产品无菌检验操作规程

1、PAGE PAGE 11文件编号号： 产品无菌菌检验操操作规程程编制 日期审核 日期批准 日期版号 生效日日期 公司公公司文件编号号版本号产品无菌菌检验修改次数数0作业指导导书页次/1目的通过无菌菌检验，确保灭灭菌后产产品能够够达到无无菌的要要求。2适用范范围适用于灭灭菌后医医疗器械械产品（列列举）的的无菌检检验。3检验依依据本厂产品品注册标标准（编编号）EN11174-19996医疗疗器械灭灭菌产品品中微生生物数量量的评估估中国药药典（20005年版版）GB1442333.2-20055医用输输液、输输血、注注射器具具检验方方法第二二部分：生物试试验方法法GB1559800-19995一一次

2、性使使用医疗疗用品卫卫生标准准4仪器、设备百级层流流超净工工作台、电热干干燥箱、电热恒温温培养箱箱、霉菌菌培养箱箱、压力力蒸汽灭灭菌器、集菌仪仪（器）、电子天天平、PPH计、冰箱、恒温水水浴锅、酒精灯灯、三角角烧瓶，接种环环、无菌菌棉签、镊子，试管架架，大试试管若干干等。5无菌检检验室的的环境要要求5.1 无菌检检验应在在环境洁洁净度1100000级下下的局部部百级的的单向流流空气区区域内进进行。5.2 缓冲区区与外界界环境、无菌检检验室与与缓冲区区之间空空气应保保持正压压，阳性性对照室室与缓冲冲区之间间空气应应保持负负压。无无菌检验验室与室室外大气气之间静静压差应应大于110Paa。无菌菌检

3、验室室的室温应保持118226，相对对湿度：4565%。5.3无无菌检验验室的单向流流空气区区、工作作台面及及环境应应定期按按医药药工业洁洁净室（区）悬悬浮粒子子、浮游游菌和沉沉降菌的的测试方方法的的现行国国家标准准进行悬悬浮粒子子、浮游游菌和沉沉降菌的的监测。每年至至少检测测一次。5.4 无菌检检验过程程中应同同时检查查超净工工作台单单向流空空气中的的菌落数数：每次操操作时在层流流空气所所及台面面的左中右右置3个个营养琼琼脂平板板，暴露露30mmin，于300355培养448小时时，菌落落数平均均应不超超过1CCFU/平板。6 无菌菌检验前前的准备备6.1 器具灭灭菌、消消毒6.1.1 灭灭

4、菌：试试验过程程中与供供试品接接触的所所有器具具必须采采用可靠靠方法灭灭菌。可可经电热热干燥箱箱1600以上干干烤2小小时，或或置压力力蒸汽灭灭菌器内内1211蒸汽灭灭菌300分钟后后使用（根据灭灭菌效果果验证决决定灭菌菌参数）。所有有的灭菌菌物品不不应超过过2周即即用毕，否则应应重新灭灭菌。6.1.2 消消毒：凡检验验中使用用的器材材无法灭灭菌处理理的，使使用前必必须经消消毒处理理。如无无菌检验验室的试试管架、电子天天平、工工作台面面、工作作人员的的手、橡橡胶吸头头等。可可采用消消毒剂浸浸泡或擦擦拭。消消毒剂应应每月更更换，以以防止产产生耐药药菌株。6.1.3标识：器具的的灭菌、消毒后后必须

5、做做好标识，标标明灭菌菌、消毒毒时间和和使用有有效期。6.2人人员、物物料进入入无菌检检验室6.2.1 开开启紫外外线灯或或臭氧发发生器进进行空间间灭菌处处理，消消毒时间间不得少少于300minn。6.2.2 物物料进入入无菌检检验室流流程6.2.2.11 脱包包：进入无菌菌检验室室的物品品若有双双重包装装的，需需将外包包装在传传递窗/缓冲间间拆除后后，传入入试验室室。6.2.2.2 消毒：进入无无菌操作作室的所所有培养养基、供供试品等等的外表表都应采采用适用用的方法法进行消消毒处理理，以避避免将外外包装污污染的微微生物带带入无菌菌检验室室。6.2.2.3 传递：查看所所有进入入无菌检检验室的

6、的器具上上的灭菌菌、消毒毒标识，是否在在有效期期内。符合要要求的经经传递窗窗传入无菌检检验室。6.2.3 人员员进入无无菌检验验室流程程6.2.3.11 更鞋鞋脱衣：在一更更区脱去去一般区区工作鞋鞋，穿上上无菌检检验室工工作鞋；脱去一一般区工工作服。6.2.3.22洗手：首先用用肥皂或或洗手液液在手上上揉擦出出泡沫，再用流流水连续续冲洗200秒，洗洗净泡沫沫。6.2.3.33 更衣衣：在二二更区按按照从上上到下的的顺序穿穿戴无菌菌工作服服（包括括衣、帽、口罩等等），要求裤子子掖在上上衣里，口罩掩掩住口鼻鼻，帽子子包裹所所有头发发。6.2.3.44 手消消毒：用用消毒液液浸泡双双手5秒秒以上或或

7、用浸过过消毒液液的棉球球擦拭双双手。消消毒液可可用洗必必泰、新新洁尔灭灭、碘伏伏、755%酒精精等。6.2.3.55 人员员进入：经缓冲冲间进入入无菌检检验室。6.2.4 人人员进入入无菌检检验室后后，进一一步用消消毒液擦擦拭工作作台面，戴无菌菌手套。7 无菌菌检验操作作要求7.1全全过程必必须严格格执行无无菌操作作，防止止微生物物污染。7.2 使用玻玻璃器皿皿应轻取取轻放，避免破破损，以以防培养养物扩散散。7.3所所有操作作均应在在近火焰焰区进行行，且不不得有大幅幅度或快快速动作作，以免免搅动空空气中的的尘埃微微粒。7.4 使用金金属接种种器具时时，用前前、用后后均需灼灼烧灭菌菌。7.5 在

8、接种种培养物物时，动动作应轻轻、准，防止培培养物溅溅出，产产生汽溶溶胶，造造成污染染。7.6操操作过程程中所有有的带菌菌物品，用后均应应作消毒毒、灭菌菌处理。可在检检验过程程中随用用随时放放入消毒毒液缸内内浸泡或或消毒桶桶内，或或在检验完成成后经传传递窗传传至一般般区，立立即用压压力蒸汽汽灭菌锅锅1211灭菌300分钟。8培养基基制备8.1需需气菌、厌气菌菌培养基基（硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基）的制备备8.1.1所用试试剂酪胨（胰胰酶水解解）15.00g葡萄糖55.0gL-胱氨氨酸0.5g硫乙醇酸酸钠0.5g（或硫乙乙醇酸）（0.3mll）酵母浸出出粉5.0g氯化钠22.5gg新配制的的0.1

9、%刃刃天青溶溶液1.0mll琼脂0.75g水10000mll8.1.2制备除葡萄糖糖和刃天天青溶液液外，取取上述成成分混合合，微温温溶解，调节ppH为弱弱碱性，煮沸，滤清，加入葡葡萄糖和和刃天青青溶液，摇匀，调节pH为77.10.2。8.1.3 硫硫乙醇酸酸盐流体体培养剂剂氧化层层的颜色色要求在供试品品接种前前，培养养基氧化化层的高高度不得得超过培培养基深深度的11/5，否刚需需经1000水浴加加热到粉粉红色消消失（不不超过220分钟钟）迅速速冷却，只限加加热一次次，并应应防止被被污染。8.2霉霉菌培养养基（改改良马丁丁培养基基）的制制备8.2.1所用用试剂胨5.00g酵母浸出出粉2.0g葡萄

10、糖220.0g磷酸二氢氢钾1.0g硫酸镁00.5g水10000 mml8.2.2制备备除葡萄糖糖外，取取上述成成分混和，微微温溶解解，调节节pH值值约为66.8，煮沸，加葡萄萄糖溶解解后，摇匀匀，滤清清，调节节pH为66.40.22。8.3 还可使用用按处方方生产的的符合规规定的脱脱水培养养基，按按照使用用说明书书配制。8.4 培养基基配制后后应尽快快灭菌，避免微微生物繁繁殖。一一般采用用高压蒸蒸汽1221灭菌300分钟。8.5 制备好的的培养基基应在22255保存，在3周周内使用用。8.6 培养基基的无菌菌性检查查每批配制制的培养养基均应应进行无无菌性检检查（可可与产品品无菌检检验同步步进行

11、）。检查查时，每每批培养养基随机机取不少少于5支支（瓶）培养114天，应无菌菌生长。9 稀释释液、冲冲洗液的的制备9.1 0.11%蛋白白胨水溶溶液取蛋白胨胨1.00g，加加水10000mml，微微温溶解解，滤清清，分装装后置入入压力蒸蒸汽灭菌菌器内，1211灭菌300分钟后后，于4保存备备用。9.2 pH77.0 氯化钠钠-蛋白白胨缓冲冲液取磷酸二二氢钾33.566g、磷磷酸氢二二钾7.23gg、氯化化钠4.30gg、蛋白白胨1.0g，加水110000ml。微温溶溶解，滤滤清，分分装后置置入压力力蒸汽灭灭菌器内内，1221灭菌300分钟后后，于4保存备备用。9.3 浸提介介质：99g/LL无

12、菌氯氯化钠溶溶液，可可直接从从有证单单位采购购大输液液。10 对对照菌液液制备10.11无菌检检验所用用的菌株株传代次次数不得得超过55代。10.22取金黄黄色葡萄萄球的普普通琼脂脂斜面培培养物，接种一一白金耳耳至营养养琼脂培培养基内内，在33035培养18244h后备备用，同同时制备备0.99%氯化化钠溶液液加入在在6支小小试管内内，每支支试管内内加9.0mll的0.9%氯氯化钠溶溶液，在在压力锅锅内经1121灭菌330miin备用用。将已已配好的的金黄色色葡萄球球菌培养养菌液取11.0mml加入入第一支支小试管管内，稀稀释成浓浓度1:10的的菌液；取第一一支试管管内1.0m l菌液液加入第

13、第二支小小试管内内，稀释释成浓度度1:1000的菌液液，同法法稀释成成浓度1:106（每mml含菌菌量1000CFUU）即可可。10.33 采用用平皿计计数法测测定活菌菌数。11 无无菌检验验培养温温度硫乙醇酸酸盐流体体培养基基，置330335培养。改良马丁丁培养基基，置223228培养。12 无无菌检验验12.11 如产产品注册册标准中中明确“产品应应经过一一个确认认过的灭灭菌过程程”，则执执行122.1项下下各项。12.11.1放放样每个灭菌菌批次按按已验证的灭灭菌工艺艺，在灭菌菌柜内相相应的位位置放置置适量菌片片，灭菌菌后对菌片进行行无菌检检验。12.11.2 菌片贮贮存灭菌前、后菌片片

14、应按菌菌片说明明书规定定条件保保存。（REVVEN公公司菌贮贮存温度度为15527）12.11.3 接种开启超净净工作台台单向层层流，在在此环境境下，分分别将灭灭菌后的的菌片成成对放入入已灭菌菌的硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基中中。同时以以金黄色色葡萄球球菌作阳阳性对照照，以未未接种的的硫乙醇醇酸盐流流体培养养基和未未接种的的改良马马丁培养养基作为为阴性对对照。12.11.4培培养阳性对照照管于3035细菌培培养箱培培养488722小时。其余硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基于于3035培养77天。改良马丁丁培养基基于233288培养77天。12.11.5结结果判定定培养后，阳性对对照应有菌生生长，阴性对

15、对照和被被检样品品未见需需气菌、厌气菌菌和霉菌菌生长的的为合格格。12.22 如产产品注册册标准中中明确产产品应进进行无菌菌检验，则则执行112.22.112.22.5。12.22.1 抽样根据各自自的产品品注册标标准和相相应产品品出厂检检验规程程的规定定，对成成品库内内的产品品进行抽抽样。一一般同一一个灭菌菌批产品品检验33111个单位位供试品品。12.22.2 供试液液准备优先采用用将供试试品或其其有代表表性的各各部分直直接投放放入培养养基内培培养的方方法，如如供试品品不适宜宜直接投投放，可可按下列列方法制制备供试试液，应应使浸提提介质充充分洗提提供试品品的浸提提表面，供试液液制备应应按无

16、菌菌操作法法进行，在制备备后2小小时内使使用。根据供试试品具体体特性选选择下列列方法：a) 管管类器具具：按管管内表面面积每10cm2流过管管内腔11ml浸浸提介质质，流量量约为110ml/minn，收集到到无菌的的容器内内。b) 容容器类器器具：按按容器内内表面积积每10cm2加入浸浸提介质质1mll的比例例，振摇摇数次。 c) 实实体类器器具：实实体类器器具按表表面及每每10cm2加入浸提提介质11ml，振摇数数次。收集上述述冲洗液液或浸提提介质于于无菌容容器中。12.22.3 接种12.22.3.1 薄薄膜过滤滤法：优优先采用用封闭式式薄膜过过滤器（集菌器器），也也可使用用开放式式薄膜过

17、过滤器。滤膜孔孔经不大大于0.45。滤器器和滤膜膜使用前前应采用用适宜的的方法灭灭菌，或或直接采采用无菌菌集菌器器。a、如采采用封闭闭式薄膜膜过滤器器，取一副副三联式集菌器器，将供试试液通过过集菌仪仪过滤，使通过过每只培培养管的的量基本本均匀。然后通通过集菌菌仪一只只加1220mll改良马马丁培养养基，另另两只分分别加入入1200ml硫硫乙醇酸酸盐培养养基（其其中一只只做阳性性对照，内加金金黄色葡葡萄球菌菌液1mll）。另另取一副副二联集集菌器，用同批批的冲洗液液或浸提提介质1120mml通过过集菌仪仪过滤（每只约约50mml），同法一一只加硫硫乙醇酸酸盐培养养基1220mll，另一一只加改改

18、良马丁丁培养基基1200ml分分别作阴阴性对照照。b、如用用一般薄薄膜过滤滤器，将将供试液液过滤后后取出滤滤膜，将将其剪成成3等份份，分别别置于含含50mml硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基及及改良马马丁培养养基的容容器中，其中两两份作检检验，一一份作阳阳性对照照。12.22.3.2 直直接接种种法：适适用于一一次性使使用注射射针、一一次性使使用静脉脉输液针针（包括括输液器器、输血血器、注注射器配配套使用用注射针针）。a、敷料料供试品品：取规规定数量量，每个个包装以以无菌操操作拆开开，于不不同部位位剪取约约1200mg或或1cmm3cmm的供试试品，接接种于各各管足以以浸没供供试品的的适量培培养基中

19、中。b、无菌菌针头：直接投投入含115mll以上硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基及改良良马丁培培养基的的容器中中。c、一次次性使用用的材料料：拆散散或切成成小碎断断，接种种于各管管足以浸浸没供试试品的适适量培养养基中。供试品按按规定量量分别接接种至各含硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基及改良良马丁培培养基的的容器中中，其中中一份作作阳性对对照。每个容器器中培养养基的用用量应符符合：接种的的供试品品体积不不得大于于培养基基体积的的10%，或培培养基的的装量足足以浸没没供试品品。每管培养养基的最最低用量量硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基每每管装量量不少于于15mml，改改良马丁丁培养基基每管装装量不少少于100 mll.12.22.4 培养、观察上述含培培养基的的容器分分别置规规定温度度的恒温温培养箱箱中，除除阳性对对照管培培养488722小时外外，其余余管培养养14天天。培养养期间