温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响

1、温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响（间接碘量法）（effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme）一、目的了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响学习酶活性的判定酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的 消耗量或产物的生成量来衡量。酶活性大，反应速度就快。反之则慢。酶促 反应速度受多种因素的影响。如温度、pH、激活剂、抑制剂等。本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾 液淀粉酶的活性大小。借以验证各种因素对酶活性的影响。唾液中含有唾液淀粉酶，此

2、酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。 麦芽糖具有还原性。根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量（即还原性 麦芽糖的多少）判定酶活性的大小。用碘的反滴定法测定还原物的量，还原 物多，酶活性大。具体反应如下：1、试剂成分（S、H、S 试剂）：CuSO、Na CO、NaHCO、KI、KIO、酒石42333酸钾钠、草酸钾。2、判定酶活性大小的化学反应过程：Na CO +2HO - 2NaOH + H COCuSoJ +2NaOH - Cu（OH）+ Na2SO45KI +KIO + 3H SO - 3I +3K SO +3HO TOC o 1-5 h z 3242242酶淀粉一麦芽糖麦芽糖+Cu+

3、一一麦芽糖氧化产物+Cu+Cu+ + I2 - Cu+ + 2I-COO- 草酸钾COO-Cu+ | CuCO0防止逆反应CO剩余I+ Na SO -2I- + Na SO22 2 32 4 6（与淀粉呈兰色（与淀粉无色）3、判定酶活性大小的标志酶活性大一麦芽糖多一Cu+生成量多一 I2消耗量多一剩余I少一Na SO消耗量少 22 2 3酶活性越大，NaSO消耗量越少。空白实验无酶活性，因此NaSO消耗量最223223多。与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。三、实验用品：（一）器材中试管16支。试管架1个。恒温水浴箱1台。温度计1支。量筒1个。吸管：1 支，1ml 2 支，2

4、ml 1支，5ml 1 支，10ml 1 支。25ml、100ml 烧杯各 1 个。电炉子一个。（二）试剂%淀粉溶液NaCl溶液：称取，溶于1000ml水中。磷酸盐缓冲液甲液：称取Na HPO - 12HO溶于1000ml水中，既为M/15 Na HPO溶液，此 -一 24224溶液pH为。乙液：称取溶于1000ml水中，既为M/15 KH PO溶液，此溶液pH为。取甲液，乙液，两液混匀后既为pH磷酸盐缓冲4液。0.01% HgCl2HSO溶液：取水约250ml，加入浓H SO 28ml，稀释至1000ml。2424试剂（S、H、S试剂）溶液A：结晶硫酸铜（）溶于100m l水中。溶液B：酒石

5、酸钾钠12g，无水碳酸钠20g，碳酸氢钠25g溶于500ml水 中。溶液C：碘化钾10g，碘酸钾，草酸钾18g溶于300ml水中。将溶液B倒入溶液A中混匀，再倒入溶液C混匀后定容至1000ml。7.标准NaS O溶液：取硫代硫酸钠（）25g溶于1000ml水中。此溶液浓度 约为，其准确浓度须用碘酸钾标准方法标定。（方法略）取已调整至 标准Na SO溶液50ml稀释至1000ml即为。2 2 3四、实验步骤：1、制备稀释唾液：收集唾液于小烧杯内，吸取下层唾液（要求无气泡）加 入量筒内，用蒸馏水稀释至25ml，混匀备用。2、取中试管8支，标号07, 0号为空白对照，1-3号为测定温度对酶活 性的影

6、响，4-5号为pH对酶活性的影响，6-7号为激活剂和抑制剂对酶活性的影 响按下表操作。加入试剂及唾液后各管充分混匀。影响因素管号淀粉 NaCl 缓冲溶液H歹温度 稀释 温度（ml） （ml） pH ml ml 时间 唾液 时间空白037C 10-37C20 温度的137C 1037C20影响210C 1010 C20 380 C10 80C20pH值的437C 1037C20影响537C 1037C20激活剂66 .637 C1037C20 抑制剂7HgCL26 .637 C1037C20 的影响(2ml)3、充分混匀后开始保温，保温后立即由各管吸取2ml分别加入已预先加入 2ml S、H、S试剂相应号码的试管中，并充分混匀。4、各管放入沸水中加热8分钟。5、向各管加入5 HSO 2ml，轻轻摇动至不产生气泡为止。6、以NaS O滴定各管；至蓝色消退为止。并记录结果。7、由零号试管消耗NaSO ml数分别减去其余各管所消耗ml数，以此结果 判定各种因素对酶活性的影响3五、实验结果与分析（略）管号01234567消耗ml数差值思考