免疫细胞功能检测技术课件

1、第15章免疫细胞功能检测技术医大一院检验科第15章免疫细胞功能检测技术医大一院检验科本章内容吞噬细胞功能检测技术 免疫细胞功能检测的临床应用免疫细胞功能检测技术 淋巴细胞的功能检测本章内容吞噬细胞功能检测技术 免疫细胞功能检测的临床应用免免疫细胞淋巴细胞群识别特异性抗原 ，被激活显示出特异性应答吞噬细胞T细胞B细胞NK细胞中性粒细胞巨噬细胞树突状细胞捕获抗原，处理抗原，提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能免疫细胞淋巴细胞群识别特异性抗原 ，被激活显示出特异性应答一、T细胞功能的检测 二、 B细胞功能检测 三、 NK细胞活性测定第一节 淋巴细胞的功能检测淋巴细胞T细胞NK和K细胞B细胞细胞免疫功能非

2、特异性免疫作用体液免疫功能一、T细胞功能的检测 二、 B细胞功能检测 三、 NK细胞活淋巴细胞功能测定间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应体内实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定体外实验淋巴细胞功能测定间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的4T细胞增殖试验123T细胞介导的细胞毒试验T细胞分泌功能测定体内试验一、T细胞功能的检测4T细胞增殖试验123T细胞介导的细胞毒试验T细胞分泌功能测（一）T细胞增殖试验DNA合成刺激分化有丝分裂原/抗原淋巴细胞淋巴母细胞细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松空泡（一）T细胞增

3、殖试验DNA合成刺激分化有丝分裂原/抗原淋巴细 未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞 过渡型细胞大小(直径m)1220121668核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、14个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无 未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴检测方法（1）形态学检查法（2）3H-TdR掺入法优点：简便易行缺点：重复性和准确性差刺激物PHAConA优点：敏感性高，客观性强 重复性好缺点：设备条件 放射性核素污染淋巴细胞（4-6天） 母细胞化 淋巴细

4、胞DNA合成期 3HTdR掺入 测定细胞内的3H（3）MTT比色法PHA刺激管cpm均值对照管cpm均值SI=优点：操作简便，无放射性污染缺点：敏感性低于3H-TdR掺入法培养终止前加入MTT 测定溶解的甲臜检测方法（1）形态学检查法（2）3H-TdR掺入法优点：简便(二) T细胞分泌功能测 体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。 (二) T细胞分泌功能测 体外培养的T细胞经各种丝（三）T细胞介导的细胞毒试验靶细胞抗原靶细胞杀伤活力T细胞致敏CTL（三）T细胞介导的细

5、胞毒试验靶细胞靶细胞杀伤活力T细胞致敏C检测方法（1）形态学方法（2）51Cr释放法 CTL淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞淋巴细胞+含51Cr 的肿瘤细胞 测定射线肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力：判断预后，观察疗效 检测方法（1）形态学方法（2）51Cr释放法 CTL淋巴细胞PHA皮试非特异性刺激T细胞发生母细胞转化（四）体内试验Please write down about details of introducing your company.(Vision, duties, and customer service of company)Add your vision in he

6、re特异性抗原皮试结核白色念珠菌皮肤毛癣菌素腮腺炎病毒等迟发型超敏反应PHA皮试（四）体内试验Please write down 4B细胞增殖能力的试验123B细胞抗体形成功能的检测溶血空斑试验体内试验二、B细胞功能的检测4B细胞增殖能力的试验123B细胞抗体形成功能的检测溶血空斑（一） B细胞增殖试验DNA合成刺激分化有丝分裂原/抗原淋巴细胞淋巴母细胞细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松空泡（一） B细胞增殖试验DNA合成刺激分化有丝分裂原/抗原淋巴 未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞 过渡型细胞大小(直径m)1220121668核大小、染色质增大、

7、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、14个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无 未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴检测方法（1）形态学检查法（2）3H-TdR掺入法优点：简便易行缺点：重复性和准确性差刺激物SPA/抗IgM(人) LPS（鼠）优点：敏感性高，客观性强 重复性好缺点：设备条件 放射性核素污染淋巴细胞（4-6天） 母细胞化 淋巴细胞DNA合成期 3HTdR掺入 测定细胞内的3H（3）MTT比色法PHA刺激管cpm均值对照管cpm均值SI=优点：操作简便，无放射性污染缺点：敏感性低于3H-T

8、dR掺入法培养终止前加入MTT 测定溶解的甲？检测方法（1）形态学检查法（2）3H-TdR掺入法优点：简便（二）溶血空斑试验经典溶血空斑试验被动溶血空斑试验检测抗体：抗RBC抗体检测抗体：抗SRBC吸附抗原的抗体用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。（二）溶血空斑试验经典溶血空斑试验被动溶血空斑试验检测抗体：(三) B细胞抗体形成功能的检测 酶联免疫斑点法可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。优点：稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。(三) B细胞抗体形成功能的检测

9、酶联（四）体内试验体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。（四）体内试验体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类三、NK细胞活性测定三、NK细胞活性测定三、NK细胞活性测定形态法酶释放法 放射性核素释放法化学发光测CPM值染色计数上清LDH或AKP测发光强度杀伤肿瘤细胞K562方法学评价：简便有主观性方法学评价：经济、快速、简便、可定量敏感性较低方法学评价：敏感性高，客观精确设备要求，核素污染方法学评价：快速、

10、简便、样品量少，敏感，可定量三、NK细胞活性测定形态法酶释放法 放射性核素释放法化学发光一、中性粒细胞功能检测技术二、巨噬细胞功能检测技术第二节 吞噬细胞功能检测技术吞噬趋化 胞内杀伤作用大吞噬细胞：单核巨噬细胞系统小吞噬细胞：中性粒细胞一、中性粒细胞功能检测技术二、巨噬细胞功能检测技术第二节 吞细胞趋化功能的检测12吞噬和杀菌功能的检测一、中性粒细胞功能的检测细胞趋化功能的检测12吞噬和杀菌功能的检测一、中性粒细胞功能（一）趋化功能检测 原理 方法滤膜渗透法琼脂糖平板法微生物细胞成分及代谢产物补体活性片段细胞因子等中性粒细胞趋化运动（一）趋化功能检测 原理 方法滤膜渗透法琼脂糖平板法微生物细

11、（二）吞噬和杀菌功能测定显微镜检查法溶菌法 NBT还原试验 （二）吞噬和杀菌功能测定显微镜检查法溶菌法 NBT还原试验 二、巨噬细胞功能的检测4炭粒廓清试验1235巨噬细胞溶酶体酶测定吞噬功能检测细胞毒作用测定巨噬细胞促凝血活性测定给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度用鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。 1酸性磷酸酶的测定 2非特异性酯酶的测定 用IFN-激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR标记DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性。取已经37预温的正常兔血浆和CaCl2混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置37，即时记录血浆凝固时间。二、巨噬细胞功能的检测4炭粒廓清试