细菌的生化反应

1、细菌生化反应1目的了解生化反应的意义及常见的生化反应2概念：用生化的方法来检测细菌对各种基质的代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类，这种生化试验称为细菌的生化反应试验。意义：是鉴别细菌的重要依据。细菌的生化反应3生化反应碳水化合物代谢试验各种酶类试验抑菌试验糖发酵试验甲基红试验V-P试验蛋白质和氨基酸代谢试验硫化氢试验吲哚试验碳源和氮源利用试验枸橼酸盐利用试验IMViC试验4一 糖发酵试验原理 根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示

2、剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。51、确定细菌是否生长2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”表示。3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“”表示。4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。 结果方法 取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置37温箱培养1824小时，观察结果。 67二 IMViC试验是一组试验靛基质试验或称吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、VP试验（V）和枸橼酸盐利用试验（C）可缩写为IMViC试验，i是为了发音的需要加入的。常用于革兰阴性的肠道细菌检测中

3、，可区分产气杆菌属和大肠杆菌属大肠杆菌的结果是，产气肠杆菌的结果是。81、靛基质试验（吲哚试验） 原理 色氨酸几乎存在于所有的蛋白质中，某些细菌含色氨酸酶，能将分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质（吲哚）。后者与寇氏试剂中对二甲基氨基苯甲醛作用，形成红色。方法 将大肠杆菌、产气杆菌分别接种在蛋白胨水培养基中，37培养2448小时取出，在上述细菌的培养液内各加入寇氏试剂数滴，略加振摇，静止半分钟后观察结果。9大肠杆菌为阳性伤寒杆菌为阴性结果玫瑰红色102、甲基红试验大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸后进行混合酸发酵，产生乳酸、甲酸、乙酸、琥珀酸等多种有机酸，使培养液pH小于4.5，甲基红指示剂呈红色，为甲

4、基红试验阳性。产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，经脱羧后生成中性乙酰甲基甲醇，培养液的pH大于5.4，甲基红指示剂呈橘黄色，为甲基红试验阴性。原理11葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基变红甲基红试验乙酰甲基甲醇（中性）pH5.4 甲基红试剂培养基橘黄色12方法滴加甲基红指示剂数滴，立即观察结果结果红色为阳性，+不出现红色为阴性，-133、VP试验产气杆菌利用葡萄糖时产生中性物质之一就是乙酰甲基甲醇，它在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物，是VP试验阳性；而大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。原理14葡萄糖丙酮酸乙酰

5、甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红VP试验与蛋白胨培养基精氨酸中的胍基反应生成红色化合物15方法取出试管培养物，加入等量的李氏试剂，摇匀后不加塞，静置30分钟观察结果。结果红色为阳性，+无红色为阴性，-16葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基红试剂培养基变红乙酰甲基甲醇二乙酰V-P试剂培养基变红脱酸VP试验甲基红试验174、枸橼酸盐利用试验 某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐作为唯一氮源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱性，使指示剂呈碱性反应，指示剂由绿色变为深蓝色是枸橼酸盐利用试

6、验阳性（产气杆菌），反之培养基不变色是为阴性（大肠杆菌）。原理18枸橼酸盐铵盐碳酸盐氨培养基pH下降溴麝香草酚蓝 呈碱性变色培养基变蓝培养基 枸橼酸盐利用试验原理19结果深蓝色为阳性+ 绿色为阴性-20三、硫化氢产生试验 原理 某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐或亚铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。方法 分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸铅培养基中。37孵育24小时后观察结果。21结果 沿穿刺线部位呈黑褐色，表明有硫化氢产生，为阳性以“+”表示， 不变色者为阴性，以“-”表示。 大肠杆菌：- 变形杆菌：+22微生物自动鉴定

7、分析系统 细菌分析仪是一种操作方便、快捷、自动化、标准化程度高的微生物自动分析系统，用于临床上测定各种感染的病原体种类及其对各类抗生素的敏感性。 232000型自动微生物药敏分析系统根据细菌生理学特点利用物化学方法鉴定细菌的类别，主要采用的试验包括：糖（醇）发酵试验、伏普（V-P）试验、甲基红试验、七叶苷水解试验、石蕊牛乳试验、靛基质（吲哚）试验、硫化氢试验、明胶液化试验等。并通过抑菌试验测定抗菌药物体外抑制细菌生长的效力，根据测定药物常用剂量给药时在体内能达到的血药浓度而将细菌敏感性标准分为三级：敏感、 中敏和耐药，并定出细菌的最低抑菌浓度（MIC），从而为临床上用药提供依据。24细菌的鉴定依据而由于细菌的结构和形态较为简单，仅仅依靠形态学特征无法