四 培养基配制与无菌技术课件

1、一、实验目的掌握微生物常规培养基的制备方法学习无菌技术 学习玻璃器皿的包扎实验四 微生物培养基的配制与无菌技术 二、实验内容1、6种培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基（细菌）高氏一号培养基（放线菌）马丁氏培养基（真菌）淀粉培养基（淀粉水解试验）蛋白胨水培养基（吲哚试验）葡萄糖蛋白胨水培养基（V.P试验）2、 移液管、培养皿、三角瓶、试管等的包扎3、灭菌实验四 微生物培养基的配制 无菌水的准备三、实验原理培养基medium:用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的营养基质。水、C源、N源、矿物质、生长因素/因子、微量元素培养基种类：天然培养基、合成培养基、半合成培养基固体培养基、液体

2、培养基、半固体培养基基础培养基、加富培养基、选择性培养基、鉴别培养基实验四 微生物培养基的配制 培养基分装装置 斜面摆放法 棉塞的做法a)棉塞的制作过程 (b)正误棉塞培养皿的包扎五、无菌技术常用的灭菌方法干热灭菌热蒸汽灭菌常压灭菌过滤除菌射线灭菌化学药物灭菌 2、干热灭菌 用干燥热空气（160, 12h）杀死微生物培养皿、漏斗、吸管、玻璃器具、解剖刀，接种、镊子、剪刀等能耐高温的器皿晾干后用牛皮纸包好温度升到100，开箱内鼓风机培养基、橡胶塑料制品不能用此方法注意安全干热灭菌箱鼓风钮温度调节器指示灯温度调节旋扭温度计与排气孔3、湿热灭菌 常压蒸汽间歇灭菌 将待灭菌的培养基或物品装入常压灭菌器

3、内，加热至100大量产生气体时,维持3060min,每天灭菌一次,连续灭菌三天.每次蒸煮间隙里,培养基或物品应放在室温(20-30)条件下培养,第一次蒸煮杀死微生物的营养体,芽孢则在培养过程中萌发成营养体;第二次蒸煮即可杀死.经过二次培养,三次反复蒸煮,即可达到完全灭菌。常压蒸汽持续灭菌高压蒸汽灭菌3、湿热灭菌 常压蒸汽间歇灭菌常压蒸汽持续灭菌 常压蒸汽持续灭菌中,从蒸汽大量产生开始,继续加大火力保持充足蒸汽,持续加热36h,杀死绝大部分芽孢和全部营养体,达到灭菌目的。高压蒸汽灭菌3、湿热灭菌 高压蒸汽灭菌原理：水的沸点随压力的增加而提高。水在密闭的加压蒸汽灭菌器中煮沸，产生蒸汽驱除锅内冷空气

4、后，使蒸汽不能逸出，因而增加了锅中的蒸汽压力。蒸汽压力提高，水的沸点随着上升，因而能够获得比100更高的蒸汽温度，用来进行有效的灭菌。同一温度下，湿热灭菌法比干热灭菌法效果好蒸汽穿透力强蛋白质含水量高，易于凝固卧式灭菌锅 是指含菌液体或气体通过细菌滤器，使杂菌留在滤器或滤板上，从而除去杂菌。常用于许多不宜用湿热灭菌的液体物质，如抗生素、血清、糖类溶液等。用于除菌的细菌过滤器，是由孔径极小，能阻止挡的陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃粉等制成.为了加快过滤,一般多采用抽气减压的方法,进行操作。4、过滤除菌 辐射灭菌(Radiation Sterilization)是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上

5、的微生物的一种有效方法。用于灭菌的电磁波有微波，紫外线(UV)、X-射线和-射线等。5、射线灭菌酚类损伤微生物细胞壁和细胞膜、酶钝化、蛋白质变性 醇类溶解膜中的类脂，破坏膜结构，使蛋白变性（纯的或高浓度酒精使菌体表面蛋白凝固，使乙醇不易渗进细胞） 醛类与蛋白质中氨基酸的多种基团共价结合而使其变性 酸类抑制微生物酶和代谢活性 表面活性剂改变细胞的稳定性和透性，细胞物质逸出 卤化物与细胞中的酶和蛋白质中的酪氨酸结合，Cl2和漂白粉产生次氯酸和新生态氧（强氧化剂），破坏细胞膜结构6、化学药剂消毒或灭菌作用机理：重金属与酶或蛋白质上的SH结合 氧化剂使细胞成份氧化 染色剂碱性染料的阳离子基团与蛋白质氨

6、基酸上的羧基或核酸上的 磷酸基结合，阻碍正常代谢 抗生素多种机理：作用于细胞壁、膜、蛋白质、核酸等大分子合成 抗代谢物竞争抑制，如磺胺类药物于对氨基苯甲酸类似，阻止叶 酸的合成 6、化学药剂消毒或灭菌作用机理：升汞（ 0.1% HgCl2）漂白粉10g/150mlNaClO（2-10%）酒精75%苯酚（1%）福尔马林（5%）过氧化氢（3%）氰化汞（0.1%）高锰酸钾（2%）硝酸银(0.1%)常用表面消毒剂酸性培养基: 如10ml培养基中加三滴25%的乳酸 孟加拉红：0.035 g /L培养基抗菌素:金霉素（30g/ml）可抑制多数细菌;青霉素（20g/ml）可抑制G+细菌;多粘霉素（5.0g/ml）可抑制G-细菌;链霉素(40g/ml)和氯霉素(50g/ml)可抑制大部细菌. 除氯霉素可灭菌前加入外，其它抗菌素都是在培养基灭菌后并冷却到45左右时加入. 双层培养基或盖玻片 细菌污染的排除 抑制真菌：50100