治疗性疫苗课件

1、关于治疗性疫苗第一张，PPT共四十七页，创作于2022年6月病毒方面，则已开展了对人类免疫缺陷病毒（HIV），单纯疱疹病毒（HSV），乙肝病毒（HBV）感染等的治疗性疫苗的研制。此外还研制了针对自身免疫病和肿瘤的治疗性疫苗。广义治疗性疫苗：是指在已感染病原生物或患某些疾病的机体中，通过诱生机体的特异性或非特异性免疫应答，以达到治疗或防止疾病恶化的生物制品。第二张，PPT共四十七页，创作于2022年6月一.治疗性疫苗发展的基础（foundation of curing vaccine development）治疗性疫苗虽已经历了近100年的历史，但近来重新引起了人们的重视，其主要原因是由于具备了

2、更好的基础。第三张，PPT共四十七页，创作于2022年6月1.微生物的持续性感染日益受到重视细菌及病毒均可引起持续性感染，例如结核病，麻风病，反复发作的葡萄球菌感染，HBV，HIV，HSVII，以及丙型肝炎病毒（HCV）感染等。由于微生物的急性感染较容易通过药物控制，持续性感染已成为棘手的重要问题。人们已逐渐认识到，为控制持续性微生物感染，必须考虑如何提高机体的免疫力 。第四张，PPT共四十七页，创作于2022年6月2.基因重组技术的发展与应用目前基因重组与表达技术已日趋成熟，不少微生物基因的表达产物已获得，并可对其生物学特性进行研究，提供了用于发展治疗性疫苗的组分。各种抗原成分的组合、拼接或

3、用微生物抗原基因与不同细胞因子基因组成表达嵌合性蛋白，或使表达蛋白与药物交联的治疗性疫苗为开发治疗性疫苗提供了广阔的前景。第五张，PPT共四十七页，创作于2022年6月3.免疫学理论的发展 由于对HIV免疫的研究，大大推动了抗感染免疫的理论发展。对不同感染过程中体液与细胞免疫应答的详细分析、抗原提呈、细胞内信号传递途径的进一步了解、微生物对免疫细胞感染所造成的后果、以及裸DNA免疫的机制等均对发展治疗性疫苗起了推动作用。第六张，PPT共四十七页，创作于2022年6月二.治疗性疫苗的特点（specialty of curing vaccine） 治疗性疫苗与预防性疫苗的根本不同点： 1）对象不同

4、：前者是已被感染或患病的机体，后者是健康的人群； 2）目的不同：前者用于治疗患者或防止疾病恶化，后者是用于预防； 3）应用不同：前者须考虑患者的禁忌症和适应症，后者对未被感染的人群。第七张，PPT共四十七页，创作于2022年6月研究注意以下特点：1.免疫原的选择与优化 治疗性疫苗所用免疫原的选择需在深入研究治疗对象的免疫应答基础上选定。根据病原学的特点，一般选用的微生物抗原应为能引起中和性抗体及可诱生杀伤性T细胞（CTL）免疫应答的抗原；但还必须考虑患者的免疫应答，即患者已产生和未产生的免疫应答。为了更有效地刺激患者的免疫应答，有学者开展了嵌合免疫原或联合免疫原型的疫苗。 第八张，PPT共四十

5、七页，创作于2022年6月2.动物模型的建立 为考核治疗性疫苗的疗效，需要建立模拟人体感染的动物模型。一种是在灵长类动物，如黑猩猩，猿猴中寻找相似的持续感染，如猴免疫缺陷病（SIV），或是在非灵长类动物中寻找类似感染，如类似人乙肝病毒的土拨鼠或鸭乙肝动物模型；或模拟人HSV，在雌性豚鼠中建立生殖道疱疹病毒感染等。另一种建立有病毒基因整合的转基因动物，如用HBV基因建立的转基因小鼠。 第九张，PPT共四十七页，创作于2022年6月3.临床应用的重要性 治疗性疫苗和预防性疫苗的很重要区别是前者需要临床医生的积极参与（禁忌症与适应症）。由于治疗性疫苗的对象是患者，因此常伴有免疫低或其他病理变化，在使

6、用疫苗时需较预防性疫苗更为慎重。选择对象时应有严格标准，对每种疫苗的疗效也应用不同的评价标准。在免疫应答出现时还可能伴有免疫损伤而出现不良反应，需要医生协同进行判断。第十张，PPT共四十七页，创作于2022年6月 第二节 治疗性疫苗的种类 （category of curing vaccine）1.根据治疗性疫苗针对疾病种类的不同可分为：细菌型治疗性疫苗；病毒型治疗性疫苗；肿瘤治疗性疫苗；自身免疫病治疗性疫苗。2.根据治疗性疫苗的作用机制可分为：特异性治疗性疫苗；非特异性治疗性疫苗。第十一张，PPT共四十七页，创作于2022年6月3.根据所用免疫原的种类可分为：核酸型治疗疫苗；重组蛋白型治疗疫

7、苗；天然蛋白型治疗疫苗；免疫复合物型治疗疫苗；嵌合型治疗疫苗。第十二张，PPT共四十七页，创作于2022年6月（一）非特异性治疗性疫苗（nonspecific curing vaccine）这类疫苗的特点为属非特异地诱生机体的细胞免疫应答，其作用较弱，一般均作为联合治疗的一部分。如卡介苗主要用于非特异地提高机体的细胞免疫，但作用较弱而被用作一种协同治疗，联合用于肿瘤病人。除卡介苗外，短小棒状杆菌（革兰氏阳性杆菌）以及其他的一些细菌均曾被用作非特异的治疗性疫苗。 第十三张，PPT共四十七页，创作于2022年6月（二）细菌型治疗性疫苗（bacteria curing vaccine）细菌性感染因有

8、抗生素等治疗，可以控制，故治疗性疫苗仅限于少数几种慢性感染，如结核病、麻风病及布鲁氏病等。20世纪初，为治疗金黄色葡萄球菌引起的反复发作的疖及痈，Wright采用自患者分离的加热灭活的葡萄球菌为治疗性疫苗，获得成功，奠定了细菌型治疗性疫苗的基础。第十四张，PPT共四十七页，创作于2022年6月1986年Convit曾报道联合使用灭活的麻风菌苗与卡介苗治疗300名麻风病人，结果可使60%的严重麻风病人病灶中清除麻风菌，并且降低了复发率。其机制为病人的特异性细胞免疫得以提高，并不再对麻风杆菌处于耐受状态。伦敦大学医学院的Stanford，从乌干达的土壤中分离了一株分支杆菌（Mycobacteriu

9、m vaccae），并用灭活的该菌苗联合药物治疗结核患者，联合疗法使87%的患者治愈，而单用药物治疗的患者仅有78%治愈。 近来，已经开始研究针对幽门螺杆菌感染的治疗性疫苗。由于幽门螺杆菌引起的感染为慢性，加上长期用药后总会发生耐药性，开展这一治疗性疫苗的研究有一定价值。第十五张，PPT共四十七页，创作于2022年6月第十六张，PPT共四十七页，创作于2022年6月（三）病毒型治疗性疫苗 （virus curing vaccine）在病毒型疫苗中研究的最多的是：生殖道单纯疱疹的治疗性疫苗，慢性乙肝治疗性疫苗，HIV感染的治疗性疫苗。目前这些疫苗已有临床研究的资料。此外，也有学者在研究HCV，人

10、类乳头状瘤病毒疫苗，并认为有可能用于治疗患者。 第十七张，PPT共四十七页，创作于2022年6月1单纯疱疹治疗性疫苗 1987年Stanberry 等在豚鼠的生殖道模型中发现，用HSV作预防性免疫，不仅可预防HSV感染，还可减少75%的病毒发作的次数与缩短病期。用克隆表达的HSV糖蛋白gD2也同样有效。实验中，疫苗明显地诱生了对HSV的中和抗体，并且使对gD2的抗体效价增高了4倍。由于抗体的效价并不与HSV的复发呈相关性，认为疫苗的效果可能与细胞免疫或细胞因子有关。治疗性疫苗可以改变病毒慢性感染（持续性感染）的病程。结果还提示可进一步修饰gD2抗原，或改变佐剂以提高疗效。第十八张，PPT共四十

11、七页，创作于2022年6月2人类免疫缺陷病毒（HIV）的治疗性疫苗 HIV感染导致的慢性进行性免疫缺陷，最终发生致死的严重后果。 HIV的包膜抗原成分gp160曾经克隆表达后，先用于正常人体，证明无毒性，以后1991年用于治疗30名处于HIV感染第1、2期的患者。第十九张，PPT共四十七页，创作于2022年6月最近，除gp160外，其他的HIV的包膜抗原，如gp120，p24病毒样颗粒、重组的金丝雀痘病毒gp160等疫苗均仍在研究中。第12届世界艾滋病大会，Valentine等已报道，用多种药物先治疗，再用灭活、但去除了gp120的疫苗免疫，可诱生强而显著的对p24的细胞增殖应答（Hoff，1

12、999）。这些发现又一次激发了对HIV治疗性疫苗的研制热情。第二十张，PPT共四十七页，创作于2022年6月 3.人类乳头状瘤病毒治疗性疫苗 人类乳头状瘤病毒（HPV）可引起皮肤疣，生殖道疣等，其中的某些类型是潜在的致宫颈癌的病毒。1999年已报道美国学者用HPV的L2E7融合基因表达蛋白治疗25名生殖道疣的II期临床研究结果。应用重组表达的HPV蛋白与Aldrogel（氢氧化铝类）共免疫，25名患者在治疗后8周完全清除了生殖道疣。第二十一张，PPT共四十七页，创作于2022年6月（四）裸核酸型治疗性疫苗 （naked nucleic acid） 1993年经Merck公司在流感病毒预防性疫苗

13、的研制中证实，裸DNA确有免疫原性后，已成为全球疫苗研究的最热点。作为治疗性疫苗，裸DNA已被用于治疗肿瘤、自身免疫病、传染病等。1.裸核酸作为治疗性疫苗（DNA疫苗）的优点（1）诱生表位-靶向免疫应答（2）扩大免疫原性的幅度（3）诱生CTL （4）便于加入免疫调控因子 第二十二张，PPT共四十七页，创作于2022年6月2.DNA疫苗用于肿瘤治疗用基因工程的方法修饰肿瘤细胞或免疫细胞，使其分泌某些细胞因子从而可诱生炎症反应或免疫应答，达到清除肿瘤的效果。由于肿瘤中很少具有特异性抗原，因此只能用转染细胞因子的基因进行研究。在肿瘤DNA免疫治疗中的另一个问题是，多次注入转染的基因细胞后，是否会引起

14、对细胞因子的免疫应答而失效或造成不良后果。第二十三张，PPT共四十七页，创作于2022年6月3.DNA疫苗用于治疗自身免疫病为研究DNA免疫是否可用于治疗自身免疫病，学者们用鼠的实验性自身免疫性脑炎（EAE），一种T细胞介导的自身免疫病模型进行了研究。实验证明，用针对致病V基因产物的单克隆抗体，或用致病性TCRV区的抗原决定簇合成肽免疫，均有治疗自身免疫性脑炎（EAE）的作用。这一结果显示DNA免疫在自身免疫病中可使TH1类免疫应答向TH2类免疫应答转化，从而对具有对多发性硬化症，青年型糖尿病，类风湿性关节炎等自身免疫性疾病有潜在的治疗作用。第二十四张，PPT共四十七页，创作于2022年6月4

15、.DNA疫苗用于治疗结核病 对于DNA免疫预防结核病的研究，在小鼠中显示了很好的效果。Tascon于1996年用编码分枝杆菌65kDa热休克蛋白（hsp65）的质粒DNA免疫小鼠，动物不仅可诱生特异的体液与细胞免疫，还可抵抗用结核杆菌的攻击。DNA免疫所获得的免疫保护作用可与用卡介苗免疫的效果相同。用hsp65蛋白免疫鼠则无此作用。用编码分枝杆菌另一种蛋白（36kDa富含脯氨酸）的DNA免疫也对小鼠具有保护作用。当以hsp65DDNA和IL-12DNA联合免疫则反而效果下降，说明互相有拮抗作用。当先用化疗，再用DNA免疫，则可清除结核菌，诱生特异的体液和细胞免疫。第二十五张，PPT共四十七页，

16、创作于2022年6月5.DNA疫苗用于治疗艾滋病 用编码HIV的gp160的DNA疫苗肌肉注射免疫，在动物中可诱生抗体。在猴免疫缺陷病毒感染的模型中，HIV DNA免疫也显示有一定疗效。Calarota等（1998）用编码HIV调控因子的基因组建的DNA疫苗治疗了9名无症状的HIV感染者，结果8名患者产生了特异的CTL，并且未发生副反应。MacGregor等（1998）对15例无症状的HIV感染者，用编码env和rev的DNA疫苗进行了注射。有些患者出现了gp120的抗体或对gp160的CTL。临床研究显示DNA免疫的安全性和潜在的肝免疫原性。第二十六张，PPT共四十七页，创作于2022年6月

17、第三节 乙型肝炎复合物型治疗性疫苗（ Curing vaccine of Compound HBV ）一.乙型肝炎治疗性疫苗的研究进展 （research advance）80年代初国外已有报道用乙肝预防性疫苗治疗HBsAg阳性儿童，无症状携带者及慢性肝炎患者的临床研究，均被证明无效。从90年代初，法国学者又开始了用预防性疫苗治疗乙肝患者的研究。1994年Pol等用重组GenHavacB疫苗（CHO细胞表达）的HBsAg+PreS2,20g/次，每月一次，共三次，治疗慢性乙肝患者，以后进一步用疫苗治疗加用干扰素，结果32名患者31%血清HBVDNA转阴，4名降低（13%）。 第二十七张，PPT

18、共四十七页，创作于2022年6月此后，巴斯德研究所开展了多中心双盲对照的大规模临床研究；Coullin等于1999年已报道在治疗者中，27名患者中的7名出现了对HBsAg的特异性淋巴细胞增殖反应及释放更高的TH1类的细胞因子。我国在这一研究中缺少双盲对照，及所用检测试剂的标准化与可比性间尚有不足之处。Chisari等以HBsAg为治疗性疫苗的病毒表位也做了许多工作。他们找到了能在HLAA2人体中诱生CTL应答的表位肽（p18-27）；Vitello等（1995）用该肽加入破伤风类毒素肽p830843，再加入2个分子的棕闾酸作为类脂成分，制成的治疗性疫苗（商品名为TheradigmHBV），可1

19、00%的诱生CTL。 第二十八张，PPT共四十七页，创作于2022年6月二.免疫复合物型乙型肝炎治疗性疫苗（ Immunocompound Curing Vaccine for HBV ）我国863高技术计划支持下，早在1988年起，已开始了对治疗性乙肝疫苗的研究。根据我国多数乙肝患者是幼龄感染乙肝病毒，加之慢性乙肝患者血清中无有效的抗HBsAg抗体及细胞免疫应答，研究课题组提出了多数患者处于对HBsAg免疫耐受的状态，而治疗性疫苗的抗原应以HBsAg为靶抗原，通过消除机体对HBsAg的免疫耐受性，以产生有效免疫应答的治疗患者的路线。分以下阶段进行。第二十九张，PPT共四十七页，创作于2022

20、年6月1.建立动物实验模型 利用鸭乙肝动物模型，研究幼龄感染鸭是否可造成模拟人感染的对HBsAg的免疫耐受状态。在获得确可建立实验动物模型的基础上，确立了免疫耐受动物模型的标准，规定了观察时间，以及判断消除免疫耐受状态的指标，建立了可供研究人乙肝免疫耐受状态的动物模型并进行了消除免疫耐受性的实验研究。第三十张，PPT共四十七页，创作于2022年6月2.探讨消除免疫耐受状态的治疗策略在主动免疫与被动免疫中进行了选择。主动免疫的优点为：注入有效的免疫原方法简单，安全性较高，通过调动机体本身的免疫应答，故有效持续的时间可较长。其缺点为，如患者的免疫应答普遍低下，则效果会较差。 第三十一张，PPT共四

21、十七页，创作于2022年6月被动免疫包括输入经细胞因子激活或改造的自身免疫细胞或输入具有对HBsAg强免疫应答的他人免疫细胞等。由于已证实被动输入抗HBs仅能短暂使血清中的HBsAg滴度下降，并无治疗作用，故不再考虑。被动免疫的操作复杂，选择对象严格，需特别防止污染，医疗环境的要求高。鉴于慢性乙肝感染者不同于HIV感染者或肿瘤患者，一般具有对抗原刺激的正常应答，仅为对HBsAg有免疫耐受，因此可定位于主动免疫。第三十二张，PPT共四十七页，创作于2022年6月主动免疫策略为： 改变抗原组分，使机体从免疫耐受转为识别抗原而产生免疫应答； 调节抗原提呈的方式或途径，使机体对经调节后提呈的HBsAg

22、产生免疫应答。第三十三张，PPT共四十七页，创作于2022年6月3.改变抗原组分在鸭乙肝病毒包膜抗原中用合成肽段及用合成肽免疫动物的方法，选择强免疫原性决定簇。最终发现鸭乙肝病毒PreS的第125146氨基酸的免疫原性强，用该肽段免疫所获得的抗体可与天然鸭乙肝病毒包膜结合。美学者证实该肽段位于中和性抗原表位中，更明确可用此肽作为候选治疗性疫苗。用该肽段与破伤风类毒素交联免疫耐受鸭，可以使50%鸭的病毒DNA转阴，但多次应用后效果未见提高。此后进行了用双肽共免疫的主动免疫法。第三十四张，PPT共四十七页，创作于2022年6月4.调节抗原提呈途径或方式对鸭乙肝病毒包膜抗原进行了三种不同的调节抗原提

23、呈实验。首先获得了鸭乙肝病毒编码的DHBsAg+PreS克隆，再通过与痘苗病毒重组，获得在细胞中可表达鸭乙肝病毒包膜抗原的重组痘苗。在正常鸭中，接种该重组株后，鸭血清中可测及DHBsAg。证明这一重组痘苗可在鸭体内表达抗原后，用以在免疫耐受鸭中进行治疗。结果显示，结合痘苗病毒的复制与抗原调节提呈DHBsAg，并不能有效地消除免疫耐受性（Ma,1996）。 第三十五张，PPT共四十七页，创作于2022年6月第二种调节的途径为，通过将DHBsAg与葡萄球菌Cowan I株，及抗DHBsAg组建成固相抗体抗原免疫原性复合物（SMAA），以调节DHBsAg的抗原提呈。用SMAA免疫耐受鸭后，可在约50

24、%的耐受鸭中清除DHBsAg，在60%70%鸭中清除病毒DNA，并在部分鸭中产生了抗DHBs（Wen，1994）。在SMAA实验中发现，单用DHBsAg+抗DHBsAg组建免疫原性复合物（IC，immunogenic complex），也具有可以在约50%耐受鸭中清除病毒及DHBsAg的作用（Wen，1996）。 第三十六张，PPT共四十七页，创作于2022年6月第三种对调节DHBsAg抗原提呈的研究是用抗原加特异的抗体可提高抗原的免疫原性，但用这种制剂消除免疫耐受的途径未见报道。经多次实验证实DHBsAg+抗DHBsAg组建成复合物，确能消除部分鸭的免疫耐受性。这一种治疗性疫苗的研制已获我国

25、发明专利（1997年授权）。第三十七张，PPT共四十七页，创作于2022年6月5.研制并开发可供人体应用的治疗性疫苗为尽快开发，可供人体应用的治疗性疫苗，选择了乙肝疫苗及人高效价抗乙肝免疫球蛋白（HBIG）组建免疫复合物型治疗性疫苗。在抗原抗体配比，制备疫苗的工艺，产品标化，效力试验的参比实验等技术方面进行了研究，与下游单位协同合作，现已进入中试。第三十八张，PPT共四十七页，创作于2022年6月6.研究复合物型疫苗的作用机制 为研究复合物型疫苗的作用机制，选用了免疫学基础研究较成熟的小鼠为研究模型。结果证明复合物型乙肝治疗性疫苗的作用机制为:1)通过复合物中抗体的Fc段，与抗原提呈细胞表面的

26、Fc受体结合，促进了细胞摄取抗原。当用酶消化去除抗HBs的Fc段，虽可形成抗原-抗体Fab段的复合物，但不能增强被巨噬细胞所摄取。第三十九张，PPT共四十七页，创作于2022年6月当用异种动物（如羊）的抗HBs组建复合物，因与鼠的巨噬细胞的Fc受体不相应，也不能促进抗原的摄入与提呈。2)复合物中的抗原经提呈后可比单纯抗原更有效地激活T细胞增殖，释放更多的-干扰素和IL-2，属TH1类应答。复合物在正常小鼠中诱生的抗HBS较单纯抗原诱生的抗体高10倍以上。第四十张，PPT共四十七页，创作于2022年6月第四节 治疗性疫苗的开发现状（exploitation status of curing va

27、ccine）目前，全世界发达国家与发展中国家的多数政府与企业均投入大量人力与物力开发治疗性疫苗。微生物的重组蛋白疫苗，因其抗原性及保护性抗原明确，而且预防性疫苗应用的基础较扎实，容易被批准，是开发的热点，短期内可见效果。肿瘤及自身免疫病的治疗性疫苗中的少数可能会有所发展，以肿瘤的可能较大，并且是作为综合治疗的一部分。DNA疫苗今后在一些微生物感染中的治疗性疫苗的作用不可低估第四十一张，PPT共四十七页，创作于2022年6月表8-1 治疗性疫苗的开发现状 治疗性疫苗针对的疾病 公司或单位 研制或临床研究阶段 疱疹病毒感染 Biocine，Rae Lyn Burke临床/期Smith Kline Beecham 临床/期Moncel Slaoul临床/期 乙型肝炎上海医科大学（863）计划与北京生物制品研究所临床前期巴斯