薄荷油致小鼠肝毒性时量关系及其机理研究

1、薄荷油致小鼠肝毒性时-量干系及其机理研究刘红杰，金假设敏，张文斌，齐双岩，庞惠芳，周志兰【关键词】薄荷油小鼠肝毒性时间剂量毒效机理薄荷油pepperintil系从唇形科植物薄荷(enthahaplalyxBriq.)中提取的挥发油，在食品、药品、护肤、洗发等范畴被国表里普及应用。国表里曾报道服用大剂量薄荷油可致中毒13，本实行对薄荷油致小鼠肝毒性的时效、量效干系举行了研究，并对其大概存在的自由基损伤机理举行了开端探究。现报道如下。1东西1.2药物花生油，山东鲁花团体消费，批号20221231。100%薄荷油，上海香料总厂购置，批号20221207，根据?中国药典?2000版尺度消费，相对密度0

2、.8880.908，含酯量按醋酸薄荷酯(12H222)盘算为2.0%6.5%(g/g)，含总醇量按薄荷脑(10H20)盘算不少于50%(g/g)。四氯化碳，阐发纯，北京化工场消费，批号20010925。实行前以花生油将薄荷油与四氯化碳配制成所需浓度(V/V)。1.3试剂总胆红素TB试剂1，批号KF908；TB试剂2，批号KF914，均由和光纯药产业株式会社(AK)消费。碱性磷酸酶ALP试剂，批号ZG5002；丙氨酸氨基转移酶ALT试剂，批号ZG5001；天冬氨酸氨基转移酶AST试剂，批号ZG3004，均由济南希森美康医用电子(sysex)消费。SD检测试剂盒，批号20220629；DA检测试剂

3、盒，批号20220530，均由南京建成生物工程研究所提供。1.4仪器奥豪斯电子天平SR6010，奥豪斯国际商业上海消费；全主动生化阐发仪HITAHI7020，日本HITAHI公司消费；体系显微镜BX51/BX52，日本奥林巴斯光学株式会社消费；万能型脱水机，徕卡公司消费。722型可见分光光度计，上海细密科学仪器消费。2要领2.1口服半数致死量(LD50)测定取小鼠70只，牝牡各半，随机分为7组，每组10只。6个给药组在3.72.2l/kg之间根据等比级数(0.9)确定6个给药剂量。各给药组按0.1l/10g灌胃1次，正常组同时灌服等容量花生油。一连不雅察14d。不雅察并记载给药后的一样平常状态

4、和殒命环境，殒命小鼠肝脏解剖后肉眼不雅察。2.2口服“时间毒效干系研究取小鼠60只，牝牡各半，随机分为6组，按处置惩罚时间点依次为0，6，12，24，48，72h组。按0.1l/10g灌胃1次，0h组小鼠灌服花生油，别的各组灌服23%薄荷油。于相应时间点称量小鼠体重，摘眼球取血，3000r/in离心10in，取血清，以全主动生化阐发仪测定血清TB，ALP，ALT，AST。摘取小鼠肝脏，称重并盘算肝脏指数4。2.3口服“剂量毒效干系研究取小鼠48只，牝牡各半，随机分为4组，即正常组和薄荷油低、中、高剂量组。按0.1l/10g灌胃1次，正常组灌服花生油，薄荷油各剂量组别离灌服9%，15%，23%的

5、薄荷油。48h后，按“2.2要领测定血清TB，ALP，ALT，AST，盘算肝脏指数。另取一部门肝构造，通例HE染色，光学显微镜下不雅察其构造形态学变革。对肝构造形态举行病理分级、积分5：肝构造布局正常，无显着变性、坏死及炎症细胞浸润(0)，0分；肝小叶布局尚正常，可见显着的浑浊肿胀、气球样变或脂肪变性，散在点状坏死()，1分；肝小叶布局不清，可见显着的灶状坏死，伴有炎症细胞浸润()，2分；肝小叶布局不清、可见显着的片状坏死,伴有炎症细胞浸润(+)，3分；坏死细胞布满性存在于肝小叶中心，条理较多，伴有炎症细胞浸润(+)，4分。2.4肝毒性的自由基损伤机理研究取小鼠40只，牝牡各半，随机分为正常组

6、、薄荷油24h组、薄荷油36h组、四氯化碳组。按0.1l/10g灌胃1次，正常组灌服花生油，薄荷油组灌服23%薄荷油，四氯化碳组灌服5%四氯化碳。给药24h后，摘取正常组、薄荷油24h组、四氯化碳组小鼠肝脏；给药36h后，摘取薄荷油36h组小鼠肝脏。按试剂盒说明书操纵，分光光度计于550n波优点测定样品吸光度，盘算SD活力；于532n波优点测定样品吸光度，盘算DA含量。2.5统计要领Bliss法盘算LD50，LD10和LD1。Radit法对肝构造病理积分的数据举行统计阐发。计量资料接纳s表现，利用SPSS13.0软件举行统计处置惩罚，两组间比力接纳t查验法，多组间比力接纳单因素方差阐发法。P0

7、.05为差异有明显性。3效果3.1口服LD503.3口服“剂量毒效干系4讨论薄荷油应用非常普及，但对其毒性研究并不多。IleneB.Andersn等1报道了4例服用薄荷油中毒的病例，并回首了既往文献中18例服用薄荷油中毒的病例，这些病例的中毒重要表如今中枢神经体系、肝和肾方面。陈光明等2在小鼠薄荷油急性毒性实行中，不雅察到中枢神经体系毒性，其腹腔注射LD50为1144.978.5g/kg(根据薄荷油相对密度折算为1.3l/kg摆布)。VLT等3在离体实行中创造，0.5irL/L薄荷油可以导致离体造就的人肝脏细胞殒命。由于薄荷油多用于口服，因此为了更宁静利用薄荷油，相识其口仰药性特点及其机理，对

8、其举行毒性研究黑白常需要的。本实行对小鼠薄荷油LD50研究表现：小鼠口服大剂量薄荷油后可出现步履蹒跚，行走易向一侧跌倒等神经体系的毒性反响，还能对肝脏造成必然损伤；本实行小鼠口服薄荷油的LD50为3.0l/kg摆布，与陈光明等的报道有较大差异，这大概是由于给药途径差异造成的，而口服给药是临床最常用的给药途径，?中国药典?划定，成生齿服薄荷油一日不凌驾0.6l6，即小鼠的口服LD50，LD1约莫别离相称于成人常用量的300倍，170倍摆布。本实行对薄荷油致小鼠肝毒性时-效干系的研究表现：小鼠口服2.3l/kg的薄荷油后，血清TB，ALP，ALT，AST等肝成效指标随时间推移渐渐增高，在2448h

9、到达岑岭，然后渐渐落落，72h时可规复近正常；肝脏指数也出现同样的变革趋势。量效干系的研究表现：小鼠一次口服中剂量的薄荷油，即可出现血清ALP升高、肝细胞水肿等变革；一次口服高剂量的薄荷油，不但血清ALP，ALT，AST和肝脏指数等指标全面升高，并且肝细胞还可出现严峻水肿、脂肪变性、灶性坏死、片状坏死等改变；而小鼠口服低剂量的薄荷油，那么未见对肝脏有显着影响。这表白，服用薄荷油凌驾必然量后，可导致急性肝损伤，损伤可表现为肝成效乃至肝构造病理学的改变，并出现显着的量效干系，损伤岑岭出如今服药后2448h。本实行还对薄荷油肝毒性机制在自由基损伤方面作了开端研究。假设大量的自由基在肝细胞内产生，即可打击脂质、卵白质及核酸的双键布局，引发脂质过氧化物，导致质膜损伤。当细胞质膜受损时，膜通透性产生改变，存在于胞浆或线粒体内的ALT，AST开释到血液中，使血中ALT，AST活性升高。假设受损质膜完全失去完备性，细胞内容物倾出，可导致细胞殒命。测定肝构造SD和DA的含量可间接反响其脂质过氧化反响的程度及细胞损伤程度。在小鼠口服薄荷油的毒性岑岭期，SD明显低落而DA显着增高，光镜下可见肝细胞水肿、变性、坏死等改变，