CH核酸的结构与功能课件

1、本章组成L1 核酸的化学组成及一级结构L2 DNA的结构与功能L3 RNA的结构与功能L4 核酸的理化性质L5 常用的核酸分离纯化技术本章组成L1 核酸的化学组成及一级结构重点、难点：基本概念:核苷酸 ,DNA、RNA, Tm等 DNA双螺旋结构模型的要点；mRNA、tRNA、rRNA的结构特点及功能； DNA变性与复性等核酸重要的理化性质及其应用。重点、难点：1869 Miescher isolated DNA for the first time. 确定了生物遗传的物质基础是DNA 核 酸(nucleic acid) 是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。1869 Mi

2、escher isolated DNA for核酸的元素组成特点: 一般不含有S元素。含P元素较多且恒定,可用于测定核酸含量。核酸的元素组成特点: 一般不含有S元素。第一节核酸的化学组成及其一级结构The Chemical Components and Primary Structure of Nucleic Acid第一节存在于细胞核和线粒体分布于细胞核、细胞质、线粒体(deoxyribonucleic acid, DNA)(ribonucleic acid, RNA)脱氧核糖核酸 核糖核酸携带遗传信息，并通过复制传递给下一代。是DNA转录的产物，参与遗传信息的复制与表达。某些病毒RNA也可

3、作为遗传信息的载体一、核酸可以分为核糖核酸及脱氧核糖核苷酸存在于细胞核和线粒体分布于细胞核、细胞质、线粒体(deoxy二、核苷酸是构成核酸的基本组成单位二、核苷酸是构成核酸的基本组成单位核酸(DNA和RNA)核苷酸核苷和脱氧核苷磷酸戊糖碱基嘌呤嘧啶核糖脱氧核糖核酸组成 核酸(DNA和RNA)核苷酸核苷和脱氧核苷磷酸戊糖碱基嘌呤嘧碱基(base)是含氮的杂环化合物。碱基嘌呤嘧啶腺嘌呤鸟嘌呤尿嘧啶胸腺嘧啶胞嘧啶存在于DNA和RNA中仅存在于RNA中仅存在于DNA中（一）碱基碱基(base)是含氮的杂环化合物。碱基嘌呤嘧啶腺嘌呤鸟嘌呤1、嘌呤(purine，Pu) 腺嘌呤(adenine, A)鸟嘌

4、呤(guanine, G)1、嘌呤(purine，Pu) 腺嘌呤(adenine,2、嘧啶(pyrimidine，Py)胞嘧啶(cytosine, C)尿嘧啶(uracil, U)胸腺嘧啶(thymine, T)2、嘧啶(pyrimidine，Py)胞嘧啶(cytosin3、“稀有碱基”（tRNA中最多）5mC3、“稀有碱基”（tRNA中最多）5mC（二）戊糖（构成RNA）12345核糖(ribose)（构成DNA）脱氧核糖(deoxyribose)（二）戊糖（构成RNA）12345核糖(ribos 嘌呤N-9或嘧啶N-1与核糖C-1通过-N-糖苷键相连形成核苷(ribonucleoside)

5、。（三）核苷NNNN9NH2OOHOHHHHCH2OHH12糖苷键11 AR, GR, UR, CR 嘌呤N-9或嘧啶N-1与核糖C-1通过-N-糖苷键相连脱氧核苷11HdAR, dGR, dTR, dCR嘌呤N-9 或嘧啶N-1与脱氧核糖C-1通过-N-糖苷键相连形成脱氧核苷(deoxyribonucleoside)。脱氧核苷11HdAR, dGR, dTR, dCR嘌呤N-核苷或脱氧核苷与磷酸通过酯键结合构成核苷酸(ribonucleotide)或脱氧核苷酸(deoxyribonucleotide)。（四）核苷酸(ribonucleotide) 1、核糖核苷酸： AMP, GMP, UMP

6、, CMP2、脱氧核苷酸：dAMP, dGMP, dTMP, dCMP NNNN9NH2OOHOHHHHCH2H12OPO-HOO糖苷键酯键核苷或脱氧核苷与磷酸通过酯键结合构成核苷酸(ribonucl3、多磷酸核苷酸3、多磷酸核苷酸环化核苷酸：cAMP、cGMP，是细胞信号转导中的第二信使。cAMP4、核苷酸衍生物环化核苷酸：cAMP、cGMP，是细胞信号转导中的第二信使。三、核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接形成的大分子一个核苷酸或脱氧核苷酸的3的羟基与另一个核苷酸或脱氧核苷酸5的-磷酸基团缩合形成磷酸二酯键(phosphodiester bond)。 多个核苷酸或脱氧核苷酸通过磷酸二酯键构成

7、了具有方向性的线性分子，称为多聚核苷酸或多聚脱氧核苷酸，即RNA链或DNA链。三、核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接形成的大分子一个核苷交替的磷酸基团和戊糖构成了RNA/DNA的骨架 (backbone)。核苷酸链的方向是5 3交替的磷酸基团和戊糖构成了RNA/DNA的骨架 (backb定义核酸中核苷酸的排列顺序。由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。5端3端CGA四、核酸的一级结构是核苷酸的排列顺序定义5端3端CGA四、核酸的一级结构是核苷酸的排列顺序A G P5 P T PG PC PT P OH 3 书写方法5-pApCpTpGpCpT-OH 3 5-A C T G C T

8、-3A G P5 P T PG PC PT P 第二节DNA的结构与功能Dimensional Structure and Function of DNA第二节DNA的空间结构又分为二级结构(secondary structure)和高级结构。DNA的空间结构(spatial structure)构成DNA的所有原子在三维空间具有确定的相对位置关系。DNA的空间结构又分为二级结构(secondary stru一、DNA的二级结构是双螺旋结构Watson and Crick: 1953年提出双螺旋结构模型, The Nobel Prize in Physiology or Medicine 19

9、62。一、DNA的二级结构是双螺旋结构Watson and CriDouble helix：The natural coiled conformation of two complementary, antiparallel DNA chains by the formation of A-T and G-C base pairs. Double helix：The natural coile不同生物种属的DNA的碱基组成不同同一个体的不同器官或组织的DNA碱基组成相同。A = T，G = CChargaff 规则（一）DNA双螺旋结构的研究背景获得了高质量的DNA分子的X射线衍射照片。提出了

10、DNA分子双螺旋结构(double helix)模型。不同生物种属的DNA的碱基组成不同Chargaff 规则（一（二） DNA双螺旋结构模型要点（B型）（二） DNA双螺旋结构模型要点（B型）两条多聚核苷酸链在空间的走向呈反向平行(anti-parallel)。两条链围绕着同一个螺旋轴形成右手螺旋(right-handed)的结构。双螺旋结构的直径为2nm，螺距为3. 4nm。脱氧核糖和磷酸基团组成的亲水性骨架位于双螺旋结构的外侧，疏水的碱基位于内侧。双螺旋结构的表面形成了一个大沟(major groove)和一个小沟(minor groove)。 1. DNA是反向平行、右手螺旋的双链结构

11、两条多聚核苷酸链在空间的走向呈反向平行(anti-paralCH核酸的结构与功能2. DNA双链之间形成了互补碱基对碱基配对关系称为互补碱基对(complementary base pair)。DNA的两条链则互为互补链(complementary strand)。碱基对平面与螺旋轴垂直。2. DNA双链之间形成了互补碱基对碱基配对关系称为互补碱基相邻两个碱基对会有重叠，产生了疏水性的碱基堆积力(base stacking interaction)。碱基堆积力和互补碱基对的氢键共同维系着DNA结构的稳定。3. 疏水作用力和氢键共同维系着DNA双螺旋结构的稳定。碱基堆积作用力相邻两个碱基对会有重

12、叠，产生了疏水性的碱基堆积力(base Z（三）DNA双螺旋结构的多样性Z（三）DNA双螺旋结构的多样性二、DNA的三级结构是超螺旋结构超螺旋结构(superhelix 或supercoil)DNA双螺旋链再盘绕即形成超螺旋结构。 正超螺旋(positive supercoil)盘绕方向与DNA双螺旋方同相同。 负超螺旋(negative supercoil)盘绕方向与DNA双螺旋方向相反。 二、DNA的三级结构是超螺旋结构超螺旋结构(superhel（一）原核生物DNA的闭合环状超螺旋结构原核生物DNA多为环状，以负超螺旋的形式存在，平均每200碱基就有一个超螺旋形成。（一）原核生物DNA的

13、闭合环状超螺旋结构原核生物DNA多为环DNA超螺旋结构的电镜图象DNA超螺旋结构的电镜图象右旋，再右旋右旋后，左旋右旋，再右旋右旋后，左旋CH核酸的结构与功能（二）真核生物DNA的高度有序、高度致密真核生物DNA以非常有序的形式存在于细胞核内。在细胞周期的大部分时间里，DNA以松散的染色质(chromatin)形式存在，在细胞分裂期，则形成高度致密的染色体(chromosome)。 （二）真核生物DNA的高度有序、高度致密真核生物DNA以非常DNA染色质呈现出的串珠样结构。染色质的基本单位是核小体(nucleosome)。DNA染色质的电镜图像DNA染色质呈现出的串珠样结构。DNA染色质的电镜

14、图像DNA：约200bp 组蛋白：H1 H2A，H2B H3 H4核小体的组成核小体：是真核生物染色体的基本结构单元。 核心颗粒核小体 连接区DNA：约200bp 核小体的组成核小体：是真核生物核小体串珠样的结构core particles Particles resulting from micrococcal nuclease digestion of nucleosomes, consisting of 140-bp DNA and the histone octamer of a nucleosome.核小体串珠样的结构core particles Partic真核生物的染色体8000

15、-10000倍真核生物的染色体8000-10000倍DNA的基本功能是以基因的形式负载遗传信息，并作为基因复制和转录的模板。它是生命遗传的物质基础，也是个体生命活动的信息基础。基因从结构上定义，是指DNA分子中的特定区段，其中的核苷酸排列顺序决定了基因的功能。 三、DNA是遗传信息的物质基础DNA的基本功能是以基因的形式负载遗传信息，并作为基因复制和两种最重要的生物大分子比较 项 目 蛋 白 质核 酸组成单位 氨基酸核苷酸种 类 20种A、C 、G 、T (DNA) A、C 、G 、U (RNA)连接方式 肽键磷酸二酯键一级结构 AA排列顺序碱基序列空间结构 二、三、四级结构 双螺旋、超螺旋、

16、蛋白 -核酸非共价结合功 能 生命活动直接执行者 遗传信息贮存、传代、 表达,决定蛋白结构两种最重要的生物大分子比较 项 目 蛋 白 质核第三节 RNA的结构与功能Structure and Function of RNA第三节 RNA的结构与功能Structure and FDNA并非是蛋白质的直接合成模板, DNA首先需要转录成为RNA（细胞核），再由指导合成蛋白（细胞质）。RNA通常以单链的形式存在，但有复杂的局部二级结构或三级结构。RNA比DNA小的多。RNA的种类、大小和结构远比DNA表现出多样性。DNA并非是蛋白质的直接合成模板, DNA首先需要转录成为RRNA的种类、分布、功能R

17、NA的种类、分布、功能细胞质中含量最少，约占。种类最多，一个基因往往有一种甚至多种mRNA。一级结构差异很大。一、mRNA是蛋白质合成中的模板1、mRNA的特点：细胞质中含量最少，约占。一、mRNA是蛋白质合成中的模板hnRNA 内含子(intron)mRNA 2、mRNA成熟过程： 外显子(exon)卵清蛋白mRNA的成熟hnRNA 内含子mRNA 2、mRNA成熟过程： 成熟的mRNA由氨基酸编码区和非编码区构成。 5-末端的帽子(cap)结构和3-末端的多聚A尾(poly-A tail)结构。 从AUG 开始，每三个核苷酸为一组编码了一个氨基酸，称为三联体密码(codon)。3、成熟的真

18、核生物mRNA成熟的mRNA由氨基酸编码区和非编码区构成。 3、成熟的真核帽子结构: m7GpppNmmRNA的帽结构可以与帽结合蛋白(cap binding protein，CBP)结合。 帽子结构: m7GpppNmmRNA的帽结构可以与帽结合蛋白真核生物的mRNA 的3-末端转录后加上一段长短不一的聚腺苷酸。Poly （A）尾巴AAAAAAAAAAAAAAAAA真核生物的mRNA 的3-末端转录后加上一段长短不一的聚腺mRNA核内向胞质的转位mRNA的稳定性维系翻译起始的调控 帽子结构和多聚A尾的功能mRNA核内向胞质的转位帽子结构和多聚A尾的功能4、 mRNA依照自身的碱基顺序指导蛋白

19、质氨基酸顺序的合成从mRNA分子5末端起的第一个AUG开始，每3个核苷酸为一组称为密码子(codon)或三联体密码(triplet code)。 AUG被称为起始密码子；决定肽链终止的密码子则称为终止密码子。位于起始密码子和终止密码子之间的核苷酸序列称为开放阅读框(open reading frame, ORF)，决定了多肽链的氨基酸序列 。4、 mRNA依照自身的碱基顺序指导蛋白质氨基酸顺序的合转运RNA(transfer RNA, tRNA)在蛋白质合成过程中作为各种氨基酸的载体, 将氨基酸转呈给mRNA。由70120核苷酸组成；占细胞总RNA的15%；具有很好的稳定性。二、tRNA是蛋白

20、质合成中的氨基酸载体转运RNA(transfer RNA, tRNA)在蛋白质合（一）tRNA中含有多种稀有碱基（一）tRNA中含有多种稀有碱基* tRNA的一级结构特点 含 1020% 稀有碱基（最多），如 DHU 3末端为 - CCA-OH 5末端大多数为G 具有 TC * tRNA的一级结构特点tRNA具有局部的茎环(stem-loop)结构或发卡(hairpin)结构。（二）tRNA具有茎环结构tRNA的二级结构三叶草形氨基酸臂DHU环反密码环TC环附加叉tRNA具有局部的茎环(stem-loop)结构或发卡(hatRNA的二级结构主要特征：1.三环四臂（部分还有额外环）2.氨基酸臂3

21、端有CCA-OH的共有结构3.D环上有二氢尿嘧啶（D）4.反密码环上的反密码子与mRNA相互作用5.可变环上的核苷酸数目可以变动6.TC环含有T和7.含有修饰碱基和不变核苷酸tRNA的二级结构主要特征：1.三环四臂（部分还有额外环）CH核酸的结构与功能tRNA的倒L三级结构tRNA的倒L三级结构核蛋白体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是细胞内含量最多的RNA(80)。rRNA与核蛋白体蛋白结合组成核蛋白体(ribosome)，为蛋白质的合成提供场所。三、以rRNA为组分的核蛋白体是蛋白质合成的场所核蛋白体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是细胞核蛋白体的组成原核生物（

22、以大肠杆菌为例）真核生物（以小鼠肝为例）小亚基30S40SrRNA16S1542个核苷酸18S1874个核苷酸蛋白质21种占总重量的40%33种占总重量的50%大亚基50S60SrRNA23S5S2940个核苷酸120个核苷酸28S5.85S5S4718个核苷酸160个核苷酸120个核苷酸蛋白质31种占总重量的30%49种占总重量的35%核蛋白体的组成原核生物（以大肠杆菌为例）真核生物（以小鼠肝为18S rRNA的二级结构18S rRNA的二级结构四、小分子RNA参与了基因表达的调控细胞的不同部位存在的许多其他种类的小分子RNA，统称为非编码小RNA(small non-messenger R

23、NAs, snmRNAs),其功能是调节基因表达。 snmRNAs四、小分子RNA参与了基因表达的调控细胞的不同部位存在的许多核酶某些小RNA分子具有催化特定RNA降解的活性，这种具有催化作用的小RNA亦被称为核酶(ribozyme)或催化性RNA (catalytic RNA)。 核酶某些小RNA分子具有催化特定RNA降解的活性，这种具有催RNA具有酶活性的发现Sidney Altman，Thomas R. Cech （1939-） （1947-） The Nobel Prize in Chemistry 1989 for their discovery of catalytic prope

24、rties of RNA RNA具有酶活性的发现Sidney Altman，Thoma核酸的理化性质The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid第四节核酸的理化性质第四节一、核酸是具有很强酸性的生物大分子核酸的酸碱及溶解度性质核酸为多元酸，具有较强的酸性。核酸的高分子性质一、核酸是具有很强酸性的生物大分子核酸的酸碱及溶解度性质核酸在波长 260nm 处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作核酸的定性和定量分析。二、核酸分子具有强烈的紫外吸收核酸在波长 260nm 处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所碱基的紫外吸收光谱

25、碱基的紫外吸收光谱三、DNA变性是双链解离为单链的过程在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程，其本质是双链间氢键的断裂。定义常见因素： 过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。三、DNA变性是双链解离为单链的过程在某些理化因素作用下，D协同性的DNA解链高温或极端的pHDNA的变性协同性的DNA解链高温或极端的pHDNA的变性部分变性DNA的电镜图像变性后理化性质变化：OD260增高粘度下降比旋度下降浮力密度升高酸碱滴定曲线改变生物活性丧失部分变性DNA的电镜图像变性后理化性质变化：OD260增高增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。DNA解链时的紫外吸收变化增色效应(hy