土三七对食管癌细胞超微结构的影响

1、土三七对食管癌细胞超微构造的影响付煜荣，薄爱华孙犁郭春燕白雪梅李海峰【摘要】目的研究土三七对食管癌细胞E-109超微构造的影响。方法培养的E-109细胞分别与土三七提取液作用3，6h后，通过透射电镜观察各实验组和对照组食管癌细胞的超微构造。结果电镜下可见实验组E-109细胞出现粗面内质网消失，核糖体减少；线粒体呈空泡状，大局部嵴消失。药物对癌细胞的杀伤作用随时间延长而增强。结论土三七对食管癌细胞超微构造有明显的破坏作用。【关键词】土三七食管癌细胞超微构造Abstrat:bjetiveTstudytheeffetfTusanqinultrastruturefesphagealarinaellsE

2、-109.ethdsAftertreatedithTusanqifr3,6hursrespetively,theultrastruturefesphagealarinaellsinexperientalgrupsandntrlgrupserebservedundertransissineletrnirspe.ResultsTusanqiresultedindisappearanefrughendplasiretiuluandthestfithndrialristaes,redutinfribse,appearanebubbleinplasse.Theseverityfinjuryfebranu

3、sstruturesinreasediththetieprlngingfTusanqiatin.nlusinTusanqihasdaageeffettultrastruturefesphagealarinaells.Keyrds:Tusanqi；Esphagealarinaell；Ultrastruture土三七为景天科景天属植物，是一种药食两用的植物，别名较多，如景天三七、费菜、养心草、血散、吐血草等。它在我国分布较广，尤其是河北、山西和内蒙等地更为多见。在临床和民间早有应用，具有凉血止血，散淤、消炎、安神、镇痛等作用1，2。目前土三七的药用开发工作刚刚起步，关于土三七制剂的抗肿瘤作用，鲜见

4、报道。我们利用电子显微技术，观察了土三七水提液对人源性食管癌细胞E-109株超微构造的影响，说明土三七对癌细胞的杀伤作用，为开发中草药抗癌制剂提供科学根据。1材料与方法1.1原料与试剂土三七采自河北张家口市区，经本校药师鉴定确认。E-109细胞北京市肿瘤研究所；RPI-1640GibBRL公司；胎牛血清天津川页生化制品。其余试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水。1.2仪器与设备透射电子显微镜JE100X-，日本；超薄切片机KD1508,日本；高效液相色谱仪(简称HPL,型号HP1100，美国Agilent公司。1.3土三七提取液的制备精细称取枯燥粉碎土三七0.8484g，加水20l，沸水浴3

5、0in,取上清液，药渣加水10l，再次提取30in。合并两次提取液，定容至25.00l。过大孔树脂处理，除去色素，得无色水溶液。无菌条件下过0.22微孔滤膜，密封4冰箱保存。经HPL检测没食子酸含量为126.7gl-13。1.4电镜样本制作选择对数生长期人源性食管癌细胞株E-109,调整细胞数为浓度5104/l，接种于6孔培养板，RPI-1640完全培养液(含15%胎牛血清,庆大霉素100gl-1)，置37,5%2孵箱中培养。待24h后癌细胞呈对数生长时,分对照组、加土三七提取液250l相当于分别参加生药15.9g，含没食子酸31.7g3)。再分别培养3h和6h。将细胞剐起，细胞经离心后常规2

6、.5%戊二醛及1%锇酸双重固定和Epn812包埋；超薄切片，厚度4050n。常规铀-铅染色，JE100X透射电镜观察摄像。2结果对照组癌细胞呈圆形，周围有较多微绒毛，胞质中有粗面内质网、核糖体、线粒体等。其中线粒体呈棒状或球形，其膜和嵴明晰可见；细胞核呈球形，常染色质多，异染色质少，呈中等电子密度，核仁大而较多见，图像见图1。3h组与6h组无明显差异。药物作用3h后，癌细胞周围微绒毛减少，或大局部消失，或缩短。胞质中粗面内质网消失；核糖体减少；线粒体呈空泡状，大局部嵴消失。损伤较严重的细胞那么有质膜断裂现象。细胞核异染色质明显增多，核仁可见。见图2。药物作用6h后癌细胞微绒毛消失，而且大局部细

7、胞质膜断裂或消失，细胞器溢出，有较多细胞碎屑。局部细胞的胞质中有较多空泡，其他细胞器很少见到。局部细胞的胞质中出现牛眼样次级溶酶体。胞核出现凹陷，核膜构造不清或大局部消失，核仁变形或消失。见图3。3讨论据报告景天三七SeduaiznL.，富含多种营养成分，如蛋白质、脂肪、糖和维生素，B；同时含有钙、磷、铁及锌、硒、铜等微量元素，因此作为新兴的保健蔬菜得到人们的重视和推广4。更可喜的是土三七中有丰富的药用成分没食子酸、多种酚酸、齐墩果酸、熊果酸、谷甾醇、黄酮类成分和生物碱等5。有报道在临床利用土三七汁治疗肺癌咯血，获得明显疗效6；治疗心血管疾病方面说明土三七具有改善微循环、化淤降压和宁心安神作用

8、7。将药物作用3h，E-109癌细胞出现膜性构造如质膜、线粒体膜和内质网受到损伤，说明药物对磷脂成分为主的构造有破坏作用。核内异染色质增多，说明核酸合成及代谢受阻。加药6h，局部细胞解体，形成碎屑；局部细胞中空泡增多和细胞器明显减少，胞核与胞质界限不清，说明药物对癌细胞具有杀伤作用，以细胞坏死为主。我们曾用药物作用24h，培养液中已很难找到癌细胞，提示药物对癌细胞的杀伤作用随着药物作用时间延长而增强。总之，通过本实验说明土三七对食管癌细胞超微构造有明显的破坏作用。今后有望利用土三七在抗癌防癌工作中另辟新径。【参考文献】1国家中医药管理局?中华草本?编委会.中华草本，第3册.上海：上海科学技术出版社，1999：765.2韩敏，赵莉.景天属植物研究进展J.安徽农业科学，2022，3311：2129，2141.3付煜荣，张万明，陈桂敏，等.景天三七中没食子酸和总酚酸含量测定J.中成药，2022，287：1016.4尚成武.景天三七的应用及栽培J.中国林副特产，2000，532：52.5