治伤活血胶囊质量标准研究

1、治伤活血胶囊质量标准研究关键词：治伤活活血胶囊；当归；三七七；冰片；丹丹参；骨碎补补； TLCC；HPLCC摘要：目的：建建立治伤活血血胶囊（当归；三七七；冰片；丹丹参；骨碎补补）的质量标标准。方法：以冰片；丹丹参酮IIAA为对照品，以以当归；三七七为对照药材材进行薄层色色谱鉴别，以以阿魏酸为对照照品，采用高高效液相色谱谱方法进行含含量测定。结结果：阿魏酸酸平均回收率率为99.88%，RSDD为1.6%，薄薄层图谱斑点点清晰，阴性性对照无干扰扰。结论：结结果准确，方方法重复性好好。治伤活血胶囊由由当归、三七七、乳香（制制）、冰片、土土鳖虫、自然然铜（煅）、丹丹参、骨碎补补八味药经提提取加工制成

2、成。具补血活活血，调经止止痛，润肠通通便之功效，用用于血虚萎黄黄，眩晕心悸悸，月经不调调，经闭痛经经，虚寒腹痛痛，肠燥便秘秘，风湿痹痛痛，跌打损伤伤，痈疽疮疡疡等症。为有有效控制药品品的质量，本本文采用TLLC法对当归归；三七；冰冰片；丹参进进行了定性鉴鉴别，并采用用了HPLCC法对该方中中当归主成分阿魏酸酸进行了定量量控制。1、仪器与试药药Agilentt G13111A Quuat Puump，G11314A VWD，GG1379AA DEGAASSER，AAT-3300柱温箱，TThermoo- C188（250mmm4.6mmm，5um）色谱柱柱，硅胶G薄薄层板（自制制）。冰片对照品（

3、中中国药品生物物制品检定所所提供，编号号为11077432005004）。三七对照照药材为阳性性对照（中国国药品生物制制品检定所，批批号：12009412008007），丹参参酮IIA对对照品为阳性性对照（中国国药品生物制制品检定所，批批号：11007662004117），当归对照药材材（中国药品品生物制品检检定所，批号号：12099272005112）阿魏酸对照品品（中国药品品生物制品检检定所，批号号：07733-99100）塞多利斯斯全自动电子子天平，SGG2200HH超声波清洗洗器；色谱纯纯甲醇，其它试试剂均为分析析纯。2、定性研究2.1为方中冰冰片的薄层色色谱鉴别。取本品内容物11g，

4、加石油油醚（30-60）15mll，超声处理理2-3分钟，滤滤过，滤液低低温浓缩至约约1ml，作作为供试品溶溶液。另取冰冰片对照品，加加石油醚（330-60）制成每11ml含2mmg的溶液，作作为对照品溶溶液。取缺冰片的阴性样样品按供试品品溶液的制备备方法制成阴阴性对照溶液液。照薄层色色谱法（附录录VI B）试试验，吸取上上述三种溶液各55ul，分别别点于同一硅硅胶G薄层板板上，以石油油醚（30-60）醋酸乙酯（119：2）为为展开剂，展展开，取出，晾晾干，喷以55%香草醛硫硫酸溶液，在在105摄氏氏度烘数分钟钟。供试品色色谱中，在与与对照品色谱谱相应的位置置上，显相同同颜色的斑点点。阴性对照

5、照液色谱无干干扰（图1）。 图1冰片的TLLC图1、冰片对照品品 2、3、44、供试品溶溶液5、缺冰片阴性对照照溶液22当归的鉴鉴别取本品内容物66g，加乙醚醚40ml，超超声处理100分钟，滤过过，残渣备用用，滤液挥去去乙醚，残渣渣加乙醇2mml使溶解，滤滤过，滤液作作为供试品溶溶液。另取当当归对照药材材1g，同法法制成对照药药材溶液。取取缺当归的阴性样样品液按供试试品溶液的制制备方法制成成阴性对照溶溶液。照薄层层色谱法（附附录VI BB）试验，吸吸取上述三种溶液各5ul，分别别点于同一硅硅胶G薄层板板上，以正己己烷乙酸乙酯（99：1）为展展开剂，展开开，取出，晾晾干，置紫外外光灯（3665

6、nm）下下检视。供试试品色谱中，在在与对照药材材色谱相应的的位置上，显显相同颜色的的主斑点。阴阴性对照液色色谱无干扰（图图2）。图2当归的TLLC图1、当归对照药药材2、3、44、供试品溶溶液 5、缺缺当归阴性对照照溶液2.3三七的鉴鉴别取【鉴别】（22.2）项下下乙醚提取后后的残渣，挥挥尽乙醚，加加甲醇30mml，超声处处理15分钟钟，滤过，滤滤液蒸干，残残渣加水100ml使溶解解，移至分液液漏斗中，用用水饱和的正正丁醇振摇提取2次次，每次155ml，合并并正丁醇液，用用水洗涤2次次，每次100ml，正丁丁醇液蒸干，残残渣加甲醇22ml使溶解解，作为供试试品溶液。另另取三七对照照药材1g，加

7、加甲醇30mml同法制成成对照药材溶溶液。取缺三七的阴性样样品按供试品品溶液的制备备方法制成阴阴性对照溶液液。照薄层色色谱法（附录录VI B）试试验，吸取上上述三种溶液各22ul，分别别点于同一硅硅胶G薄层板板上，以正丁丁醇醋酸乙酯水（4：11：5）的上上层溶液为展展开剂，展开开，取出，晾晾干，喷以110%硫酸乙乙醇溶液，在在105烘数分钟。供供试品色谱中中，在与对照照药材色谱相相应的位置上上，日光下显显相同的主斑斑点；紫外光光灯（3655nm）下显显相同颜色的的荧光主斑点点。阴性对照照液色谱无干干扰（图3）。日光下 荧光下下 图3三七的TLLC图1、三七对照药药材 2、33、4、供试试品溶液

8、 55、缺三七阴性对照照溶液2.4丹参的鉴鉴别取本品内容物66g，加醋酸酸乙酯20mml，置水浴浴上加热回流流30分钟，滤滤过，滤液蒸蒸干，残渣加加乙醇1mll使溶解，作作为供试品。另另取丹参酮111A对照品品，加乙醇制制成每1mll含2mg的的溶液，作为为对照品溶液液。取缺丹参的阴性样样品按供试品品溶液的制备备方法制成阴阴性对照溶液液。照薄层色色谱法（附录录VI B）试试验，吸取上上述三种溶液各110ul，分分别点于同一一硅胶G薄层层板上，以苯苯醋酸乙酯（119：1）为为展开剂，展展开，取出，晾晾干。供试品品色谱中，在在与对照品色色谱相应的位位置上，显相相同的暗红色色斑点。阴性性对照液色谱谱

9、无干扰（图图4）。图4丹参的TLLC图1、丹参酮IIIA对照品 2、3、44、供试品溶溶液 5、缺缺丹参阴性对照照溶液3、定量研究3.1色谱条件件与系统适用用性试验 用十八烷基基硅烷键合硅硅胶为填充剂剂；乙腈甲醇1%醋酸溶溶液（1:11:5）为流动相；检测波长为为313nmm。理论板数数按阿魏酸峰峰计算应不低低于20000。3.2溶液的配配制对照品溶液的制制备 取阿阿魏酸对照品品适量，精密密称定，置棕棕色量瓶中，加加甲醇制成每每1ml含220ug的溶溶液，即得。供试品溶液的制制备 取本本品内容物约2.3g，精密密称定，置具具塞锥形瓶中中，加0.55%碳酸钠溶溶液20mll，超声处理理（功率15

10、50W，频率率20kHzz）30分钟钟，提取液移移至离心管中中，离心（转转速为每分钟钟3000转转）10分钟钟，取上清液液，置分液漏漏斗中，沉淀淀再用0.55%的碳酸钠钠溶液洗涤33次，每次110ml，洗洗液并入同一一分液漏斗中中，用2%氯氯化钠溶液饱饱和的乙醚洗洗涤3次，每每次20mll，弃去乙醚醚液，水溶液液用盐酸调节节ph值至112，再用2%氯化化钠溶液饱和和的乙醚振摇摇提取4次（225ml，225ml，220ml，220ml），必必要时离心消消除乳化层，合合并乙醚提取取液，回收乙乙醚至干，残残渣用甲醇溶溶解，转移至至25ml棕棕色量瓶中，加加甲醇至刻度度，摇匀，即即得（避光操操作）。测

11、定定时用微孔滤滤膜（0.445m）滤过，取取20l进样。阴性对照溶液的的制备 按处方取不不含当归的其其它药材制成成阴性对照样样品，按供试试品溶液制备备方法制备，以以上三种溶液液按上述色谱谱条件进样，测测定。结果阴阴性对照在阿阿魏酸峰相应应的保留时间间处无干扰。见见图6。图6-1阿魏酸酸对照品溶液液及治伤活血血胶囊供试品品溶液HPLLC图谱阿魏酸对照品溶溶液HPLCC图谱治伤活血胶囊供供试品溶液HHPLC图谱谱缺当归的阴性样样品溶液HPPLC图谱3.3线性关系系考察 精密称取阿阿魏酸对照品品10.6mmg，置500 ml量瓶瓶中，加甲醇醇溶液使溶解解，并稀释至至刻度。摇匀匀（212uug/ml）

12、，再再分别精密吸吸取对照品母母液适量，用用甲醇溶液稀稀释成不同浓浓度的对照品品溶液：100.6ug/ml、211.2ug/ml、422.4ug/ml、633.6ug/ml、844.8ug/ml。分别别 精密吸取取上述不同浓浓度的对照品品溶液各20ul，按按正文中色谱谱条件分析，测测定峰面积。以以峰面积积分分值为纵坐标标，进样阿魏魏酸的量为横横坐标绘制标标准曲线（见见阿魏酸对照照品溶液标准准曲线图），计计算得回归方方程：Y=550872115X+2228190,R=0.99990。表表明阿魏酸在在0.2122 ug1.696ugg范围内具有有良好线性关关系。具体数数据及标准曲曲线见下表。 线性关

13、关系考察结果果阿魏酸浓度（uug/ml）10.621.242.463.684.8阿魏酸的量（uug）0.2120.4240.8481.2721.696峰面积14344355.223563300.644527933.864941677.487971455以峰面积积分值值为纵坐标，阿阿魏酸的量为为横坐标绘制制标准曲线（见见阿魏酸对照照品溶液标准准曲线图）：阿魏酸对照品溶溶液标准曲线线图计算得回归方程程：Y=500872155X+2281190，R=0.99990。表明阿魏魏酸在0.2212 ugg1.6996ug 范范围内具有良良好线性关系系。3.4稳定性试试验 取本品内容物物约2.3g，研细，精

14、密密称定，按【含含量测定】项项下的方法制制备供试品溶溶液，进样，测测定，然后分分别于第2小小时、4小时时、6小时、88小时分别进进样，测定，对对其稳定性进进行考察。结结果见下表。稳定性试验结果果放置时间（h）峰面积RSD%0246822100500.622094500.422028099.421499633.121731844.11.23.5精密度试试验精密吸取阿魏酸酸对照品溶液液（21.22g/mll）20l，重重复进样5次次，测定峰面面积，（结果果见表4），阿魏酸酸峰面积积分分值的相对标标准偏差小于于2%，表明明此法精密度度良好。表4 精密度试试验结果实验次数峰面积RSD%12345222

15、2543322205488.62150592222074299.121664699.6 1.53.6重复性试试验分别取同一批治治伤活血胶囊囊样品5份，按按正文中含量量测定项下方方法试验，测测定阿魏酸的的含量，结果果见表5。样样品中阿魏酸酸含量的相对对标准偏差为为1.27%，表明此法法重复性良好好。表5 重复性性试验结果试验号 阿阿魏酸含量（uug/g） 平均含量量（ug/gg） RSD（%）1 212.992 218.443 216.88 2166.34 1.2774 219.45 214.223.7加样回收收率试验采用加样回收法法。取同一批批已知含量的的治伤活血胶胶囊精密称取取样品约1gg各

16、5份，分分别定量加入入阿魏酸对照照品适量，按按正文中含量量测定项下方方法测定阿魏魏酸的含量。结结果见表6，平平均回收率为为99.8%，相相对标准偏差差1.6%，表表明此法回收收率良好。实测阿魏酸量-取样相当阿阿魏酸量回收率= 1000% 加加入阿魏酸对对照品量表6 回收率试试验结果取样量（g）样品中阿魏酸量量（ug）加入阿魏酸量（ug）实测阿魏酸量（ug）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）1.24721.24931.24981.24071.2400269.8270.3270.4268.4268.3285285285285285553.3561.8539.7552.8550.899.5102.398.199.899.199.81.64、讨论治伤活血胶囊主主要由当归等八味药药组成，本次次实验对冰片片的研究时，曾曾比较了超声处理提取方方法，对比了了环已烷氯仿醋酸乙酯酯（9：1：2）展开剂剂，比较了紫紫外光灯下（3365nm）检检视方法，结结果以本文的的方法较好。实验对三七的研研究时，为了了更能控制产产品的质量，采采用三七对照药材为阳阳性对照，曾曾比较了：氯仿醋酸乙酯甲醇水（10：4：1