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1、离子交换层析ion exchange chromatography1一、原理 离子交换层析是用离子交换剂（具有离子交换性能的物质）作固定相，利用它与流动相中的某种离子进行可逆的交换性质来分离子型混合物的层析方法 2低盐高盐分离结束去吸附34带电荷不同蛋白质在特定pH值下有不同带电特性5胶体洗脱与树脂结合力离子交换树脂如何分离蛋白质6二、离子交换剂的类型在惰性载体上引入带有电荷的活性基团（一）按活性功能基团带电荷性质不同阳离子交换剂 带负电荷，与阳离子交换阴离子交换剂带正电荷，与阴离子交换 阴离子交换树脂对化学试剂及热都不如阳离子交换树脂稳定。胶体胶体71.离子交换树脂：(1)类型聚苯乙烯树脂：

2、（二）按载体种类不同苯乙烯二乙烯苯聚苯乙烯母体交联剂8聚丙烯酸阳离子交换树脂甲基丙烯酸 二乙烯苯特点：高交换量 pH电荷高者离子大者浓度大者1516（4）离子交换树脂对离子的亲和力阳离子树脂电价数：Na+Ca+Al+Ti+原子价数相同，原子序数 Li+Na+K+Pb+阴离子强碱性交换树脂CH3COO-F-OH-HCOO-CL-SCN-Br-CrO4=NO3-I-C2O4=SO4=弱碱性交换树脂F- CL- Br-= I- =CH3COOMo4=PO4=NO3-酒石酸根柠檬酸根C2O4=SO4=4条件下使用,具有羧甲基 2.离子交换纤维素183.离子交换凝胶分离大分子物质如：葡聚糖（Sephad

3、ex） 聚丙烯酰胺（PAG） 琼脂糖（Sepharose）19操作过程： 1.装柱 2.离子交换 3.洗脱2021带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来 22三、操作注意点（一）离子交换剂的选择原则： 根据被分离物质的性质选择同一性质离子交换剂中选用对被分离物质各组分之间结合力差异大的型号交换剂231.被分离物质带何种电荷2.被分离物质分子的大小 大分子物质选用凝胶，其次选用纤维素考虑因素：根据分离过程的实验条件 强酸强碱应用广泛 弱酸型只能在碱性范围内使用 弱碱型只能在酸性范围内使用243.被分离物质所处的环境4.被分离物质的物理化学性质5.被分离物质的大概数量25原则：不能发生化学反应，避免使样品变性（二）缓冲液的选择26 原则： 所用洗脱液比吸着物质具有更活泼的离子或基团 改变pH或离子强度 增强洗脱液与离子交换剂的结合力 降低分离物与离子交换剂的结合力 洗脱方式：梯度洗脱(三)洗脱剂27四、应用 分离多肽蛋白、氨基酸、核酸及其他带电的生物分子 28实验： 离子交换层析分离氨基酸29一、原理：Dowex50阳离子交换树脂 pH 4.2 + pI 9.7Mr 147pI 2.97Mr 1333031一、操作注意点：1、装柱和加样同凝胶层析 2、洗脱液（NaOH

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