二轮复习单克隆抗体的过程课件

1、单克隆抗体温故知新：1.细胞工程的两大类型？各自的技术手段及其原理是？2.核移植的两大类型？其中提供细胞质的为去核的卵母细胞，为什么选去核的卵母细胞？3.动物细胞融合的实质，原理和方法？融合后的细胞叫？体积大，易操作；含有使细胞核的全能性容易表达的物质和营养条件植物细胞工程： 植物组织培养（细胞的全能性） 植物体细胞杂交 （细胞的全能性、细胞膜的流动性）动物细胞工程： 动物细胞培养（细胞增殖） 核移植（动物细胞核的全能性） 动物细胞融合（细胞膜的流动性） 单克隆抗体 （细胞膜的流动性、细胞增殖）传统的抗体生产方法及缺陷1.传统的生产方法: 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物

2、血清中分离所需要的抗体。 2.缺陷：产量低、纯度低，而且制备的抗体特异性差。 主要分布血清，还有的分布在组织液，外分泌液一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞融合单克隆抗体既能在体外大量繁殖，又能产生特异性抗体单克隆抗体浆细胞第一次筛选用特定的选择培养基帅选出杂交瘤细胞融合 在培养基中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！3种杂交细胞：B-B融合细胞、杂交瘤细胞 瘤-瘤融合细胞未融合的细胞：单个的B细胞、单个的骨髓瘤细胞这五种细胞中， 没有分裂能力，逐渐衰老死亡； 的DNA复制只有D途径， 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，也逐渐衰老死亡，

3、但的DNA复制有D、S两条途径，虽然D途径被氨基嘌呤阻断，但是还可以通过 S 途径进行DNA的复制，使细胞有分裂能力。 通常采用有限稀释法，将筛选出来的杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不多于一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞阳性孔方法抗原-抗体杂交法用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞。 抗原抗体杂交法检测呈阳性反应如何得到大量的单克隆抗体？单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量

4、制备。单克隆抗体第二次筛选杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内培养第一次筛选骨髓瘤细胞诱导细胞融合特异性杂交瘤细胞杂交瘤细胞系提取经过免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体的制备过程：特点：既能大量繁殖又能产生专一抗体特点：特异性强灵敏度高可大量制备注射抗原免疫高考热点：1.此过程中的B淋巴细胞是经过免疫的，实际上就是浆细胞。2.融合后形成的杂交细胞有多种，考虑两两融合，共有三种： B-B、B-瘤(杂交瘤细胞) 、瘤-瘤 3.单克隆抗体制备中用到的技术手段：动物细胞融合、动物细胞培养。 4.原理：细胞膜的流动性、细胞增殖 5.整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选用特定的选择培

5、养基， 筛选出杂交瘤细胞（多种） 第二次用多孔培养板， 筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。4、单抗隆抗体的应用作为诊断试剂定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。“生物导弹”单克隆抗体药物 导向 杀死癌细胞单克隆抗体的制备1、怎样获得能分泌专一抗体的B淋巴细胞？2、从何处获得较多的B淋巴细胞？3、用什么方法可以使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？4、怎样筛选出杂交瘤细胞？5、筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体都一样吗？6、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？7、怎样获得大量的单一抗体？反复注射特定的抗原，免疫小鼠。小鼠的脾脏PEG、灭活的病毒等利用