免疫学分类 亚型 典型的蛋白标记 亚型 典型的蛋白标记 M0 CD34,33,13 M4 CD34,33,15,13 M1 CD34,33,13 M5 CD33,15,14,13 M2 CD34,33,15,13 M6 CD33,血型糖蛋白 M3 CD33,13 M7 CD33,41,42,61 (HLA-DR阴性) 4.2 急粒的免疫表型特点57骨髓细胞学检验 表 急性髓细胞白血病的免疫学分类 亚型 七. 细胞遗传学分析58骨髓细胞学检验 七. 细胞遗传学分析58骨髓细胞学检验表 急性白血病的染色体异常59骨