实验一：常用玻璃器皿的清洗及包扎

1、一.目的与要求试验一常用玻璃器皿的清洗及包扎一 生疏微生物试验所需各种常用器皿的名称和规格。二 学会正确的清洗玻璃器皿的方法和包扎方法二.原理吸管等进展妥当包扎，试管和三角瓶要做棉塞。清洗方法依据试验目的、器皿的种类 放的物品、洗净剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同，不同的器皿包扎方法也不同。 三.材料与仪器一常用的各种玻璃器皿。二洗涤工具和去污粉、肥皂、洗涤液。四.操作步骤一清洗玻璃器皿的清洗购置的玻璃器皿均含有游离碱，故应先将其浸于洗液或 2%的盐酸溶液中数小时，再用自来水冲洗干净。用过的玻璃器皿的清洗试管、培育皿、三角烧瓶、烧杯 可用瓶刷或海绵沾上肥皂、洗衣粉或去污粉等洗涤 垢完全洗净

2、，假设挂有水珠，则需用洗涤液或洗液浸泡数小时，再用自来水充分冲洗，洗涤干净的器皿倒置与铁丝框内或有空心格子木架上，室内晾干。玻璃吸管、滴管一般用完后应马上用清水和蒸馏水浸泡或冲洗，免得枯燥后以冲洗干净，如附有污物可用洗液浸泡。载玻片与盖玻片带有油污的应擦去有无后用热乙醇、丙酮、二甲苯等溶液浸泡1015min，溶液油垢然后用水冲洗，再用洗涤液浸泡、冲洗，干后置于 95%乙醇中保存备用。二玻璃器皿的包扎培育皿常用旧报纸或牛皮纸包紧，一般以510 套培育皿作一包。包好后进展干热或湿热灭菌，如将培育皿放入金属不锈钢筒内进展热灭，则不必用纸包。试管和三角瓶试管管口和三角瓶都需要塞以棉花塞或泡膜塑料塞缝隙

3、，不能过紧也不能过松，长度不少于管口直径的二倍，约2/3 塞进管口。假设干支试管用绳扎在一起，在棉塞部格外包裹牛皮纸或2 层旧报纸，再扎好。三角瓶每个单独用牛皮纸或旧报纸包扎棉塞。吸管洗净烘干后的吸管，在口吸的一端月0.5cm 处，用尖头镊子或针塞入少许脱脂棉，以免使用时将杂菌吹入其中或不慎将微生物吸出管外棉花要塞得松紧恰当然后分别将 每支吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，以45 度左右的角度螺旋形卷起来，右端多余的报纸大一小结，不使散开。五、试验报告一结果检查试验效果二思考题能否用橡皮塞、木塞来代替棉塞，为什么？玻璃器皿清洗时应留意什么？试验二 一般光学显微镜的构造和使用一、目的与要求一 学习一

4、般光学显微镜的构造、局部功能及使用方法。二 学习并把握油镜的原理的使用方法。二、原理一般光学显微镜由机械装置和光学系统2 大局部构成。在光学系统中物镜的性能最为关键， 高区分率。三、材料与仪器一菌种金黄色葡萄球菌及枯草杆菌染色玻片标本，啤酒酵母水浸片。二其他香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。四、操作步骤一34cm，镜检时姿势要端正。二光镜采集自然光或灯光作为照明光源时或平面反光镜并调整其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。三低倍镜观看将标本玻片置于载物台上用 标本夹夹住移动推动器使观看对象处 在物镜的正下方，下降10物镜，使其接近标本，用粗调整器粗调螺旋渐渐升起镜筒， 消灭图像后再用细调整细调螺

5、旋调整图像至清楚通过标本夹推动器渐渐移动玻片， 认真观看标本各部位，找到适宜目的物，认真观看。四高倍镜观看 在低倍镜下找到适宜的观看目标并将其移至视野中心后，转动物镜转清楚，利用推动器移动标本认真观看并记录。五2cm12 足光圈，用粗调整器将镜筒缓缓上升，直至视野中消灭物象并用细调整器使其清楚为止。六显微镜用后处理上升镜筒，取下载玻片。用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，然后擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留的油迹，然后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。用擦镜纸清洁其他物镜和目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件。将各局部复原，反光镜垂于镜座，将物镜转成“八字形“再向下旋，同时把聚光镜降下， 以免物镜与聚光

6、镜发生碰撞危急。五、试验报告一结果分别绘出在不同物镜下观看到的不同菌种的形态，同时注明放大倍数。二思考题油镜与一般物镜在使用方法上有何不同？应特别留意什么？显微镜中调整光线强弱的装置有哪些？试验三酵母菌形态观看一、目的与要求观看酵母菌的形态及出芽生殖方式。二、原理染成蓝色的为死细胞，无色的为活细胞、三、材料与仪器一 啤酒酵母，假丝酵母，汉逊酵母。二 显微镜，载玻片，盖玻片，接种针，酒精灯。三 吕氏美蓝染液。四、操作步骤一 在干净载玻片中心加一滴吕氏美蓝染色液于美蓝液中，混合均匀。二取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后渐渐将盖玻片放下以免产生气泡使其盖在菌液上，将多余菌液用吸水纸吸干。三依据颜

7、色来区分死活细胞。四 染色约0.5h 后再进展观看，留意四细胞数量是否增加。五、试验报告(一) 结果 绘图说明你所观看到的酵母形态特征。(二) 思考题在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区分于一般细菌？酵母水浸片制作室应留意什么？试验十三培育基的制备一、 目的与要求(一) 学习制备培育基的根本技术。 (二) 制备牛肉膏蛋白琼脂培育基。二、 原理牛肉膏蛋白培育基时一种应用最广泛和最一般的细菌培育基这种培育基中含有一般细菌生长生殖所需要的最根本的养分物质，可供生殖之用。制作固体培育基时须加2%琼脂，培育细菌时，应用烯酸或稀碱将PH 调至中性或微碱性。牛肉膏蛋白培育基的配方：牛肉膏0.%5 蛋白胨1%

8、 NaCL0.5%pH7.47.6.三、材料与仪器一试剂牛肉膏，蛋白胨，Nacl1mol/L;NaoH1 mol/L HCL二其他试管，三角烧杯，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH 试纸，电炉，台秤。四、操作步骤(一) 中称量，用热水熔化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要快速。(二) 溶解在烧杯中参加少于所需要的水量，加热，逐一参加各成分，使其溶解，琼脂 在溶液煮沸后参加，溶化过程需要不断搅拌。加热时应留意火力，勿使培育基烧焦或溢出。溶好后，缺乏所需水分。(三) 调 PH 1 mol/L NaoH pH 调至所需范围。(四) 过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某

9、些试验结果的观看，如无特别要求时可省去此步骤。(五) 分装按试验要求，可将配置的培育基分装入试管内或三角瓶内，分装装置照试验图-8 所示：分装时留意，勿使培育基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。1液体分装分装高度以试管高度的1/4 左右为宜，分装三角瓶的量则依据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2 为宜。固体分装分装试管，其装量不超过量筒的 1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三角瓶，以不超过容积的1/2 为宜。半固体分装 装置以试管高度的 1/3 为宜，灭菌后垂直待凝六加棉塞分装完毕后，在试管或三角瓶口塞上棉或泡沫塑料塞及试管帽等，阻挡外界微生物进入培育基而造成污

10、染，并保证有良好的通气性能。七包扎 棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进展灭菌。八保存灭菌后的培育基放入37培育箱中培育24h，以检验灭菌的效果无污染方可使用。五、试验报告一结果说明你配置培育基过程中的状况。思考题培育基配置时应留意什么问题？为什么？分装培育基时为什么要使用弹簧夹？培育基配好后，为什么要马上灭菌？试验四干热灭菌及高压蒸汽灭菌一、目的与要求二、原理干热灭菌时利用高温使微生物细胞内的蛋白凝固变形而到达灭菌的目的 ，时间长12h.高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放入一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热， 阀，连续温度，导致菌体蛋白质凝固变形而到达灭菌的目的。0.1MPa(15Ib/In1.05

11、kg/cm)121.5。1530min 可到达彻底灭菌，灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体状况而有所转变。三、材料与仪器吸管，培育皿，试管，电热枯燥箱，手提式高压灭菌蒸汽灭菌锅，牛肉膏蛋白胨培育基、蒸馏水。四、操作步骤一 干热灭菌法，适用于空的、枯燥的玻璃器皿的灭菌。培育基不适用。将包好的待灭菌物品培育皿、试管、吸管等放入电热枯燥箱留意留肯定间隙管好箱门。接通电源，翻开排气孔，使箱内湿空气能逸出，旋动恒温调整器，保持加热升温状态， 100时关闭排气孔。当温度升到 160170时，借恒温调整器的自动把握，保持此温度2h。切断电源，冷却至 70时，翻开箱门，取出灭菌物品70以前，切

12、勿翻开箱门，否则温度骤降导致玻璃器皿炸裂、二 高压蒸汽灭菌首先将内层锅取出，再向外层锅内参加适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。放回内层锅，并装入待灭菌物品内装培育基或小的三角瓶，不要装的太挤，以免阻碍塞。加盖，旋紧。121 20-30 分钟。停顿加热，待压力表的压力至零位时，翻开排气阀，旋松螺栓，翻开盖子，取出灭菌物品。留意，当压力不为零时，不能开盖取物，否则由于压力突然下降，容器内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染而发生污染，甚至灼伤操作者。高压灭菌锅上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不得任凭调整。五、试验报告一 结果 检查灭菌是否彻底。二 思考题干热灭菌操作过程中应留意哪

13、些问题，为什么？为什么干热灭菌所需温度要比湿热灭菌高?高压蒸汽灭菌时，为什么要排尽锅内的冷空气？试验十七微生物的平板菌落基数法一，目的与要求把握用平板菌落计数法来测定肯定数量样品中微生物细胞数目。二， 原理平板菌落计数法是通过将样品制成一系列不同的稀释液目，一般认为每一个菌落是由一个细胞增殖后形成，所以可计算出样品的含菌量。三， 材料与仪器一 样品，无菌水。二 培育基 一般养分琼脂培育基。三 培育皿，恒温培育箱等。四，试验步骤一 样品处理1，在无菌的条件下，准确称取10g 固体样品或量取10mL液体样品。2 10g 固体样品快速倒入已灭菌的装有玻璃珠和90mL 1530min,10 倍的菌悬液

14、，10ml 10 倍。31 1mL 10 9ml 无菌水的试管中，摇匀后得稀释 100 10、1010、10 倍，稀释程度以样品中可能含有的活菌数多少而定。制平板混合平板培育计数法上述样品稀释好后，用吸管取适当稀释倍数的样品稀释液1mL,放入已灭菌的培育皿中再快速倒入约15mL 溶化而冷却至50左右的琼脂培育基将培育皿按顺、反时针方向旋转摇动，使样品稀释液和培育基混匀，放平，冷却凝固后倒转放置，在被测微生物最适温度下培育每一个稀释样品各做三个培育皿，当消灭菌落后，用计数器进展计数。涂抹平板培育计数法 先将溶化并冷却至50左右的15ML琼脂培育基注入已灭菌的培育0.2mL 。五、试验报告一结果计

15、算混合平板培育计算公式：每克样品菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数X 稀释倍数涂抹平板培育计算公式：每克样品菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数X X5思考题平板技术法的优缺点是什么？AYUI;09RA qweLO 6EZSGD3A5RTG试验五 酵母菌形态观看一、目的与要求观看酵母菌的形态及出芽生殖方式。二、原理胞的鉴别染成蓝色的为死细胞，无色的为活细胞、三、材料与仪器一 啤酒酵母，假丝酵母，汉逊酵母。二 显微镜，载玻片，盖玻片，接种针，酒精灯。三 吕氏美蓝染液。四、操作步骤一 在干净载玻片中心加一滴吕氏美蓝染色液，以无菌操作接种环挑取少量酵母菌体放于美蓝液中，混合均匀。二以免产生气泡使其

16、盖在菌液上，将多余菌液用吸水纸吸干。三并依据颜色来区分死活细胞。四 染色约0.5h 后再进展观看，留意四细胞数量是否增加。五、试验报告(一结果 绘图说明你所观看到的酵母形态特征。(二思考题在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区分于一般细菌？酵母水浸片制作室应留意什么？试验十三培育基的制备一、目的与要求(一) 学习制备培育基的根本技术。 (二) 制备牛肉膏蛋白琼脂培育基。二、原理牛肉膏蛋白培育基时一种应用最广泛和最一般的细菌培育基这种培育基中含有一般细 菌生长生殖所需要的最根本的养分物质，可供生殖之用。制作固体培育基时须加2%琼 脂培育细菌时应用烯酸或稀碱将 PH 调至中性或微碱性牛肉膏蛋白培育基

17、的配方：牛肉膏0.%5蛋白胨1%NaCL0.5%pH7.47.6.三、材料与仪器一 试剂 牛肉膏，蛋白胨，Nacl1mol/L;NaoH1 mol/L HCL二 其他试管，三角烧杯，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花， 牛皮纸，线绳，pH 试纸，电炉，台秤。四、操作步骤(一称量 依据用量按比例依次称取各种成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或外表皿中称量，用热水熔化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要快速。(二)溶解在烧杯中参加少于所需要的水量，加热，逐一参加各成分，使其溶解， 琼脂在溶液煮沸后参加，溶化过程需要不断搅拌。加热时应留意火力，勿使培育基烧焦或溢出。溶好后，缺乏所需水分。(

18、三)调 PH 用1mol/LNaoH 把pH 调至所需范围。(四)过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些试验结果的观看，如无特别要求时可省去此步骤。(五)分装按试验要求，可将配置的培育基分装入试管内或三角瓶内，分装装置照实 验图-8 所示：分装时留意，勿使培育基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。液体分装分装高度以试管高度的1/4 左右为宜分装三角瓶的量则依据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2 为宜。固体分装分装试管，其装量不超过量筒的 1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三角瓶，以不超过容积的1/2 为宜。半固体分装 装置以试管高度的 1/3 为宜，灭菌后垂直待

19、凝六加棉塞分装完毕后，在试管或三角瓶口塞上棉塞或泡沫塑料塞及试管帽等以阻挡外界微生物进入培育基而造成污染，并保证有良好的通气性能。七包扎 棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进展灭菌。八保存灭菌后的培育基放入37培育箱中培育24h，以检验灭菌的效果无污染方可使用。五、试验报告一结果说明你配置培育基过程中的状况。思考题培育基配置时应留意什么问题？为什么？分装培育基时为什么要使用弹簧夹？培育基配好后，为什么要马上灭菌？试验十三干热灭菌及高压蒸汽灭菌一、 目的与要求二、 原理干热灭菌时利用高温使微生物细胞内的蛋白凝固变形而到达灭菌的目的 蛋白质凝固越块，反之含水量越小，则凝固越慢。因此，与湿热灭菌相比，

20、干热灭菌所需温度高，时间长高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放入一 而到达灭菌的目的。0.1MPa(15Ib/In1.05kg/cm)121.5。1530min 可到达彻底灭菌，灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体状况而有所转变。三、 材料与仪器吸管，培育皿，试管，电热枯燥箱，手提式高压灭菌蒸汽灭菌锅，牛肉膏蛋白胨培育基、蒸馏水。四、 操作步骤一 干热灭菌法，适用于空的、枯燥的玻璃器皿的灭菌。培育基不适用。将包好的待灭菌物品培育皿、试管、吸管等放入电热枯燥箱留意留肯定间隙，管好箱门。100时关闭排气孔。当温度升到 160170时，借恒温调整器的自动把握，保持此温度2h。切断电源，冷却至

21、 70未将至70以前，切勿翻开箱门，否则温度骤降导致玻璃器皿炸裂、二为宜。放回内层锅，并装入待灭菌物品内装培育基或小的三角瓶太挤，以免阻碍蒸汽流通过影响灭菌效果，三角瓶口部要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧全都，勿使漏气。 待冷空气排尽后，关上排气阀让锅内的温度随蒸汽压力增加而渐渐上升， 当锅内到达所需压力时，把握热源，维持压力至所需时间。 取出灭菌物品。留意，当压力不为零时，不能开盖取物，否则由于压力 突然下降，容器内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染 而发生污染，甚至

22、灼伤操作者。高压灭菌锅上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不得任凭调整。五、 试验报告一 结果 检查灭菌是否彻底。二干热灭菌操作过程中应留意哪些问题，为什么？为什么干热灭菌所需温度要比湿热灭菌高?高压蒸汽灭菌时，为什么要排尽锅内的冷空气？试验十七微生物的平板菌落基数法一，目的与要求把握用平板菌落计数法来测定肯定数量样品中微生物细胞数目。二，原理平板菌落计数法是通过将样品制成一系列不同的稀释液落数目，一般认为每一个菌落是由一个细胞增殖后形成，所以可计算出样品的含菌量。三， 材料与仪器一 样品，无菌水。二 培育基 一般养分琼脂培育基。三 培育皿，恒温培育箱等。四，试验步骤一 样品处理1，在无菌的

23、条件下，准确称取10g 固体样品或量取10mL液体样品。2 10g 固体样品快速倒入已灭菌的装有玻璃珠和90mL 无菌水的三角瓶中，充分振荡1530min,10 倍的菌悬液，10ml 10 倍。31 1mL 10 9ml 无菌水的试管中，摇匀后得稀释 100 10、1010、10 倍，稀释程度以样品中可能含有的活菌数多少而定。制平板混合平板培育计数法上述样品稀释好后，用吸管取适当稀释倍数的样品稀释液1mL,15mL 50置，在被测微生物最适温度下培育每一个稀释样品各做三个培育皿，当消灭菌落后，用计数器进展计数。涂抹平板培育计数法 先将溶化并冷却至50左右的15ML 琼脂培育基注入已灭菌的0.2

24、mL 进展计数。五、试验报告一结果2.计算混合平板培育计算公式：每克样品菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数X 稀释倍数涂抹平板培育计算公式：每克样品菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数X X5思考题平板技术法的优缺点是什么？试验二 一般光学显微镜的构造和使用一、目的与要求一 学习一般光学显微镜的构造、局部功能及使用方法。二 学习并把握油镜的原理的使用方法。二、原理一般光学显微镜由机械装置和光学系统2 大局部构成。在光学系统中物镜的性能最为关键， 高区分率。三、材料与仪器一菌种金黄色葡萄球菌及枯草杆菌染色玻片标本，啤酒酵母水浸片。二其他香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。四、操作步骤一34cm，镜

25、检时姿势要端正。二光镜采集自然光或灯光作为照明光源时或平面反光镜并调整其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。三低倍镜观看将标本玻片置于载物台上用 标本夹夹住移动推动器使观看对象处 在物镜的正下方，下降10物镜，使其接近标本，用粗调整器粗调螺旋渐渐升起镜筒， 消灭图像后再用细调整细调螺旋调整图像至清楚通过标本夹推动器渐渐移动玻片， 认真观看标本各部位，找到适宜目的物，认真观看。四高倍镜观看 在低倍镜下找到适宜的观看目标并将其移至视野中心后，转动物镜转清楚，利用推动器移动标本认真观看并记录。五2cm12 足光圈，用粗调整器将镜筒缓缓上升，直至视野中消灭物象并用细调整器使其清楚为止。六显微镜用后处理

26、上升镜筒，取下载玻片。用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，然后擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留的油迹，然后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。用擦镜纸清洁其他物镜和目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件。将各局部复原，反光镜垂于镜座，将物镜转成“八字形“再向下旋，同时把聚光镜降下， 以免物镜与聚光镜发生碰撞危急。五、试验报告一结果分别绘出在不同物镜下观看到的不同菌种的形态，同时注明放大倍数。二思考题油镜与一般物镜在使用方法上有何不同？应特别留意什么？显微镜中调整光线强弱的装置有哪些？试验五 酵母菌形态观看一、目的与要求观看酵母菌的形态及出芽生殖方式。二、原理染成蓝色的为死细胞，无色的为活细胞、三、材料与仪器

27、一 啤酒酵母，假丝酵母，汉逊酵母。二 显微镜，载玻片，盖玻片，接种针，酒精灯。三 吕氏美蓝染液。四、操作步骤一 在干净载玻片中心加一滴吕氏美蓝染色液于美蓝液中，混合均匀。二取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后渐渐将盖玻片放下以免产生气泡使其盖在菌液上，将多余菌液用吸水纸吸干。三依据颜色来区分死活细胞。四 染色约0.5h 后再进展观看，留意四细胞数量是否增加。五、试验报告(一) 结果 绘图说明你所观看到的酵母形态特征。(二) 思考题在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区分于一般细菌？酵母水浸片制作室应留意什么？试验十三培育基的制备一、 目的与要求(一) 学习制备培育基的根本技术。 (二) 制备牛

28、肉膏蛋白琼脂培育基。二、 原理牛肉膏蛋白培育基时一种应用最广泛和最一般的细菌培育基长生殖所需要的最根本的养分物质，可供生殖之用。制作固体培育基时须加2%琼脂，培育细菌时，应用烯酸或稀碱将PH 调至中性或微碱性。牛肉膏蛋白培育基的配方：牛肉膏0.%5蛋白胨1%NaCL0.5%pH7.47.6.三、材料与仪器一试剂牛肉膏，蛋白胨，Nacl1mol/L;NaoH1 mol/L HCL二其他试管，三角烧杯，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH 试纸，电炉，台秤。四、操作步骤(一) 中称量，用热水熔化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要快速。(二) 溶解在烧杯中参加少于所需要的

29、水量，加热，逐一参加各成分，使其溶解，琼脂 在溶液煮沸后参加，溶化过程需要不断搅拌。加热时应留意火力，勿使培育基烧焦或溢出。溶好后，缺乏所需水分。(三) 调 PH 用1mol/LNaoH 把pH 调至所需范围。(四) 过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些试验结果的观看，如无特别要求时可省去此步骤。(五) 分装按试验要求，可将配置的培育基分装入试管内或三角瓶内，分装装置照试验图-8 所示：分装时留意，勿使培育基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。1液体分装分装高度以试管高度的1/4 左右为宜，分装三角瓶的量则依据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2 为宜。固体分装分装试管，其装量不超过

30、量筒的 1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三角瓶，以不超过容积的1/2 为宜。半固体分装 装置以试管高度的 1/3 为宜，灭菌后垂直待凝六加棉塞分装完毕后，在试管或三角瓶口塞上棉或泡沫塑料塞及试管帽等，阻挡外界微生物进入培育基而造成污染，并保证有良好的通气性能。七包扎 棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进展灭菌。八保存灭菌后的培育基放入37培育箱中培育24h，以检验灭菌的效果无污染方可使用。五、试验报告一结果说明你配置培育基过程中的状况。思考题培育基配置时应留意什么问题？为什么？分装培育基时为什么要使用弹簧夹？培育基配好后，为什么要马上灭菌？试验十三干热灭菌及高压蒸汽灭菌一

31、、目的与要求二、原理干热灭菌时利用高温使微生物细胞内的蛋白凝固变形而到达灭菌的目的 ，时间长12h.高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放入一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热， 阀，连续温度，导致菌体蛋白质凝固变形而到达灭菌的目的。0.1MPa(15Ib/In1.05kg/cm)121.5。1530min 可到达彻底灭菌，灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体状况而有所转变。三、材料与仪器吸管，培育皿，试管，电热枯燥箱，手提式高压灭菌蒸汽灭菌锅，牛肉膏蛋白胨培育基、蒸馏水。四、操作步骤一 干热灭菌法，适用于空的、枯燥的玻璃器皿的灭菌。培育基不适用。将包好的待灭菌物品培育皿、试管、吸管等放入电热枯燥箱留意留肯定间隙管好箱门。接通电源，翻开排气孔，使箱内湿空气能逸出，旋动恒温调整器，保持加热升温状态， 100时关闭排气孔。当温度升到 160170时，借恒温调整器的自动把握，保持此温度2h。切断电源，冷却至 70时，翻开箱门，取出灭菌物品70以前，切勿翻开箱门，否则温度骤降导致玻璃器皿炸裂、二 高压蒸汽灭菌首