组织学绪论课件资料

1、 组织学绪论组织胚胎学教研室 组织学研究内容和意义 组织学发展简史和当代组织学（自学） 组织学技术简介 组织学的学习方法一、组织学研究内容 (一) 组织学研究内容组织学（histology）：是研究机体微细结构及其相关功能的科学。研究内容 组织（tissue） 细胞（cell） 亚细胞结构 分子水平。概念组织：由形态相似，功能相关的细胞及细胞外基质组成。器官：几种不同的组织相互结合组成器官，每器官 具有一定的形态结构，并完成一定的生理功能。系统：由多个器官联合组成，并完成连续的生理活动。 如消化系统。 基本组织（总论）：器官、系统（各论）：细 胞 组织 器官 系统 细胞外基质 上皮组织 结缔组

2、织 肌组织 神经组织二、组织学技术简介（一）一般光学显微镜术光镜下结构称光镜（light microscope LM) 结构； 放大倍数1000倍； 分辨率0.2m；组织制成薄片，以利光线通过。1.石蜡切片术(paraffin sectioning) 制片过程（1）取材（1.0cm3) 固定(甲醛） 酒精脱水（低-高） 透明（二甲苯） 浸蜡和包埋 切片（510 um） 展片和贴片； （2）脱蜡（二甲苯） 酒精（高-低） 水 苏木精-伊红染色 酒精脱水（低-高） 透明（二甲苯） 封片（树胶） （3）染色(staining)： 是用染料使无色组织切片着色，增加对 比度， 便于镜下观察。染色方法很多

3、，但没有一种 能使细胞全部结构同时着色。 常用的染色方法：苏木精（hematoxylin）：细胞核和胞质内的嗜 碱性物质着蓝紫色 。 伊红（eosin）：细胞质基质和间质内的胶 原纤维等着红色。 H.E2.特殊染色方法银染：用硝酸银将神经细胞染为黑色。醛品红染色：将弹性纤维染为紫色。甲苯胺蓝：将肥大细胞的分泌颗粒染为紫红色。活体染色：取动物组织材料之前活体静脉注射染料，观察巨噬细胞的吞噬情况。 疏松结缔组织光镜图 （腹膜铺片；胎盘蓝注射，醛复红与偶氮焰红染色)1、嗜碱性：细胞和组织的酸性物质或结构与碱性染料 （如苏木精）亲合力强，称嗜碱性。 2、嗜酸性：碱性物质或结构与酸性染料（如伊红）亲 合

4、力强，称嗜酸性。 3、中性：若与两种染料的亲合力均不强的。 4、亲银性：银染法中有些组织结构可直接使硝酸银还 原而显示，称此为亲银性。 5、嗜银性：有些结构无直接还原作用，需加入还原剂 方能显色，称此为嗜银性。 6、异染性：有些组织成分如结缔组织和软骨基质中的 糖氨多糖，当用甲苯胺蓝等碱性染料染色 后呈紫红色，这种现象称为异染性。名词：3.其他制片方法 冰冻切片：组织液氮骤冷，恒冷箱切 片机切片(糖类、脂类、酶、核酸等）。 涂片：将游离的细胞直接涂于切片上。 铺片：将疏松结缔组织或肠系膜等撕 成薄片铺在载玻片上。 磨片：骨和牙等硬组织可磨为薄片。 (二)电子显微镜技术 (electron mi

5、croscopy)光镜：分辨率为0.2m，放大倍数约为1000倍； 电镜：分辨率为0.2nm，比光镜高1000倍，可放大几万倍到几十万倍，因此电镜能观察到细胞的更微细结构。 在光镜与电镜下进行观察，常用的长度计量单位为毫米（mm）、微米（m）和纳米（nm）。 这些单位间的关系如下：m(微米)10-3mm(毫米)；nm(纳米)10-3m(微米)1、透射电镜 ：观察组织、细胞内部超微结构。 分辨率0.2nm。标本制备：1、固定 （戊二醛与锇酸等） 2、包埋（树脂） 3、切片（50-80nm) 4、染色（醋酸铀和柠檬酸铅等重金属） 标本在荧光屏上呈黑白反差的结构影像。 电子密度高：当电子束投射到密度

6、大吸附重金属多的结构时，电子被散射的多，散落到荧屏上的电子少而呈暗像，电镜片上呈黑或深灰色，称为电子密度高；电子密度低：被重金属浸染呈浅灰色，称电子密度低。2.扫描电子显微镜技术（scanning electron microscope） 扫描电子显微镜技术要观察的组织不需制成切片。 固定后的标本，在其表面喷镀金，在荧光屏上即可显示细胞或组织表面的立体结构。 如细胞表面的突起、微绒毛、纤毛等。2、扫描电镜 ：用于观察组织表面的立体结构。 分辨率5-7nm 组织化学术(histochemistry) 应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学原理和技术,与组织学技术相结合而产生的技术，在组织切

7、片定性、定位、定量的显示组织切片或细胞内某物质（糖类、脂类、酶、核酸、肽类、蛋白质等）存在与否及分布。细胞和学术;前述技术用于游离细胞样品。 1. 一般组织化学术基本原理是在切片标本上加某种试剂和组织中待测反应物发生反应，其终产物或为有色沉淀，以用光镜观察，或为重金属沉淀，以电镜观察。 1）糖类：PAS反应（过碘酸希夫反应）。 2）脂类：油红、尼罗蓝及苏丹类染料。 3）核酸：福尔根反应 DNA，甲基绿 派若宁反应 DNA绿色， RNA红色。 4）酶类：通过显示酶的催化活性，显示酶的存在。 PAS反应：(periodic acid Schiff reaction) 显示多糖和蛋白多糖的常用方法，

8、又称过碘酸希夫反应。过碘酸先将糖分子的乙二醇基氧化为乙二醛基，后者继而与Schiff试剂结合，形成紫红色反应产物。 2. 免疫组织化学术(immunohistochemistry) 应用抗原与抗体结合的免疫学原理，检测组织中肽和蛋白质的存在。肽和蛋白质均具有抗原性。当把人或动物的某种蛋白质作为抗原注入另外一种动物，其体内则会产生针对该抗原的特异性抗体，将抗体从动物血清中提取出后，与标记物相结合，即成为标记抗体。 常用的标记物（1）荧光色素（荧光显微镜） （2）酶（光学显微镜 ） （3）胶体金（多用于电镜） 免疫组化染色：用标记抗体与组织切片孵育，抗体则与组织中相应抗原特异性结合在显微镜下通过观

9、察标记物来获知待测肽或蛋白质的存在与否及分布部位。3.原位杂交技术：即核酸分子杂交组织化学术。其原理为带有标记物的已知碱基序列的核酸探针，与细胞内待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性原位结合，即杂交。然后对标记物的显示和检测来获得待测核酸的有无及相对量，常用的标记物为地高辛。 免疫组织化学原理模式图 抗原 抗体荧光素辣根过氧化物酶胶体金 原位杂交 脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性放射自显影术：通过 活细胞对放射性物质的特异性摄入以显示该细胞的功能状态、或该物质在组织和细胞内的代谢过程。体视学：根据连续的组织切片，应用计算机进行三维重建，以获得微细结构的立体模型。 细胞培养术 ：把 从机体取得的细胞模拟体内的条件下进行培养的技术 。组织工程：是用细胞培养术在体外模 拟构建机体组织或器官的技术。皮肤、软骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等。 体外培养的成纤维细胞（左）HeLa细胞（右） 倒置显微镜图 体外培养的平滑肌细胞 （免疫组织化学染色显示肌动蛋白）三、组织学的学习方法1、平面与立体